外周血microRNA-146a水平与冠状动脉病变严重程度的相关性

朱秀兰　于长青　闫庆凯　谢凤

【摘要】目的探究冠狀动脉粥样硬化性心脏病患者外周血微小核糖核酸-146a（microRNA-146a）表达水平与其冠状动脉病变严重程度的相关性。方法将120例住院治疗的冠心病患者作为观察组，按病情严重程度分为轻度组（Gensini评分<25，n=48）和中重度组（Gensini评分>25，n=72），另选取同期门诊体检的60例健康人作为对照组。测定所有研究对象血浆microRNA-146a表达水平，以及促炎介质肿瘤坏死因子-a（tumornecrosisfactor-a，TNF-a）和干扰素-γ（interferon-γ，IFN-γ），抗炎因子白介素-10（interleukin-10，IL-10）的表达水平。分析血浆microRNA-146a表达水平与患者病情的相关性。结果观察组血浆microRNA-146a表达水平明显高于对照组，且中重度组microRNA-146a表达水平明显高于轻度组，差异均具有统计学意义（均P<0.05）;血浆microRNA-146a表达水平与TNF-a、IFN-γ和Gensini评分呈正相关（r=0.56～0.71，P<0.01），与IL-10呈负相关（r=-0.49，P=0.02）。结论冠状动脉粥样硬化性心脏病患者外周血microRNA-146a表达水平与其冠状动脉病变严重程度有较好的相关性，值得在临床推广应用。

【关键词】微小核糖核酸-146a;冠状动脉粥样硬化性心脏病;Gensini评分

中图分类号：R54

文献标识码：A

文章编号：1009-816X（2019）06-0504-03

doi：10.3969/j.issn.1009-816x.2019.06.005

The Correlation Study between Plasma MicroRNA-146a Level and the Severity of Coronary Artery Lesion. ZHU Xiu-lan ， YU Chang-qing， YAN Qing-kai， et al. Department of Cardiovascular Medicine， People ' s Hospital of Bishan District ， Chongqing 401320， China

[Abstract] Objective To explore the corelation between plasma micoRNA-146a level and severity of coronay artery lesion . Meth ods 120 cases of hospitalized patients with coronary heart disease were obtained as observation group . According to the severity of le sion ， the patients were divided into mild group （ Gensini score < 25 ， n = 48 ） and moderate-severe group （ Gensini score > 25 ， n = 72 ） 60 cases of healthy people taking a physical examination were seleted as onol oup . Determination of plasma microRNA-146a lev el ， tumor necrosis factor-a （ TNF-a ） interferon-（ IFN-y ） and anti-in ammatory factor interleukin-10 （ IL-10 ） expression levels were executed . Analyzed thecorrelation between plasma microRNA-14a evel and severityof oronaryar erylesion . Results The plasma mi croRNA-146a of observation group was higher than control roup ， the plasma microRNA-146a of moderate-severe group was higher han mild group ， the differences were statistically significant （ all P < 0 . 05 ） ; The plasma microRNA-146a expression level was posi tively correlated with TNF-a ， IFN-y and Gensini score （ r = 0 . 56-0 . 71 ， P < 0 . 01 ） ， was negatively correlated with IL-10 （ r = 0 49 ， P = 0 . 49 ） . Conclusions The plasma microRNA-146a expression level of coronary heart disease patients has good correlation with severity of coronary artery lesion ， is worth popularizing in clinical application/

[Key words ] MicroRNA-146a ; Coronary heart disease ; Gensini score

动脉粥样硬化在本质上属于一种慢性炎症性疾病，是导致心血管疾病的发病率和死亡二率大幅度升高的主要原因[1]，动脉粥样硬化的病理过程包括内皮功能障碍、白细胞的浸润、脂蛋白沉积和泡沫细胞的出现。白细胞的积累，细胞因子和生长因子的分泌，氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）的细胞毒性效应进一步加速炎症，导致动脉粥样硬化患者病情进展及预后不良[2]。在不同细胞类型中表达的外周血微小核糖核酸（microRNA参与了血管系统的炎症反应已经被广泛的报道[3，4]。本文通过检测120例冠心病患者Gensini评分、血浆microRNA-146a表达水平以及炎症介质水平，来探讨microRNA-146a水平与冠状动脉病变严重程度的相关性。报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料：选取2017年1月至2019年1月在我院心内科就诊的120例冠心病患者作为观察组，冠心病的诊断参照《中国心血管病预防指南（2017）》[5]中的标准。排除标准：合并严重心瓣膜病、急性肺栓塞、心肌炎，或有严重的免疫性疾病、感染性疾病，于半年内服用过免疫抑制剂或近一周服用过糖皮质激素及抗生素的患者。按病情严重程度分为轻度组（Gensini评分≤25，n=48）和中重度组（Gensini评分>25，n=72）。另选取同期门诊体检的60例健康人作为对照组。观察组与对照组在性别、年龄、心率、BMI及糖尿.病史等方面比较差异无统计学意义（P>0.05），见表1。所有受试者均签署知情同意书，本研究获得医院伦理委员会批准。

1.2方法：

1.2.1冠心病病情评估：采用Gensini评分[6]对冠心病患者进行病情严重程度评估。根据冠状动脉造影（CAG）显示的冠状动脉狭窄面积，无狭窄计0分，25%以下计1分，介于26%～50%之间计2分，介于51%～75%之间计4分，介于76%～90%之间计8分，介于91%～99%之间计16分，完全闭塞计32分。根据病变支所在部位乘以相应的系数，左冠状动脉主干计系数5，左前降支和左回旋支近端计系数2.5，中段计系数1.5，远端计系数1，右冠状动脉计系数1，第一、第二对角支计系数1，其他血管计系数0.5。Gensini评分等于各冠状动脉分支狭窄面积计分*系数的总和。

1.2.2血浆microRNA-146a表达水平及炎症因子测定：患者于清晨抽取空腹状态下肘部静脉血5mL ，离心吸取上清。加入1mL trizol溶液（美国invitrogen公司后按步骤提取总microRNA，然后加入microRNA-146.上下游引物逆转录成双链cDNA，进行聚合酶链反应，读取Ct值。采用酶联免疫反应试剂盒（美国abcam公司）按步骤说明书检测患者血浆TNF-a，IFN-γ和IL-10的含量，在450nm处测得吸光度值并计算相应浓度。

1.3统计学处理：数据均采用SPSS24.0版进行分析，计量资料采用（x±s）来表示，两组间比较采用t检验，三组数据比较采用one-wayANOVA分析，其中组间两两分析采用student一t检验，计数资料采用率（%）的形式来表示，组间比较采用卡方检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1三组血浆microRNA-146a、炎症因子水平和Gensini评分比較：轻度组和中重度亚组的血浆mi-CroRNA-146a表达水平、血浆TNF-a、IFN-y表达水平和Gensini评分明显高于对照组，血浆IL-10表达水平明显低于对照组，差异有统计学意义（P<0.01）。中重度组的血浆microRNA-146a表达水平、血浆TNF-a、IFN_γ表达水平和Gensini评分明显高于轻度组，血浆.IL-10表达水平明显低于病情轻度患者，差异有统计学意义（P<0.01），见表2。

2.2血浆microRNA-146a表达水平与病情相关性分析：血浆microRNA-146a表达水平与TNF-a（r=0.56，P=0.01）、IFN-γ（r=0.64，P<0.05）、Gensini评分（r=0.71，P<0.01）呈正相关，与IL-10呈负相关（r=-0.49，P<0.05）。

3讨论

冠状动脉粥样硬化性心脏病是导致我国人口死亡的主要原因之一，其重要的病理生理基础是动脉粥.样硬化。动脉粥样硬化是一种慢性炎症性疾病，包括内皮完整性的破坏、平滑肌的异常增殖和迁移、炎症介质的释放和脂质的内膜下沉积等[7]。microRNA通过靶向结合相应的基因位点，抑制靶基因的转录，从而实现对各生理病理过程的调控[8]。在不同细胞类型中表达的microRNA参与了血管系统的炎症反应已经被广泛的报道。细胞实验证明microRNA-146a可以通过直接作用于靶基因TLR-4，增加促炎因子IL-6局部分泌量，对ox-LDL诱导的氧化应激有促进作用[9]。另外，microRNA-146a还可以通过作用于肿瘤坏死因子受体相关因子6（tumornecrosisfactorreceptor-associ-atedfactor-6，TRAF6）发挥促炎作用[10]。给予小鼠敲除microRNA-146a，可以促进Treg细胞对效应性T细胞的抑制功能[11]。这些研究都提示microRNA-146a与动脉粥样硬化的发生发展密切相关。本文研究结果显示，血浆microRNA-146a表达水平随冠心病病情发展而逐渐升高，抑制患者microRNA-146a表达水平可能成为临床新的治疗靶点。

TNF-a和IFN-γ是常见的一类促炎因子，在免疫炎症反应中起重要的介导作用，已有基础研究证明TNF-a和IFN-γ在动脉粥样硬化动物模型的外周血和局部病变血管组织中大量表达，两者可以一方面可以促进自身表达增加，另一方面还能增加其他炎症因子和黏附分子等表达水平，导致内皮细胞功能障碍，血管平滑肌异常增生，血管张力异常，从而促进动脉粥样硬化斑块的形成[12～14]。IL-10是一种常见的免疫抑制因子，已有研究证明IL-10可以抑制巨噬细胞等的激活，发挥抗炎稳定斑块的作用[15]。临床研究显示，冠心病患者血浆中炎症因子的表达水平和患者的预后密切相关[16]，[17]。本文研究结果显示，血浆microRNA-146a表达水平不仅可以反映冠心病患者的病情严重程度，可能与患者预后也有一定关系，需要进一步长期随访验证。

综上，冠状动脉粥样硬化性心脏病患者外周血microRNA-146a表达水平与其冠状动脉病变严重程度有较好的相关性，值得在临床推广应用。

参考文献

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（收稿日期：2019-4-25）