某规模化猪场伪狂犬病抗体检测与分析

段正赢，焦祖武，周丹娜，杨克礼，郭 锐，刘 威，刘泽文，袁芳艳，高 婷，田永祥

（湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/农业部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室/动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室，湖北 武汉 430064）

猪伪狂犬病（Pseudorabies,PR）是由伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）引起的一种多种动物共患的传染病。该病临床上多以发热和神经症状为特征，主要引起种猪不育，妊娠母猪发生流产、死胎和木乃伊胎，新生仔猪和断奶仔猪呼吸系统和神经系统障碍以及死亡，肥育猪呼吸困难和生长缓慢等，是危害全球养猪业的重大传染病之一[1]。随着PRV基因缺失疫苗在国内猪场的广泛应用，伪狂犬病的流行趋势有所缓和，但该病的隐性感染现象仍相当普遍。实际生产中，开展猪伪狂犬病抗体监测，根据监测数据，可为该病制订合理的预防和净化方案提供有力的参考。2017年，笔者应用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法对湖北黄冈市某规模化猪场的血清样品进行了猪伪狂犬病跟踪监测，现报告如下。

1 材料

1.1 血清

样品采集时间为2017年4—10月，所有样品均来自湖北黄冈市某规模化猪场，该场母猪存栏数为710头，所有猪只采用猪伪狂犬病gE基因缺失活疫苗免疫。血样分别采集公猪、后备猪、不同胎次的种猪及不同生长阶段的商品猪，共采集血样622份，其中公猪血清样品37份，母猪血清样品261份，不同周龄猪群样品324份。血样分离血清后，置-20℃冰箱中保存，备用。

1.2 检测试剂

猪伪狂犬病野毒感染抗体（PRV-gE抗体）检测试剂盒及免疫抗体（PRV-gB抗体）检测试剂盒，为IDEXX公司生产。

2 方法

采用IDEXX公司生产的猪PRV-gB、PRV-gE抗体ELISA检测试剂盒对所有血清样品进行抗体检测，检测程序和判断标准严格参照试剂盒使用说明进行操作。样品PRV-gB抗体判定标准：S/N值≤0.6为阳性，S/N值＞0.7为阴性，0.6＜S/N值≤0.7的样品应重测。样品PRV-gE抗体判定标准：S/N值≤0.6为阳性，S/N值＞0.7为阴性，0.6＜S/N值≤0.7的样品应重测。

3 结果

3.1 种猪群PRV-gE抗体监测

种猪野毒感染抗体监测总样本数为298份，其中公猪群37份，母猪群261份。第1次监测即4月份监测结果中，该猪场13份公猪血清样品中有1份为PRV-gE抗体阳性，将1头公猪淘汰后，在第2次、第3次监测即7月份、10月份监测结果中，PRV-gE抗体均为阴性，见表1。母猪群在第1次监测中，PRV-gE抗体阳性率为20.2%，其中后备猪群为 16.0%，1～2胎母猪群为 18.2%，3～4胎母猪群为20.0%，5胎以上母猪群为27.3%，呈现出胎次越高阳性率越高的趋势，第2次、第3次监测结果中，PRV-gE抗体阳性率分别下降至15.1%、7.0%，呈逐渐下降趋势，且后备猪群在第3次监测中已转为PRV-gE抗体阴性，见表2。

表1 公猪群PRV-gE抗体监测

表2 母猪群PRV-gE抗体监测

3.2 不同周龄猪群PRV-gE抗体监测

不同周龄猪群PRV-gE抗体监测样品324份，血样采自 1～4 周龄、5～8 周龄、9～12 周龄、13～16 周龄及17～21周龄猪群。第1次监测结果发现，PRV-gE抗体阳性率为21.8%，各周龄猪群均有不同PRV-gE抗体阳性猪存在。第2次、第3次监测的PRV-gE抗体阳性率分别为13%、5%，呈逐渐下降趋势，且13～16周龄猪群及17～21周龄猪群在第3次监测中已转为PRV-gE抗体阴性，见表3。

表3 不同周龄猪群PRV-gE抗体监测

3.3 猪群PRV-gB抗体监测

PRV-gB抗体监测样品622份，在3次监测中，37份公猪群血样抗体阳性率均为100%（表4）。第1次监测结果中，母猪群的抗体阳性率高于仔猪和育成猪，抗体阳性率为59.1%～84.0%，仔猪和育成猪群的抗体阳性率较低，为44.0%～70.8%。母猪群3次监测的平均阳性率分别为70.8%、83.7%、93.0%，仔猪和育成猪群的平均阳性率分别为57.3%、82.0%、96%，均呈逐步上升趋势，见表5、表6。

表4 公猪群PRV-gB抗体监测

表5 母猪群PRV-gB抗体监测

表6 不同周龄猪群PRV-gB抗体监测

4 讨论

通过PRV-gE抗体监测，结果显示，母猪群感染率平均为20.2%，不同周龄猪群感染率平均为21.8%，同期免疫抗体的阳性率分别为70.8%和57.3%，表明该猪场伪狂犬病野毒感染比较严重。根据监测结果，建议猪场采取加强免疫与逐步淘汰阳性带毒猪等综合防控措施后，野毒感染率逐渐下降，第3次检测母猪群、仔猪和育成群野毒感染率均分别下降到7.0%、5.0%，且后备猪群、13～16周龄猪群及17～21周龄猪群感染率降为0；而PRV-gB抗体3次监测结果中，平均阳性率逐渐上升，均达到90.0%以上；表明通过采取加强免疫和淘汰阳性带毒猪等综合防控手段，不仅可有效降低阳性带毒率，还可有效提高免疫抗体水平。

目前，国内外普遍用猪伪狂犬病病毒gE基因缺失活疫苗，并配套使用PRV-gE抗体ELISA诊断试剂盒对该病进行预警检测[2-4]，配套试剂盒能快速、方便、准确检测PR野毒抗体，从而评估猪群PR野毒感染状况[5]。PRV-gB抗体检测试剂盒也是一种准确检测免疫抗体的方法，但由于PRV-gB抗体检测不能区分疫苗毒和野毒产生的抗体，对于常规定期监测来讲，如果仅仅检测PRV-gB抗体不能说明免疫抗体水平高低，应与PRV-gE抗体检测结果结合起来分析才更有意义。

近年来，由于PRV出现变异、毒力返强等情况，导致猪伪狂犬病疫情在国内不断发生，这可能是PR频发和PR野毒感染率居高不下的一个重要原因。但我国现在已研究出针对变异株的高质量的基因缺失疫苗应用于养猪生产，再加上配套ELISA抗体检测试剂盒的应用，使得猪伪狂犬病的净化和根除有了强有力的手段。