西洋红参炮制工艺优化的研究

闫福源，周 爽，王任晶，许 宁，崔长升，齐 滨，刘 莉

（长春中医药大学，长春 130117）

西洋参又名花旗参，为五加科植物西洋参（Panax quinquefolium L.）的干燥根，原产美国北部和加拿大南部，根性凉，能补气养阴、清热生津[1-3]。由于鲜西洋参不能长途运输，只能晒干后进入中国，所以西洋参的加工产品的研究鲜有报道，只加工成生晒参类单一品种[4]。西洋参在我国引种成功后，逐渐代替了进口西洋参，产量逐年增加，到2017年年底全国产量可达200吨。西洋参至今加工品种仍然是传统的单一生晒参类，已远远满足不了人民保健事业的需要。

将西洋参加工成西洋红参后，水解酶、淀粉酶、麦芽糖酶等受到破坏，防止了皂苷类成分的水解，并且质地坚硬，使有效成分得到保护，也会有新成分产生，具有很大的医疗价值，如已知的有美拉德反应生成的是延缓衰老的精氨酸葡萄双糖苷[5]。现代药学研究显示，西洋参炮制品西洋红参对于提高免疫力、抗疲劳及抗心肌缺血等多方面均具有较好的活性，而提高免疫力活性为其最主要的应用价值之一[6]。从检索文献[7-11]得出红参的炮制过程可分为净制、蒸制、烘干、晾晒、二次烘干5个过程，有研究表明，炮制和烘干时间及温度的不同对于西洋红参的化学成分影响均较大，故对于该药物的药理活性亦具有一定的影响[12-13]。

相比较红参而言，对于西洋红参的研究目前还比较少，其炮制工艺及化学成分的研究还不够深入。因此，建立西洋红参的炮制方法及相应的质量标准，系统深入研究西洋红参化学成分，特别是人参皂苷类成分，具有很高的科研价值。

1 材料

1.1 仪器 电热恒温水浴锅（上海精宏实验设备有限公司），SHBⅢ-S循环水多用式真空泵（郑州长城科贸有限公司），OSB-2100旋转蒸发仪（上海爱朗仪器有限公司），KQ-500DA型数控超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司），Agilent 1220LC-高效液相色谱仪（安捷伦1220科技有限公司），JT1001N精天电子天平（上海精天电子仪器有限公司）。

1.2 试药 人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1，均由北京恒元启天化工技术研究院提供。乙醇为分析纯，甲醇和乙腈为色谱纯，水为超纯水，西洋参均来自中国吉林省通化市。

2 方法

2.1 西洋红参的炮制实验 经查阅文献及参考厂家的制作加工工艺，完成如下的实验设计。实验因素水平见表1，实验方案见表2。

表1 实验因素水平

表2 三因素三水平实验方案设计

2.2 西洋红参中人参皂苷的含量测定实验

2.2.1 对照品溶液的制备 分别取人参皂苷Rg1标准品、人参皂苷Re标准品和人参皂苷Rb1标准品适量，精密称足，加甲醇制成每1 mL各含人参皂苷Rg1 0.1 mg、人参皂苷Re 0.4 mg和人参皂苷Rb1 1 mg的混合溶液，摇匀，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取样品粉末约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入40 %乙醇50 mL，加热回流1 h，放冷，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液25 mL，减压蒸干，残渣用40%乙醇溶解并转移至5 mL量瓶中，加40%乙醇稀释至刻度，即得。

2.2.3 色谱条件 色谱柱：Aglient Eclipse Plus C18（4.6×250 mm，5 μm）柱；流动相：乙腈（A）-水（B）；流速为1 mL/min；柱温：35 ℃；波长：203 nm；进样量：10 μL；流动相梯度见表3。

表3 梯度洗脱条件

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系考察 分别精密吸取三种人参皂苷Rg1、Re和Rb1标准品溶液进样，以人参皂苷含量为横坐标，峰面积为纵坐标，分别绘制三种人参皂苷Rg1、Re和Rb1的标准曲线，得到以下三种人参皂苷的回归方程，见表4。

表4 人参皂苷线性关系考察

2.3.2 精密度试验 分别精密吸取同一西洋红参供试品溶液10 μL，重复进样6次，测得各色谱峰峰面积和保留时间，分别计算标准偏差，得人参皂苷Rg1、Re和Rb1峰面积的RSD值分别为0.28%、0.41%和0.39%，结果表明仪器的精密度良好。

2.3.3 重现性试验 取同一西洋红参样品5份，按2.2.1处理方法将其制成供试品溶液，按2.2.3液相色谱条件，分别进样测定，测得各色谱峰峰面积和保留时间，分别计算标准偏差，得人参皂苷Rg1、Re和Rb1峰面积的RSD值分别为1.88%、1.94%和1.65%，结果表明方法重现性良好。

2.3.4 稳定性试验 精密吸取西洋红参供试品溶液 10 μL，分别在配制后的 0、2、4、6、8、12、24 h进行进样测定，结果供试品溶液中各人参皂苷在24 h之内峰面积无明显变化，分别计算其标准偏差，得人参皂苷Rg1、Re和Rb1峰面积的RSD值分别为1.55%、0.84%和1.22%，结果表明供试品溶液24 h之内在该溶液中化学性质稳定，本法适用于其含量测定。

2.3.5 加样回收率试验 分别精密称取西洋红参样品3份，分别加入已精密称定的人参皂苷，按2.2.1处理方法将其制成供试品溶液，按2.2.3液相色谱条件测定人参皂苷含量，分别计算加样回收率，结果表明人参皂苷Rg1、Re和Rb1的加样回收率分别为99.2%、98.8%和98.3%，RSD值分别为1.77%、1.62%和1.58%。

3 结果

九份西洋红参样品中人参皂苷Rg1、Re和Rb1的含量，见表5。

表5 九份西洋红参样品中三种人参皂苷Rg1、Re和Rb1的含量 %

4 讨论

本实验通过正交实验设计，根据蒸制时间、烘干温度和烘干时间炮制出九份不同条件下的西洋红参的样品。

通过用高效液相色谱法对九份西洋红参样品中的人参皂苷Rg1、Re和Rb1三种单体皂苷进行含量测定，确定了蒸制时间、烘干温度和烘干时间三个条件对人参皂苷含量影响的大小顺序，结果显示：对人参皂苷Rg1的含量影响的大小顺序是烘干时间＞蒸制时间＞烘干温度；对人参皂苷Re的含量影响的大小顺序是烘干时间＞蒸制时间＞烘干温度；对人参皂苷Rb1的含量影响的大小顺序是烘干温度＞烘干时间＞蒸制时间。通过对九份西洋红参样品中三种人参皂苷Rg1、Re和Rb1含量之和的正交分析结果得到了蒸制时间、烘干温度和烘干时间三种因素对三种人参皂苷的影响大小顺序为：烘干温度＞蒸制时间＞烘干时间，确定了西洋红参炮制的最佳工艺为蒸制时间3 h，烘干温度70 ℃，烘干时间10 h。

综上所述，本实验用高效液相色谱法对九份西洋红参样品进行含量测定，可以为建立西洋红参的炮制规范和质量标准提供一定的参考依据。