宫颈鳞癌老年患者术后组织中ARMCX1和MMP-2的表达及意义

沈秀敏 王莉 刘伟 王雨艳 黄鑫

(锦州医科大学附属第一医院，辽宁 锦州 121000)

老年宫颈鳞癌与机体基因表达失常相关〔1，2〕。ARM重复X连锁蛋白(ARMCX)1是ARM重复蛋白家族中的重要成员〔3〕，在损伤后处于修复期的上皮中表达升高，对细胞增殖有一定的调控作用。对细胞外基质和基底膜有较强的降解作用，对细胞的迁移有促进作用的基质金属蛋白酶(MMP)-2是MMPs家族中的重要的成员，也称明胶酶A〔4，5〕。本研究应用流式细胞术半定量检测宫颈鳞癌老年患者术后组织中ARMCX1和MMP-2的表达差别，探讨其对肿瘤发生、发展的重要预测价值。

1 材料和方法

1.1临床资料 选择2016年1月至2017年12月锦州医科大学附属第一医院确诊为宫颈鳞癌的老年女性患者67例作为观察组，年龄60～86岁，平均68.1岁。纳入标准：①符合宫颈鳞状细胞癌的病理学诊断标准；②宫颈为肿瘤原发部位。排除标准：①转移性鳞癌；②合并其他器官恶性肿瘤；③有先天发育异常；④术前行放、化疗的患者。选取因子宫脱垂行子宫全切的非肿瘤性宫颈组织20例作为对照组，年龄60～78岁，平均69.2岁。两组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2ARMCX1和MMP-2的检测 均留取两组的新鲜标本，当时取材，75%酒精中固定备用，已剪碎标本组织在不锈钢网上过滤，2 500 r/min离心10 min后，取沉淀物，制备成单细胞悬液(1×106/ml)，取1 ml，严格按实验步骤加入一抗(ARMCX1或MMP-2)、磷酸盐缓冲液(PBS)及荧光二抗后上机检测，对结果进行分析。

1.3结果的计算及判定 应用荧光指数(FI)判断结果，并进行计算。FI=肿瘤中蛋白表达的荧光强度-对照样品平均荧光强度/正常对照样品平均荧光强度。

1.4统计学方法 应用SPSS18.0软件进行χ2检验、t检验和线性相关分析。

2 结 果

2.1两组ARMCX1和MMP-2蛋白表达量比较 观察组ARMCX1和MMP-2的表达量均显著高于对照组(P<0.01)。见表1。

表1 两组ARMCX1和MMP-2蛋白表达量比较

2.2观察组不同临床病理特征中ARMCX1和MMP-2表达量比较 观察组ARMCX1表达量与肿瘤组织学分型、脉管累犯、增殖指数及淋巴转移情况显著相关(P<0.05)。MMP-2表达量与肿瘤组织学分型、脉管累犯及淋巴转移情况显著相关(P<0.05)。见表2。

表2 观察组不同临床病理特征中ARMCX1和MMP-2表达量的比较

2.3观察组中ARMCX1和MMP-2表达的相关性分析 观察组中ARMCX1和MMP-2的表达具有显著正相关性(r=0.38，P=0.037 0)。

3 讨 论

老年人由于退行性变化及激素下降，常伴有宫颈上皮的萎缩，而萎缩上皮正常的细胞增殖能力下，但是在肿瘤性因素引发的异型增生时，其细胞的增殖程度高。老年人宫颈鳞癌常以非角化多见，肿瘤形成后浸润能力强，细胞的异型程度大，转移能力强，预后较差〔6〕。研究显示，与宫颈癌相关的转移蛋白的异常表达，对肿瘤进展有明显促进作用〔7〕。ARM家族蛋白均含有Armadillo repeat结构，首次在果蝇极性基因中发现，是生物大分子蛋白，其作用方式与其三维结构有关〔8〕。Armadillo repeat的特征是具有保守的结构，前后两个Armadillo repeat结构有折叠，形成右手螺旋的结构，基因全长4.2 kb，含有4个外显子，其编码区在第4个外显子上，编码区有453个氨基酸，分子量为46 kD〔9〕。Cartoni等〔10〕认为线粒体转运是神经和轴突生理的关键，这个过程影响神经元损伤反应，而ARMCX1可以调节此过程，并发现在高再生条件下，哺乳动物特有的编码线粒体定位蛋白基因在轴突切断后被激活，ARMCX1过表达能增强神经节的线粒体运输，提高细胞的增殖能力。ARMCX1具有N端的细胞分裂周期因子(CDC)25结构域，能通过催化4，5-二磷酸盐进行水解，产生二酯酰甘油，激发蛋白激酶C的过表达〔11，12〕。MMP-2在肿瘤进展时肿瘤细胞可以高度分泌。MMP-2的作用底物是Ⅳ型和Ⅴ型胶原，它能直接分解基底膜中的纤维连接蛋白，并能对层黏连蛋白起到一定的降解作用〔13〕。目前认为MMP-2还具有其他的作用，如对凋亡的抑制、对增殖的影响。有研究认为MMP-2对肿瘤间质的血管生成有促进作用〔14〕。苏敏等〔15〕通过观察MMP-2在卵巢癌中的表达，发现MMP-2表达升高，可以促进间质中血管内皮细胞的新生，相对于缺氧诱导因子(HIF)-1α和血管内皮生长因子(VEGF)，MMP-2是相对晚期的血管生成因子，即在肿瘤进展中MMP-2对血管生成的作用更明显。MMP-2通过其受体MMP-2R2发挥作用，引发肿瘤间质的血管生成，并能有效促进CD31、CD34等阳性血管内皮的生成〔16，17〕。

本研究发现宫颈鳞癌老年患者术后组织中ARMCX1和MMP-2的表达明显高于正常患者，提示二者高表达可以促进宫颈鳞癌的形成过程，二者具有癌基因样的生物学作用；观察组中ARMCX1和MMP-2的表达量与病变的脉管累犯及淋巴结转移密切相关，提示二者在脉管播散过程中有一定作用，也是判定肿瘤转移风险因子；二者的表达与病变分型相关，提示二者可能是临床病理分型的标记蛋白，而非角化型的预后较差，提示二者可能与预后有一定的关联；ARMCX1的表达与肿瘤的增殖指数密切相关，提示ARMCX1是增殖相关蛋白，其高表达时可以引起肿瘤细胞的生长；相关分析显示观察组中ARMCX1和MMP-2的表达具有正相关性。二者对肿瘤进展的作用可能是相关性的依据，但其机制可能完全不同，也不完全在同一通路上。ARMCX1的作用路径可能较少，对血管的调控可能是间接的，被认为是与机体中其他蛋白(VEGF)协同作用后，促进内皮细胞增殖〔18，19〕。ARMCX1分泌增加，引起肿瘤细胞生长和分化，具有调节肿瘤细胞增殖的作用。但是它可以通过调控P53和ras等基因，引起肿瘤的形成〔20〕。MMP-2可以有多种生物学功能，可以通过识别细胞黏附分子(ECM)及细胞膜上免疫蛋白超家族黏附分子、细胞间黏附分子等介导肿瘤细胞的黏附作用，并引起细胞信号传导异常及调节细胞生存和增殖。有研究认为整合素αvβ3上调后激活MMP-2，同时能增强其配体，更有效地促进细胞外基质的有效溶解，引发肿瘤细胞的迁移〔21〕。

综上，ARMCX1和MMP-2在老年宫颈鳞癌术后组织中表达明显升高，且具有协同作用，对肿瘤的形成和发展有一定的调节作用。