油料中苯并(a)芘含量的测定

魏利清，郝全英，俞 寅

(山西粮食质量监测中心，太原030024)

多环芳烃是一类广泛存在于环境、食品和生物体内的污染物。苯并(a)芘是多环芳烃中毒性最大的一种，是一种强致癌物，其对食用植物油的污染已引起世界各国的广泛关注[1-2]。许多国家和组织都对油脂中苯并(a)芘的安全限量做了严格规定，欧盟法规No 835/2011规定食用油中苯并(a)芘的最大限量为2 μg/kg，我国国标GB 2762—2017《食品安全国家标准 食品中污染物限量》规定油脂及其制品中苯并(a)芘的限量为10 μg/kg。

近年来，我国已将食用植物油列入食品质量安全监督抽检和风险监测重点监控食品目录，苯并(a)芘作为油脂的一项重要安全监测指标已被纳入检测计划。在国家食品药品监督管理总局对食用油及其制品的监督抽查信息中显示，在胡麻油、菜籽油、芝麻香油、棉籽油、花生油、茶油、葵花籽油中检出苯并(a)芘超标[3]。食用植物油中苯并(a)芘或源自原料在产前、产中、产后受大气、汽车尾气、土壤、水质、公路沥青和包装材料或容器的污染，或受到生产、输送设备中机油和石油加工成分的污染，或油料油脂中有机物在高温生产环节裂解产生[1]。苯并(a)芘污染严重的油料生产的植物油中苯并(a)芘含量可能会超标[4]。因此，研究油料中苯并(a)芘的污染状况对保障食用植物油卫生安全具有十分重要的意义。

目前，大多数的研究主要关注植物油中苯并(a)芘含量的检测，而对油料中苯并(a)芘含量检测的研究较少。为此，本文参照GB 5009.27—2016《食品安全国家标准 食品中苯并(a)芘的测定》建立油料中苯并(a)芘含量的测定方法，为收集油料苯并(a)芘含量数据及制定油料中苯并(a)芘安全限量值提供技术支持，从而更好地为油脂加工企业降低和控制食用植物油中苯并(a)芘含量提供参考。

1 材料与方法

1.1 实验材料

花生、大豆、胡麻：市售。正己烷、二氯甲烷、乙腈：色谱级，美国Grace公司。苯并(a)芘溶液标准样品：20 μg/mL±0.038 μg/mL，农业部环境保护科研监测所。

L-2000高效液相色谱仪(配自动进样器，荧光检测器)，日本日立有限公司；MS 204S分析天平，瑞士梅特勒-托利多天平；CG-7120粉碎机，中山市长柏电器实业有限公司；AH-30全自动均质器(配100 mL玻璃样品管)、Fotector Plus高通量全自动固相萃取仪，睿科仪器有限公司；SPT-16氮吹仪，北京斯伯特科技有限公司；QL-866旋涡混合仪，海门市其林贝尔仪器制造有限公司；苯并(a)芘分子印迹柱(500 mg，6 mL)，博纳艾杰尔科技有限公司；0.45 μm有机系微孔滤膜。

1.2 实验方法

1.2.1 样品预处理、提取及净化

预处理：将油料去除杂质，用粉碎机粗磨碎成2 mm以下的样品，储于洁净的样品瓶中，并标记，于室温下保存备用。

提取：称取1.000 g粗磨碎油料试样，置于100 mL玻璃样品管中，加入40 mL正己烷，用全自动均质器于10 000 r/min提取2 min，静置分层，将上清液转入60 mL玻璃样品管中，待净化。

净化：采用苯并(a)芘分子印迹柱，用高通量全自动固相萃取仪对提取液进行净化处理，具体净化条件见表1。

表1 全自动固相萃取仪净化条件

将净化液在40℃下氮气吹干，准确吸取1 mL乙腈旋涡复溶0.5 min，过0.45 μm有机系微孔滤膜后供高效液相色谱测定。

1.2.2 高效液相色谱条件

色谱柱，Eclipse PAH(4.6 mm×250 mm，5 μm，安捷伦科技有限公司)；流动相，乙腈-水(体积比88∶12)；流速0.9 mL/min；荧光检测器，激发波长384 nm、发射波长406 nm；柱温35℃；进样量50 μL。

1.2.3 标准曲线的制作

用乙腈逐级稀释苯并(a)芘溶液标准样品(20 μg/mL±0.038 μg/mL)，配制成质量浓度分别为0.5、1.0、5.0、10.0、20.0 ng/mL的标准系列工作液，按1.2.2仪器条件进行高效液相色谱测定，以标准系列工作液中的苯并(a)芘质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

1.2.4 方法的检出限和定量限

配制1份浓度接近于空白值的标准溶液，按1.2.2仪器条件平行测定20次得到测量信号，求得测量信号的标准偏差(S)，分别按式(1)、式(2)计算方法的检出限和定量限。

检出限=3S/b

(1)

定量限=10S/b

(2)

式中：S为测量信号的标准偏差；b为方法校准曲线斜率。

1.2.5 样品测定和加标回收率、精密度实验

按照1.2.1和1.2.2分别测定胡麻、大豆和花生样品中苯并(a)芘的含量。

在大豆、胡麻和花生样品中添加苯并(a)芘标准溶液，其添加水平分别为2.5、5.0 μg/kg和10.0 μg/kg，按照1.2.1和1.2.2进行加标回收实验，每个加标水平平行进行6次测定，计算加标回收率和精密度。

2 结果与讨论

2.1 标准曲线的绘制

按照1.2.3的方法对标准系列工作液进行高效液相色谱测定，得到苯并(a)芘标准溶液的色谱图及苯并(a)芘标准曲线，分别见图1和图2。

图1 苯并(a)芘标准溶液色谱图

图2 苯并(a)芘标准曲线

由图2可知，苯并(a)芘质量浓度(x)在0.5～20.0 ng/mL范围内与响应值(y)线性关系良好，线性方程为y=287 979x-7 022.9，相关系数R2为1.000 0，满足检测要求。

2.2 方法的检出限和定量限

按照1.2.4的方法进行测定，得到20次测量信号标准偏差(S)、方法的检出限和定量限见表2。

表2 方法的检出限和定量限

由表2可知，苯并(a)芘的检出限为0.05 μg/kg，定量限为0.18 μg/kg。

2.3 实际样品测定和方法的回收率、精密度

按照1.2.5的方法对样品及加标样品进行测定，计算加标回收率及相对标准偏差(RSD)，结果见表3。

表3 样品中苯并(a)芘的加标回收率及RSD(n=6)

由表3可知，大豆、胡麻和花生样品中均含有一定量的苯并(a)芘，样品加标回收率为71.9%～88.0%，RSD为1.24%～10.11%，满足含量在μg/kg级别的检测要求。

3 结 论

样品经全自动均质器用正己烷提取，提取液经全自动固相萃取仪用苯并(a)芘分子印迹柱净化，用高效液相色谱荧光检测器测定，建立了油料中苯并(a)芘的测定方法。方法的线性范围为0.5～20.0 ng/mL，检出限为0.05 μg/kg，定量限为0.18 μg/kg，加标回收率为71.9%～88.0%，相对标准偏差为1.24%～10.11%。

本方法使用全自动均质器和全自动固相萃取仪对样品进行提取和净化，样品前处理简单，无需专人守候，既节省人力又减少对人体的伤害。同时方法的准确度较高，重复性好，可用于油料中苯并(a)芘含量的测定。