γ干扰素释放试验对结核病诊断的应用价值

(太原钢铁(集团)有限公司总医院，山西 太原 030008)

结核病是由结核分枝杆菌感染引起的慢性传染性疾病，其严重危害人类健康。目前，中国结核病年发病人数约130万，占全世界发病人口的14.3%，居世界第二位[1]。结核分枝杆菌的感染率很高。但是，当人体免疫系统降低时，结核分枝杆菌会繁殖并引起临床疾病。尽快检测到结核分枝杆菌是预防和控制结核病传播的重要方法。结核菌培养是实验室检测结核分枝杆菌的金标准，但需数周时间；虽然TST( PPD) 可以较快地检出，但常会发生假阳性和假阴性，这很难诊断和治疗结核感染。已经表明，基于T 细胞免疫的体外γ干扰素释放测定法(TB-IGRA)在检测结核分枝杆菌( MTB) 感染方面具有更好的特异性和敏感性[2，3]，在欧洲和美国已成为结核病常规临床检测方法[4]。本研究用国产 TB- IGRA试剂盒用于临床检测结核分枝杆菌感染，与国外同类试剂( QFT- GIT)和结核菌素皮试( PPD)相比较，评价其临床诊断价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

该研究的受试者为太原钢铁(集团)有限公司总医院诊断为结核的住院患者272例，男196人，女76人，平均年龄55岁。肺结核253例，肺外结核19例。所有受试者都被排除在原发性免疫缺陷病，接受放化疗和免疫抑制药物治疗的患者和糖尿病患者身上，避免免疫损伤导致的 IGRA假阴性。

1.2 仪器设备

BD(美国BD公司)肝素锂5mL负压采血管、移液器、37℃保温箱、普通离心机、生物安全柜、洗板机、酶标仪等。

1.3 试剂

TB-IGRA试剂盒购自北京万泰生物科技有限公司;QFT-GIT检测试剂盒购自澳大利亚Cellestis公司；PPD试剂购自成都生物制品研究所。

1.4 方法

TB-IGRA和QFT-GIT检测均需采集研究对象的静脉血，肝素锂抗凝，然后严格按照两种试剂的说明书进行操作。

PPD皮肤试验采集血液后，所有受试者皮内注射PPD 0.1 mL(5 IU)，由结核分枝杆菌检测专业人员进行。72 h后，测量反应结果并用尺子测量硬化平均直径并记录。那些直径≥5mm的红肿样肿块或水疱的患者通过PPD皮肤试验判断为阳性，而不符合上述条件则判断为阴性。

比较3种方法的阳性检出率。

1.5 统计学方法

使用SPSS19.0统计软件进行统计数据处理，计数资料组间用%表示，采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3种方法检测结核病阳性检出率比较

TB-IGRA和QFT-GIT结核病的检测阳性检出率相当，差异无统计学意义(χ2=0.97，P>0.05)，两种方法均优于PPD皮试，差异有统计学意义(χ2=29.47，P<0.05)。见表1。

表1 3种方法检测结核病结果的阳性检出率比较 例

2.2 3种方法检测肺结核与肺外结核阳性检出率比较

TB-IGRA、QFT-GIT和PPD 皮试对253例肺结核患者,阳性检出率分别为91.70%(232/253)、88.93%(225/253)和75.89%(192/253)， TB-IGRA和QFT-GIT两种方法对结核病诊断效果相同，差异无统计学意义(χ2=0.95，P>0.05)，两种方法优于PPD皮试，差异有统计学意义(χ2=29.11，P<0.05)；对19例肺外结核患者的阳性检出率分别为84.21%(16/19)、84.21%(16/19)和73.68%(14/19)，3种方法比较对肺外结核的诊断效果相同，差异无统计学意义(χ2=0.90，P>0.05)。

3 讨论

常用的结核病诊断依赖于临床症状、影像学特征和病原学诊断。迄今为止还没有准确、快速和可靠的结核分枝杆菌检测方法[5,6]。被人体内MTB抗原刺激时致敏的T细胞当它们再次被同类抗原刺激时可产生特异性干扰素γ( IFN-γ) 。特异性升高的INF-γ的量可反映体内结核特异性T 细胞应答的强度，并间接判断MTB 感染情况。结核分枝杆菌相关γ干扰素体外释放试验是体外特异性T细胞免疫应答检测技术，与TST相比，无需回访且结果判读更为客观。γ干扰素释放试验的原理(IGRA)为：身体第一次感染结核菌后体内会出现致敏的淋巴细胞，当人体再次接触结核杆菌抗原时，致敏的淋巴细胞迅速活化为效应性淋巴细胞，高水平的细胞因子被释放，其中最重要的为γ干扰素。因此γ干扰素的水平可以用作肺结核感染(包括肺外结核、潜伏性结核)的诊断指标。目前，该方法的实验方式有两种[7]：一个是酶联免疫斑点法(ELISPOT)，另一种为酶联免疫吸附法(ELISA)。而ELISA法对设施条件要求较低，所以国内ELISPOT使用较少。本次测试中使用的国产万泰TB-IGRA试剂盒的测试原理与QFT-GIT 试剂盒(澳大利亚Cellestis)类似，对于新鲜外周血直接刺激培养，对实验室设备没有特殊要求。另外，选择用于两种试剂ESAT-6、CFP-10 的抗原对于致病性MTB而言是独特的，而卡介苗没有的片段[8]，它可以更好地区分真正的结核感染并排除由卡介苗接种等方法引起的干扰。

本研究结果显示TB-IGRA和QFT—GIT的结核和肺外结核的检出率无统计学差异(P>0.05)，表现出的高敏感性，不仅对肺结核敏感性高91.70%，对肺外结核的敏感性也有84.21%。另外，TB-IGRA试剂成本更低，操作简单、快速，可在26 h内出检测结果，为早期发现、早期诊断和早期治疗提供重要帮助，以降低结核病的风险，是各级医院非常有效的辅助诊断方法。