高效液相色谱法测定金感胶囊中微量成分马来酸氯苯那敏的含量

赵 南，罗忠亮，韦 和，胡琦兰，吴贵辉

(1.贵州百灵企业集团制药股份有限公司学术研发部，贵州 安顺 561000； 2.贵阳中医学院药学院，贵州 贵阳 550002)

金感胶囊是贵州百灵企业集团制药股份有限公司在苗族验方的基础上，运用现代先进制药技术，精致加工而成的苗族药，原国家中药二类新药。该药有清热解毒、疏风解表的作用，用于普通感冒、流行性感冒及外感风热症。金感胶囊属于中西药复方制剂，其主要成分为金银花、穿心莲、板蓝根、蒲公英、对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺和马来酸氯苯那敏。金感胶囊成分复杂多样，马来酸氯苯那敏为其成分之一，处方中中药成分对其含量测定的影响较大。因此，有必要建立马来酸氯苯那敏成分测定质量评价系统，对其质量从整体到局部进行全面控制[1-3]。只有建立了客观科学的评价系统，才能比较不同批次金感胶囊质量的差异，为产品的优质优价提供依据。

1 材料

1.1 仪器

Agilent technologies 1200 series型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)；G13150 DAD检测器；KQ-250DB型数据超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 药品与试剂

马来酸氯苯那敏对照品(中国药品生物制品检验所，批号：100047-200606，供含量测定)；甲醇为色谱纯；水为娃哈哈纯净水：金感胶囊(贵州百灵企业集团制药股份有限公司，批号：20170207-20170216)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为依利特Sinochom ODS-BP(4.6 mm×250 mm，5 μm，柱号E2514127)；流动相为甲醇-含1%三乙胺和0.005 mol/L庚烷磺酸钠的0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH至3.0)(V∶V=60∶40)；流速为0.8 ml/min；柱温为25 ℃；检测波长为262 nm。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液：精密称取马来酸氯苯那敏对照品(105 ℃干燥3 h)适量，加流动相制备成含马来酸氯苯那敏40 μg的溶液1 ml，摇匀，即得。

2.2.2 供试品溶液：取本品10粒，取内容物，研细。取细粉0.9 g(约相当于马来酸氯苯那敏2 mg)，精密称定，置于50 ml容量瓶中，加甲醇15 ml，超声处理(功率300 W，频率40 kHz)10 min，加三氯甲烷30 ml，再超声处理5 min，放冷，加三氯甲烷稀释置刻度，摇匀，滤过。精密量取续滤液25 ml，蒸干，残渣加5%氢氧化钠10 ml使溶解，置于分液漏斗中，蒸发皿用10 ml水洗涤，洗液并入分液漏斗中，加40%氢氧化钠8 ml，用石油醚(30～60 ℃)振摇提取4次，每次40 ml，合并提取液，加10%盐酸乙醇溶液4 ml，置于水浴上蒸干，残渣加甲醇3 ml使溶解，移至25 ml容量瓶中，用流动相洗涤蒸发皿，洗液并入容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得[4-7]。

2.2.3 阴性溶液：精密称取缺少马来酸氯苯那敏的阴性样品0.9 g，按“2.2.2”项下方法制备，即得。

2.3 方法学考察

2.3.1 专属性试验：分别取马来酸氯苯那敏对照品溶液、供试品溶液、空白溶液及阴性溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图，见图1。可见，马来酸氯苯那敏的保留时间约为9.2 min，阴性溶液在此处无峰，即本研究条件下马来酸氯苯那敏与其他组分分离完全，分离度远>1.5，理论塔板数计算>10 000，因不同色谱柱分离能力的差异，故理论塔板数以马来酸氯苯那敏峰计，应不低于4 000[8-9]。

A.对照组溶液；B.供试品溶液；C.阴性溶液A. control solution; B. test solution; C. negative solution图1 高效液相色谱图Fig 1 High performance liquid chromatography

2.3.2 线性关系考察：取对照品20 mg，精密称定，置于50 ml容量瓶中，以流动相稀释至刻度，摇匀。得到质量浓度(c)=429.2 μg/ml。精密量取5 ml，稀释至50 ml容量瓶中，得到c=42.92 μg/ml的对照品溶液。进样量依次为5、10、15、20、25及30 μl，注入高效液相色谱仪，以262 nm为检测波长，测定峰面积。以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程：Area=834.168 074×Amt+0.600 402 8(Area：峰面积；Amt：进样量)，r=0.999 99。表明马来酸氯苯那敏在0～1.287 6 μg范围内具有良好的线性关系，且标准曲线通过原点。

2.3.3 精密度试验：精密吸取对照品溶液(42.92 μg/ml)10 μl，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，连续6次。结果显示，马来酸氯苯那敏峰面积的RSD为0.269%，表明该方法的精密度良好。

2.3.4 稳定性试验：精密称取供试品溶液(批号：20170207)，按供试品溶液的制备方法制备供试品溶液1份，在0、2、4、6、8、10、12及24 h内注入高效液相色谱仪10 μl，记录色谱图。结果显示，马来酸氯苯那敏峰面积的RSD为0.51%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.3.5 重复性试验：精密称取供试品溶液(批号：20170207)，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液6份，分别注入高效液相色谱仪10 μl，记录色谱图。结果显示，标示量百分含量的平均值为99.21%，RSD=1.74%<2%，表明该方法重复性良好。

2.3.6 加样回收率试验：精密称取供试品溶液(批号：20170207)9份，按80%、100%和120% 3个不同浓度，精密加入马来酸氯苯那敏对照品适量，挥干溶剂，按“2.2.2”项下方法处理样品，分别进样10 μl，记录色谱图，计算加样回收率。结果显示，平均加样回收率为98.76%，RSD为1.22%，见表1。

表1 马来酸氯苯那敏的加样回收率试验结果Tab 1 Results of sample recovery test for chlorphenamine maleate

表2 十批金感胶囊中马来酸氯苯那敏的含量测定结果Tab 2 Results of content determination of chlorpheniramine maleate in 10 batches of Jingan capsules

3 讨论

本试验考察了甲醇-水、甲醇-0.1%甲酸水、乙腈-水、甲醇-含1%三乙胺和0.005 mol/L庚烷磺酸钠的0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH至3.0)及乙腈-0.1%甲酸水等流动相体系[10-13]。结果表明，甲醇-含1%三乙胺和0.005 mol/L庚烷磺酸钠的0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH至3.0)作为流动相时峰形较好。

而采用甲醇超声的前处理方法，杂峰超载[14]。故在前处理方法上，由于马来酸氯苯那敏含量极少，选择层层除杂的方式[15-16]，除去非目标中药成分及其他含量高的化学药成分的干扰，良好地测定了马来酸氯苯那敏的含量。本研究为金感胶囊生产过程中的质量控制均一性和全面性提供了一定的科学依据，为金感胶囊质量标准的提升奠定了一定的基础。