消炎宁糖浆的质量标准研究

李 霞，张子龙

(武汉市江夏区中医医院药剂科，湖北 武汉 430200)

消炎宁糖浆是武汉市江夏区中医医院(以下简称“我院”)协定处方中药制剂，有20多年的临床使用历史，制剂批准文号为鄂药制字Z20111769，其可清热解毒、泻火，用于治疗口腔咽喉肿痛、牙痛、牙周炎及风热感冒初起。其由金银花、白芷、牡丹皮、青皮及荆芥等十余味中药组成，临床疗效显著。但原质量标准过于简单，只有相对密度、pH和性状的规定标准。为了更好地为患者服务，保证该制剂质量稳定可控，本研究对该制剂主要药材的定性鉴别及主要有效成分的含量等质量标准进行了一系列的探讨，现报告如下。

1 材料

1.1 仪器

SSievans Series 1500型高效液相色谱仪(美国SSI科学系统公司)；Rromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；HX-03型超声波清洗器(武汉恒信世纪科技有限公司)；GoodSee-Ⅱ型暗箱式薄层色谱摄影仪(上海科哲生化科技有限公司)；pHS-25型数显酸度计(杭州奥立龙仪器有限公司)；恒温水浴箱(北京市医疗设备厂)；10 cm×10 cm信谊P型单槽层析缸(上海信谊仪器厂有限公司)。

1.2 药品与试剂

绿原酸对照品(批号：110753-200212，L-007-160504)；橙皮苷对照品(批号：C-006-170216，110721-201115)；丹皮酚对照品(批号：110708-200506)；以上对照品均为供含量测定用，购自中国药品生物制品检定所。青皮、金银花及牡丹皮对照药材购自湖北强康中药饮片有限公司，经我院中药验收员鉴定为正品。层析用硅胶G(青岛海洋化工厂分厂)，乙腈为色谱纯，水为屈臣氏纯净水(广州屈臣氏食品饮料有限公司)，其他试剂均为分析纯；消炎宁糖浆(批号：170904、171219、180122、180309、180316及180510)和阴性对照品均为我院生产。

2 方法与结果

2.1 定性鉴别

2.1.1 青皮的薄层色谱鉴别：(1)取样品溶液40 ml，加乙酸乙酯30 ml，轻轻振摇，静置，分取乙酸乙酯液，水浴蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。(2)按处方比例和制法工艺制成缺青皮药材的阴性提取液。同上法制成阴性对照溶液。(3)取青皮5 g，加水200 ml，煎煮约30 min后，放冷，取滤液40 ml，同法制成青皮药材对照溶液。(4)取橙皮苷对照品加甲醇制成1 mg/m1的甲醇溶液，作为对照品溶液。根据《中华人民共和国药典：四部》(2015年版)“通则0502”薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10 μl，分别点于同一含1%NaOH的硅胶G上，以乙酸乙酯-甲醇-水(V∶V∶V=100∶17∶13)为展开剂，展开约8～9 cm，晾干，在365 nm紫外灯下检视[1-2]。结果显示,样品色谱中有相应对照品斑点，而缺青皮的阴性对照品色谱无相应斑点，见图1。

1.阴性对照溶液；2.青皮药材对照溶液；3—4.供试品溶液；5.对照品溶液1. negative control solution; 2. contrast solution of pericarpium citri reticulatae viride; 3-4. test solution; 5. reference solution图1 青皮的薄层色谱图Fig 1 Thin layer chromatography of pericarpium citri reticulatae viride

2.1.2 金银花的薄层色谱鉴别：(1)取样品溶液40 ml，用稀盐酸调pH(3～4)，加乙酸乙酯30 ml，轻摇提取，分取乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，即得供试品溶液。(2)按处方比例和制法工艺制成缺金银花药材的阴性提取液。再同上法制成阴性对照品溶液。(3)取金银花药材5 g，加水200 ml，煎煮约30 min后，放冷，取滤液40 ml，同法制成金银花药材对照溶液。(4)精密称取绿原酸对照品，加甲醇制成含量为1 mg/m1的对照品溶液。根据《中华人民共和国药典：四部》(2015年版)“通则0502”薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(V∶V∶V=14∶5∶5)静置12 h以上的上层液为展开剂，展开约8～9 cm，取出，晾干[2-3]。在365 nm紫外灯下检视，结果显示，样品色谱中有相应对照品斑点，而缺金银花的阴性对照品色谱无相应斑点，见图2。

1.阴性对照溶液；2.金银花药材对照溶液；3—4.供试品溶液；5.对照品溶液1.negative control solution; 2.contrast solution of honeysuckle; 3-4.test solution; 5.reference solution图2 金银花的薄层色谱图Fig 2 Thin layer chromatography of honeysuckle

2.1.3 牡丹皮的薄层色谱鉴别：(1)取本品50 m1，置于分液漏斗中，加水25 m1，摇匀，加乙醚30 m1，轻轻滚动振摇提取，静置，萃取乙醚液，挥干，加丙酮1 m1使溶解，作为供试品溶液。(2)按消炎宁处方比例及制备工艺，制备缺牡丹皮的阴性对照样品，再同上法制备缺丹皮的阴性对照溶液。(3)取牡丹皮药材5 g，加水200 ml，煎煮约30 min后，放冷，取滤液40 ml，同法制成牡丹皮药材对照溶液。(4)精密称取丹皮酚对照品，加丙酮制成丹皮酚含量为1 mg/ml的溶液，作为对照品溶液。根据《中华人民共和国药典：四部》(2015年版)“通则0502”薄层色谱法试验，吸取上述丹皮酚对照品溶液及供试品溶液各10 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(V∶V=3∶1)为展开剂，展开约8～9 cm，取出晾干，喷以1%三氯化铁试液，立即检视[2，4]。结果显示，样品色谱中有相应对照品斑点，而缺牡丹皮的阴性对照色谱无相应斑点，见图3。

1.阴性对照溶液；2—3.供试品溶液；4.牡丹皮药材对照溶液；5.对照品溶液1. negative control solution; 2-3. test solution；4. contrast solution of moutan bark；5. reference solution图3 丹皮酚的薄层色谱图Fig 3 Thin layer chromatography of moutan bark

2.2 高效液相色谱法测定消炎宁糖浆中绿原酸的含量

2.2.1 对照品溶液的制备：精密称取绿原酸对照品5.3 mg，置于10 ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密吸取上述溶液1 ml，置于10 ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度摇匀，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备：取本品5 ml，置于25 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，静置，吸取上清液过0.45 μm的微孔滤膜，即得。

2.2.3 阴性对照溶液的制备：按处方比例及工艺制备不含金银花的阴性样品，按“2.2.2”项下方法制备阴性对照溶液。

2.2.4 色谱条件及专属性考察：采用SSievans Series 1500高效液相色谱仪，色谱柱为Rromasil C18柱(250 mm×4.60 mm，5 μm)，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(V∶V=13∶87)，检测波长为327 nm，柱温为26 ℃，流速为1.0 ml/min[5-10]。取上述对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液，分别进样20 μl，高效液相色谱图见图4。可见，绿原酸色谱峰的tR为12 min左右，无金银花的阴性对照溶液在此范围无色谱吸收峰，可以认为在本研究所制定的含量测定条件下，除金银花外的其他组分对本制剂中绿原酸含量的测定无干扰，即所选择的分析方法专属性良好。

A. 对照品溶液；B.供试品溶液；C.阴性对照溶液A. control solution；B. test solution；C. negative control solution图4 高效液相色谱图Fig 4 High performance liquid chromatography

2.2.5 线性关系考察：精密称取绿原酸对照品5.30 mg，置于10 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，溶解，摇匀，再吸取上述溶液2 ml，置于20 ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，制成质量浓度为53 μg/ml的溶液；精密吸取该溶液1、2和4 ml，分别置于10 ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，得质量浓度分别为5.3、10.6和21.2 μg/ml的溶液；再精密吸取质量浓度5.3 μg/ml的溶液2、4 ml，分别置于10 ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，得质量浓度分别为1.06、2.12 μg/ml的溶液。按“2.2.4”项下条件每个浓度进样3次，每次进样20 μl。以进样浓度为纵坐标(Y)，以峰面积为横坐标(X)作图，绘制标准曲线[11-15]。结果表明，绿原酸进样质量浓度在1.06～53.00 μg/ml之间时，与峰面积值呈良好的线性关系，R2=0.999 4，见图5。

图5 标准曲线Fig 5 Standard curve

2.2.6 重复性试验：取样品(批号：180122)共6份各2 ml，分别置于10 ml容量瓶中，制备供试品溶液，测定消炎宁糖浆中绿原酸的含量。结果其RSD为1.79%，表明重复性良好，见表1。

2.2.7 稳定性试验：取放置0、2、4、8、12及24 h的供试品溶液(批号：180316)，测定绿原酸的峰面积。结果显示，绿原酸峰面积的RSD为1.09%，表明供试品溶液至少在24 h内稳定，见表2。

2.2.8 加样回收率试验：精密量取已知绿原酸含量的样品6份(每份1 ml)，分别添加绿原酸对照品溶液(质量浓度530.0 μg/ml)0.2、0.4及0.6 ml，每个梯度平行2份，加甲醇至10 ml，按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，入液相色谱仪测定，计算加样回收率，结果见表3。

表1 重复性试验考察结果Tab 1 Inspection results of repeatability test

表2 稳定性试验考察结果Tab 2 Inspection results of stability test

表3 绿原酸的加样回收率试验结果Tab 3 Results of sample recovery test of chlorogenic acid

2.2.9 样品含量测定和含量限度的制定：取批号分别为170904、171219、180122、180309、180316及180510的样品6批，制备供试品溶液，测定绿原酸的含量。结果表明，6批样品中绿原酸平均含量为0.43 mg/ml，最低含量为0.36 mg/ml，考虑到中药材来源、加工及贮存等多种原因的影响，拟定每1 ml样品中绿原酸的含量不得低于0.30 mg，结果见表4。

表4 消炎宁糖浆中绿原酸的含量测定结果Tab 4 Results of content determination of chlorogenic acid in Xiaoyanning syrup

3 讨论

消炎宁糖浆中含十余味中药材，有辛凉解表、清热泻火解毒的功效。其中，牡丹皮清热凉血，消炎镇痛，活血化瘀，有抗炎抑菌的药理作用；青皮疏肝破气，散结消痰，上述二者分别为方中臣药和佐使药，指标性成分为丹皮酚和橙皮苷。金银花是方中君药，为治疗风热感冒初起要药，所含的绿原酸是金银花抗菌、抗病毒的主要有效药理成分之一。为了较好地反映消炎宁糖浆的内在质量，选择金银花、丹皮及青皮进行定性鉴别并测定绿原酸含量。本制剂薄层色谱鉴定的供试品均采用了有机溶剂萃取，结果显示，斑点清晰无干扰，重复性好。参考相关文献,进行绿原酸含量测定，经过反复试验，确定色谱条件，即流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(V∶V=13∶87)，检测波长为327 nm，柱温为26 ℃，流速为1.0 ml/min最为适宜。