薄层色谱法（TLC）对益气健脾口服液中太子参成分的快速鉴别

梁凤兰，马德运，李敏钗

（肇庆学院 a.生命科学学院；b.食品与制药工程学院，广东 肇庆 526061)）

近年来，通过对太子参活性成分的分析、鉴定以及临床研究表明，太子参在抗氧化、增强抵抗力、抗衰老、降血糖、抗炎等方面有一定效果，目前广泛应用于食品、药品、化妆品、保健品.益气健脾口服液是由太子参、山药、南山楂、桑叶等11味中草药通过煎煮、浓缩、提纯、静置、过滤等步骤制作而成，具备健脾、和胃、增强自身抵抗力等功效，临床可作为脾胃虚弱的辅佐治疗，改善食欲不振、四肢乏力、盗汗、腹胀、腹痛、畏寒等症状[1-3].《中国药典2015版（第一部）》对太子参药材成分的鉴定方法[4]采用薄层色谱法，硅胶G薄层板，以甲醇为溶剂溶解，正丁醇-冰醋酸-水（4∶1∶1）为展开剂，再以0.2%茚三酮乙醇溶液显色，105℃加热至斑点显色清晰，与对照药材色谱相应的位置上对照，显相同颜色的斑点来判断，该方法鉴定结果易受到其他药材成分的干扰.为协助一品红药业股份有限公司生产的益气健脾口服液建立质量标准，确保益气健脾口服液中太子参成分的含量，保证其药效与作用[5]，基于薄层色谱法，尝试建立一种具有高度特异性、简单便捷且阴性溶液不会造成干扰的快速鉴别方法.

薄层色谱法是一种根据各种成分对同一种吸附剂吸附能力不同，使其在移动相(溶剂)流过固定相(吸附剂)过程中，不断重复产生吸附和解吸附，以完成各种成分互相分离和定性分析少量物质的实验技术，在医学、药学、生化、卫生、环境、食品、化工等领域被广泛应用.

研究基于薄层色谱法，通过探讨益气健脾口服液中太子参成分的提取方法、展开剂选择、显色剂选择、观察方法选择、薄层色谱板类型、温度和湿度环境等，最终得出最优方法，可快速鉴别益气健脾口服液中太子参成分，且专属性良好.为建立快速鉴定益气健脾口服液中太子参成分的技术标准提供依据，利于加强对该类口服液的质量控制.

1 仪器与药品

1.1 仪器

DF-101S集热式恒温磁力加热搅拌器（常州市瑞华仪器制造有限公司），WFH-201B紫外透射反射仪（上海精科实业有限公司），定量毛细管（1和2 μL），SP-Ⅲ型薄层条带点样器（上海科哲生化科技有限公司），微量进样器（25 μL，宁波市镇海玻璃仪器厂），电子天平BSA223S（德国赛多利斯公司）.

1.2 样品和标准品

太子参标准品（中国药品生物制品检定所，批号：1004-200203），益气健脾口服液（一品红药业股份有限公司，批号：160213、160422和160514）.

1.3 试剂和药品

大孔吸附树脂（D-101净品型，天津浩聚树脂科技有限公司）；氯仿、甲醇、正丁醇、冰醋酸、环己烷、丙酮、三氯甲烷、乙酸乙酯、浓硫酸等为分析纯，广州化学试剂厂生产；二次蒸馏水.

2 方法与结果

2.1 供试品溶液的制备

填装D-101型非极性大孔吸附树脂柱（内径1.5 cm，柱高10 cm），使之均匀且没有气泡.取本品20 mL，缓缓地通过D-101型大孔吸附树脂柱，调节流速，控制流速约为1滴/秒.通过后沿着壁缓缓倒入200 mL水进行洗脱，弃去洗脱液，接着倒入100 mL乙醇溶液，收集乙醇洗脱液，置于水浴锅上蒸干，吸取1 mL甲醇到所得残渣中，使之溶解，用作供试品.

2.2 对照品溶液的制备

称取约2 g太子参药材，装入圆底烧瓶中，量取20 mL水置于烧瓶中，蒸发回流2 h，放冷后过滤，得到滤液.将滤液缓慢导入D-101型大孔吸附树脂柱，根据上述方法，得到对照品溶液.

2.3 阴性对照品溶液的制备

根据制备口服液的方法制备不含有太子参的口服液，以获得太子参阴性溶液.抽取太子参阴性溶液20 mL，缓慢导入D-101型大孔吸附树脂柱，按照上述方法操作，得到阴性对照品溶液.

2.4 薄层实验方法

提取方法采用水提取法、正丁醇萃取法、C18小柱吸附法和大孔吸附树脂法，薄层板为手铺硅胶G板和青岛G板，温度选择10℃和25℃，湿度选择32%和88%.

用微量进样器准确取以上制备的3种溶液各20 μL，在同一块已经活化完成的硅胶G板上，分别点上以上3种溶液，配制甲苯-乙酸乙酯(4∶1)作为展开剂，置于展开缸中进行展开，待展开完成后取出，放入通风橱干燥，然后均匀喷上5%香草醛硫酸溶液，置于105℃加热，直到斑点显色清晰后取出，在阳光下观察.

2.5 展开剂和显色剂的选择

目前，通过皂苷类的分离提取，按照极性的配合，常用的几种展开剂有氯仿-甲醇-氨试液（4∶4∶2)，正丁醇-冰醋酸-水（4∶1∶1），环己烷-丙酮（10∶0.4），正丁醇-甲醇-水-冰醋酸（3∶1∶1∶1），三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（15∶40∶22∶10）收集10 ℃以下放置的下层溶液，甲苯-乙酸乙酯(4∶1)等.实验结果表明以甲苯-乙酸乙酯(4∶1)的展开效果为佳，特征斑点清晰，出现了2个分离度较好的斑点，并且没有拖尾现象.

显色剂主要对比了2种，分别是10%硫酸乙醇溶液和5%香草醛硫酸溶液.根据得到的结果对比，5%香草醛硫酸溶液能够得到更加清晰可见的斑点，因此选取5%香草醛硫酸溶液作为此次试验的显色剂.

上述方法应用于平行测试3批次口服液样品.

2.6 薄层鉴别方法的建立

2.6.1 提取方法的选择

基于文献检索，提取太子参皂苷类成分的方法较多，如水浸提法、超声提取法、酸解法、水提醇沉法、正丁醇萃取法、C18小柱吸附法、大孔吸附树脂法等[6-11].益气健脾口服液为中成药，成份复杂，提取皂苷类成分时会受到许多干扰，故如何避免其他药物成分的干扰是关键.起初采用水浸提法，超声提取法，经过展开、显色后，得到许多杂乱的成分，并且阴性对照品造成干扰（图1a）；后用正丁醇进行多次萃取，得到的斑点清楚可见，而且分离度好，但是仍然存在着阴性对照品的干扰（图1b）；于是尝试采用C18小柱进行吸附，再用甲醇和水进行洗脱，展开显色后杂质得到较大减少，而且成分分离度好，但是阴性对照品仍然存在干扰（图1c）；最后采用D-101型大孔吸附树脂进行除杂，再用水进行洗脱，然后收集乙醇的洗脱液，通过挥干后用甲醇溶解得到样品，通过展开和显色后，获得的点清晰，并且其他成分不会造成干扰（图1d）.

图1 不同提取方法对比

2.6.2 不同薄层板对实验结果的影响

根据上述“2.4”项下的测定方法，分别对人工硅胶G板和市售青岛G板进行了测试，结果如图2所示，两种G板得到的结果没有太大差别.

图2 不同薄层板情况对比

2.6.3 不同温度对实验结果的影响

取2块青岛产预制薄层板，分别在10℃和25℃展开，显色，检视.如图3所示，在10～25℃范围内试验，对鉴别无明显影响.

图3 不同温度情况对比

2.6.4 不同湿度对实验结果的影响

用硫酸调节湿度为32%和88%的2个环境，（湿度为32%的调节方法，配制一定浓度的硫酸，倒入双侧展开缸的一侧，进行预饱和.而另一侧则倒入配制好的展开剂)，分别把2块点板完成的板放入展开缸中进行展开.如图4所示，改变相对湿度环境对结果无影响.

图4 不同相对湿度情况对比

3 结论

本实验采用薄层色谱法，通过探讨益气健脾口服液中太子参成分的不同提取方法、展开剂的选择、显色剂的选择、观察方法的选择、不同类型薄层色谱板、工作环境的温度和湿度对结果的影响，最终确定以大孔吸附树脂法提取太子参成分，甲苯-乙酸乙酯(4∶1)为展开剂，5%香草醛硫酸溶液为显色剂的最优鉴定方法.本法操作简单，具有快速，分离效果和重现性好的优点，可用于益气健脾口服液中太子参(Radix Pseudostellariae)成分的快速定性鉴别，可为加强对益气健脾口服液的质量控制及市场监管提供有效手段.