丙型肝炎核心抗原与抗体联合检测在丙肝感染早期诊断中的应用价值

王爱兰 倪永圣 冼洁能 和仕进 何思杰 黄翠芳 晏文芬

[摘要]目的 分析丙型肝炎核心抗原（HCV-cAg）与抗体（抗-HCV IgG）联合检测在丙肝感染早期诊断中的应用价值。方法 将2015年2月～2017年5月医院各科室有丙肝高危感染风险的296例患者作为观察对象，所有患者取血清进行HCV-cAg和抗-HCV、ALT、TBil检查，以HCV-RNA检测结果为金标准，观察不同检查方法诊断的患者HCV感染情况，分析HCV-cAg、抗-HCV IgG联合用于疾病早期诊断的有效性。结果 HCV-RNA含量与ALT水平成正相关（r=0.978，P<0.05），HCV-RNA含量與Tbil水平无相关性（r=-0.681，P>0.05）;抗-HCV IgG方法的检出率为69.1%，HCV-cAg方法为82.3%，血清肝功能检测方法为58.2%，HCV-cAg方法的检出率高于抗-HCV IgG方法、血清肝功能检测方法（P<0.05）。抗-HCV IgG、HCV-cAg联合检出率最高，为96.5%，显著高于HCV-cAg、血清肝功能联合监测的 90.9%，抗-HCV IgG、血清肝功能联合检测的74.5%，差异有统计学意义（P<0.05）;HCV-cAg、抗-HCV IgG联合检测的诊断价值高于单指标检查。结论 抗-HCV IgG、HCV-cAg联合用于HCV早期感染诊断，临床检出率高。

[关键词]早期感染;抗原;丙型肝炎;抗体;联合检测

[中图分类号] R512.6+3          [文献标识码] A          [文章编号] 1674-4721（2019）2（c）-0127-04

[Abstract] Objective To analyze the application value of HCV-core antigen （HCV-cAg） and anti-HCV-immunoglobulin G （anti-HCV IgG） for joint detection in early diagnosis of hepatitis C infection. Methods All of 296 patients with high risks of HCV infection checked from February 2015 to May 2017 in each department were selected as observation objects. All the patients received the HCV-cAg， anti-HCV， alanine aminotransferase （ALT ） and total bilirubin （TBil） examinations. HCV-RNA test results were used as the gold standard to observe the HCV infection of patients diagnosed by different methods， and to analyze the effectiveness of combined use of HCV-cAg and anti-HCV IgG in early diagnosis of diseases. Results HCV-RNA content was positively correlated with ALT level （r=0.978， P<0.05）， while HCV-RNA content was not correlated with Tbil level （r=0.681， P>0.05）. The detection rate of anti-HCV IgG， HCV-cAg and serum liver function was 69.1%， 82.3% and 58.2% respectively， and the detection rates of HCV-cAg was higher than that of anti-HCV IgG and serum liver function （P<0.05）. The joint detection rate of anti-HCV IgG and HCV-cAg was the highest （96.5%）， which was significantly higher than that of combined monitoring of HCV-cAg and serum liver function （90.9%）， the combined detection of anti-HCV IgG and serum liver function （74.5%） had statistical difference （P<0.05）. The diagnostic value of combined detection of HCV-cAg and anti-HCV IgG was higher than that of single index examination. Conclusion Combination of anti-HCV IgG and HCV-cAg for early diagnosis of HCV infection has a high clinical detection rate.

[Key words] Early infection; Antigen; Hepatitis C; Antibody; Joint detection

丙型肝炎是临床一种为丙型肝炎病毒（HCV）感染所致的肝脏疾病，相关数据统计显示目前全球近1.8亿人感染HCV，感染率在3%左右，同时每年仍有近3.5万新发者，临床发病率呈上升趋势[1-2]。此病早期症状不明显，发病隐蔽，不易发觉，可通过吸毒、输血、针刺等方式传播，可致肝脏纤维化、坏死，并逐渐发展为肝硬化、肝癌等，危及患者生命安全[3-4]。早期有效诊断疾病对控制HCV传播、丙肝防治有重要意义，因此如何有效诊断早期丙肝感染得到临床关注，肝功能指标（ALT、TBil）在一定程度上能反映肝脏病理情况，而检测血清中HCV相关指标有助于疾病的早期诊断、治疗[5]。本研究观察296例丙肝高危感染风险者以丙型肝炎核心抗原（HCV-cAg）、丙肝抗体（抗-HCV IgG）、ALT、TBil检测检查诊断情况，旨在为后期临床疾病的早期检出提供依据。

1资料与方法

1.1一般资料

将2015年2月～2017年5月医院各科室有丙肝高危感染风险的296例患者作为观察对象，所有患者怀疑为丙肝感染高危者，其中男158例，女138例;年龄21～71岁，平均（45.3±4.8）岁。所有患者均行HCV-cAg和抗-HCV、ALT、TBil检查。

1.2试剂、仪器、方法

血清提取方法：所有观察对象于清晨空腹取肘静脉血5 ml，放于抗凝管中保存，随后送检，对样血进行离心处理，参数：3000 r/min，时间为10 min，取血清置于低温冰箱中保存，检验时提前从冰箱中取出放置至复温。

试剂、仪器：FC酶标仪（美国Thermo公司）、洗板机Wellwash型（美国Thermo公司）、电热恒温水浴箱（深圳汇松）、加样器（芬兰百得）、荧光定量PCR仪（型号7500 美国ABI公司）、全自动生化分析仪（型号7600 日立）、BY-R18高速冷冻离心机（北京白洋医疗器械有限公司）;HCV IgG试剂盒购自英科新创（厦门）科技有限公司，HCV-cAg采用山东莱博生物科技有限公司，ALT试剂盒由北京利德曼生化股份有限公司提供，TBil试剂盒由北京利德曼生化股份有限公司提供。

方法：HCV-cAg，以ELISA法检测，设置阴性、空白对照、阳性孔，并按试剂盒说明进行操作，质控品采用自制低值质控品，同时本次截止值为阴性对照孔平均值+0.10，OD值测定选择主波450 nm、副波630 nm进行比色。抗-HCV IgG检测：以ELISA法检测，设置阴性、空白对照、阳性各两孔，所有操作严格按照试剂盒说明进行，室内质控品由英科新创提供，室间质控品由卫生部临床检验中心提供，本次截止值为阴性对照孔平均值+0.12，本次OD值测定选择主波450 nm、副波630 nm进行比色。肝功能检测：以全自动生化分析仪对血清ALT值测定，采用终钒酸盐氧化法对TBil进行测定，严格按照试剂盒说明进行。HCV-RNA检测：采用RT-PCR法测定，以全自动荧光定量PCR仪进行检测，严格按照试剂盒说明进行操作。

1.3观察指标

以HCV-RNA检测结果为金标准，观察各组患者的HCV感染情况，分析HCV-cAg、抗-HCV IgG联合用于疾病检测的临床价值。其中HCV IgG检测以OD值S/COV≥1为阳性，S/COV<1为阴性;HCV-cAg检测，OD值大于或等于cut off值为阳性，OD值小于cut off值为阴性;HCV-RNA检测以病毒载量103拷贝/ml以下为阴性，103～105拷贝/ml为少量复制，106～107拷贝/ml为病毒中量复制，108拷贝/ml以上病毒大量复制，同时以HCV-RNA检测阳性表示患者确诊丙肝[6-7]。ALT参考值：5～50 U/L;TBil参考值：1.71～17.10 μmol/L。诊断率=（真阴性+真阳性）例数/总例数×100%;特异度=真阴性例数/（假阳性+真阴性）例数×100%;敏感度=真阳性例数/（真阳性+假阴性）例数×100%。

1.4统计学方法

采用统计学软件SPSS 19.0分析数据，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验;计数资料以率表示，采用χ2检验;相关性采用Pearson相关性分析方法，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1 HCV-RNA含量与ALT、TBil水平的相关性

HCV-RNA含量与ALT水平成正相关（r=0.978，P<0.05），HCV-RNA含量与TBil水平无相关性（r=-0.681，P>0.05）（表1）。

2.2 不同检测方式检出率的比较

296例患者行HCV-RNA检查，阳性55例，抗-HCV IgG方法的检出38例，检出率为69.1%，HCV-cAg方法检出48例，检出率为87.3%，检测肝功能法检出32例，检出率为58.2%，三者比较，差异有统计学意义（χ2=11.663，P<0.05）。

2.3联合检查方法检出率的比较

抗-HCV IgG、HCV-cAg联合检测53例，检出率为96.5%，HCV-cAg联合血清肝功能检测50例，检出率为90.9%，抗-HCV IgG联合血清肝功能检测41例，检出率为74.5%，三者比较，差异有统计学意义（χ2=12.768，P<0.05），可见，抗- HCV IgG、HCV-cAg联合检出率最高。

2.4不同检查方法诊断价值的比较

诊断率：联合> HCV-cAg>抗-HCV IgG>血清肝功能，特异度：联合>抗-HCV IgG组> HCV-cAg组、血清肝功能组，敏感度：联合> HCV-cAg>抗-HCV IgG>血清肝功能，具體见表2。

3讨论

丙肝发病隐匿症状不明显，故疾病早期诊断主要依据临床实验室检查结果，HCV-RNA检查是目前临床疾病诊断的金标准，但其检查价格昂贵，耗时较长，故不适用于早期丙肝感染筛选，同时患者感染后HVC抗体转阳一般需要近70 d的窗口期，因此如何选择有效的检查方式准确诊断疾病得到临床医师的关注[8]。ALT、TBil作为肝功能的重要指标，有学者发现只要有1%肝细胞坏死便可导致人体血液中ALT水平升高，ALT、TBil水平能有效反映患者的肝脏损害情况。临床认为，丙型肝炎患者由于病毒感染肝功能会受影响，故而将ALT、TBil用于疾病诊断。本研究中，HCV-RNA含量与ALT水平成正相关（r=0.978，P<0.05），HCV-RNA含量与TBil水平无相关性（P>0.05），血清肝功能组检测阳性与HCV-RNA相符32例，确诊率为58.2%，提示ALT、TBil用于诊断丙肝感染存在一定的误诊情况，分析原因部分HCV对肝脏的损害具有隐匿性，导致早期未有肝细胞坏死、肝脏损害情况发生，同时个体免疫应答也会造成ALT水平异常，故感染检出率不高[9]。

抗-HCV IgG、HCV-cAg检查是目前疾病常见的检测手段，且近几年以ELISA 法检测，检查敏感性提高，但鉴于患者感染后抗-HCV IgG出现时间较晚，窗口期时间较长，故临床仍存在漏诊情况，因此有学者提出联合检查，以提高疾病早期检出率[10-11]。本研究中，以HCV-RNA检查阳性为标准，抗-HCV IgG组检出率为69.1%，HCV-cAg组为82.3%，血清肝功能组为58.2%，HCV-cAg方法的检出率高于抗-HCV IgG、血清肝功能检查方法（P<0.05）;同时不同检查方式联合诊断的检出率比较，差异有统计学意义（P<0.05），且抗-HCV IgG、HCV-cAg联合检出率最高为96.5%;抗-HCV IgG、HCV-cAg诊断价值高于单指标检查，提示HCV IgG、HCV-cAg联合检查诊断准确率较高，在陈伟岳等[12]学者的研究结果指出HCV-cAg和HCV-RNA检测结果符合率为94%，提示HCV-cAg有良好的灵敏度，用于HCV感染检测，检出率高，与本研究结果相符，同时学者研究中有3例抗-HCV 阴性而HCV-cAg检查呈阳性，且后期跟踪患者3周后抗-HCV IgG转阳，其认为HCV-cAg能较抗-HCV 先检测到HCV感染。HCV-RNA作为病毒复制的直接标志，人体HCV感染后HCV-RNA阳性出现比抗-HCV早约50 d，但其检查设备复杂、人配备要求高，且受多种因素影响[13]。而HCV-cAg作为HCV感染后早期可出现的敏感指标，窗口期一般在2周左右，其血清转阳仅比HCV-RNA迟1～2 d，且操作相对简单，设备要求较易满足[14]。本研究结果提示抗-HCV IgG、HCV-cAg联合检查能有效将HCV感染的窗口期提前，从而更早发现感染，有效提高临床疾病检出率，这对疾病早诊断、早治疗有重要意义[15]。

综上所述，HCV-cAg、抗-HCV IgG联合用于HCV早期感染诊断，临床检出率高，可在临床推广应用。

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（收稿日期：2018-08-09  本文编辑：许俊琴）