鼻窦炎口服液对急性鼻-鼻窦炎大鼠Galectin-9及其受体Tim-3表达的影响

马志跃（通讯作者） 李彬 冯勇 余晓旭 樊建刚 何刚

（四川省人民医学科学院·四川省人民医院耳鼻咽喉头颈外科 四川 成都 610072）

急性鼻-鼻窦炎（acute rhinosinusitis，ARS）临床表现为流脓涕、鼻塞、头昏等，严重影响患者日常生活[1]。Galectin-9/Tim-3已被证实可调控炎症反应[2]，因此，分子水平探讨Galectin-9、Tim-3与ARS发病关系，为预防和治疗ARS具有重要临床意义。鼻窦炎口服液已被证实对ARS具有有效性[3]。因此，本实验从鼻黏膜Galectin-9及其受体Tim-3为切入点，通过动物实验观察鼻窦炎口服液对ARS大鼠细胞因子及Galectin-9、Tim-3的影响，了解其对局部炎性病理改变的调节作用及机理，为临床研究提供理论依据。

1.资料与方法

1.1 实验动物与分组

24只健康SD大鼠，雌雄各半，200±10g，购于成都达硕实验动物有限公司，生产许可证号：SCXK（川）2015-030。实验动物随机分为空白组、模型组、鼻窦炎口服液组，每组8只，清洁级实验室饲养。

1.2 大鼠ARS模型构建

大鼠适应性喂养1周后，参考文献[4]报道的方法造ARS模型：腹腔注射10%水合氯醛（4.5ml/kg）麻醉，整个过程保持无菌操作。在大鼠右侧鼻腔用眼科镜置入修剪好的医用海绵，随即滴入0.1ml金黄色葡萄球菌悬液于医用海绵上，持续7d，造模后自由喂养，出现鼻塞、鼻腔可见黏脓性分泌物显示造模成功。

1.3 药物干预

大鼠造模成功后的第2天起开始给药，鼻窦炎口服液（重庆桐君阁药厂，批号：10090070）组以10ml/kg灌胃，空白组、模型组以5ml/kg无菌水灌胃，1次/d，连续7d。

1.4 样本采集

末次给药1h后，10%水合氯醛0.35g/kg腹腔注射麻醉，腹主动脉取血，离心取血清，4℃低温保存，待检测血清指标；剥离双侧鼻中隔黏膜，每只大鼠组织样本分成两份，一份于4%多聚甲醛固定，用于后续组织病理检测，另一份保存于-80℃，用于后续RT-PCR检测。

1.5 检测项目

将固定的鼻黏膜组织按常规方法制备石蜡切片，HE染色，镜检观察病理组织学变化；ELISA试剂盒（上海茁彩）检测大鼠血清IgE、IL-4、INF-γ含量；RT-PCR检测鼻黏膜Galectin-9、Tim-3mRNA表达。

1.6 统计学方法

运用SPSS20.0进行数据统计处理，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间差异采用单因素方差分析，P＜0.05差异具有统计学意义。

2.结果

2.1 病理组织观察

空白组鼻黏膜无炎症反应，模型组可见鼻黏膜水肿、充血，炎症细胞浸润，黏膜上皮坏死，鼻窦炎口服液组可见轻度水肿，炎症细胞明显减少，图1。

图1 大鼠鼻黏膜病理组织学变化

2.2 大鼠血清IgE、IL-4、INF-γ含量

造模成功后，模型组小鼠血清IgE、IL-4含量较空白组均明显增加，IFN-γ含量明显降低（P＜0.01）。通过鼻窦炎口服液干预，IgE、IL-4含量较模型组明显降低，IFN-γ含量明显升高（P＜0.01），见表1。

表1 各组大鼠血清IgE、IL-4、INF-γ含量

2.3 大鼠鼻黏膜Galectin-9、Tim-3 mRNA表达

造模成功后，模型组较空白组鼻黏膜Galectin-9、Tim-3 mRNA表达明显增加（P＜0.01）。经鼻窦炎口服液干预，Galectin-9、Tim-3 mRNA表达较模型组明显降低（P＜0.01），见表2。

表2 各组大鼠鼻黏膜Galectin-9、Tim-3 mRNA水平

3.讨论

ARS多由上呼吸道感染引起，严重者易造成邻近组织、器官受累引发严重病变[1]。因此，寻找有效的治疗方案极为重要。本实验采用鼻窦炎口服液治疗ARS大鼠，病理组织考察结果表明，模型组鼻黏膜充血、黏膜上皮坏死，鼻窦炎口服液干预后炎症细胞明显减少，黏膜上皮轻度缺损，可明显减轻鼻黏膜病理损伤。

目前Th1/Th2细胞失衡被认为是发病核心，而INF-γ、IL-4分别是Th1、Th2的重要细胞因子。当Th1反应偏向Th2反应，则致IL-4分泌增加，INF-γ分泌减少，而IL-4进而上调免疫球蛋白（IgE），IgE是触发呼吸道变应性炎症的关键因素[5]。本实验结果显示模型组较空白组IgE、IL-4含量明显増加，INF-γ明显降低（P＜0.01），说明ARS发生了Th2的偏移。鼻窦炎口服液干预后IgE、IL-4含量较模型组明显降低，INF-γ含量明显增加（P＜0.01），说明鼻窦炎口服液能有效促进形成新的Th1为主的平衡。

Galectin-9-Tim-3在炎症调节中起重要作用。Galectin-9可诱导Th1极化并可阻止IgE抗原抗体复合物的形成。Tim-3可在活化的Thl细胞表面特异性表达，抑制Thl介导的细胞免疫[6]。同时，鼻黏膜局部Galectin-9、Tim-3表达与外周血IL-4、IFN-γ含量存在明显相关性，Galectin-9通过与Tim-3结合可抑制Th1免疫应答，诱导炎症因子产生，引起鼻腔黏膜水肿、鼻分泌物增加、上皮细胞损伤[7]。本实验结果显示Galectin-9、Tim-3 mRNA表达模型组明显高于空白组（P＜0.01），提示Galectin-9、Tim-3可能是导致鼻腔炎症表现的因素之一。鼻窦炎口服液干预后Galectin-9、Tim-3 mRNA表达较模型组明显降低（P＜0.01），说明鼻窦炎口服液可影响Galectin-9、Tim-3表达。

综上所述，鼻窦炎口服液可有效抑制Galectin-9、Tim-3表达，平衡细胞因子，提示Galectin-9/Tim-3参与ARS发展过程，Galectin-9/Tim-3可作为治疗ARS新的方向。