间隙连接蛋白与卵泡成熟的研究

须文驰 陈卓

【摘要】目的：间隙连接蛋白从卵泡形成开始就存在并表达于卵巢组织中，随着卵泡的发育和成熟，颗粒细胞持续表达，当间隙连接蛋白43缺失时卵泡停止于腔前卵泡阶段。而间隙连接蛋白37主要起到介导卵母细胞与其周围颗粒细胞之间细胞通讯的作用。尽管成熟卵泡中存在着不同的问隙连接蛋白，间隙连接蛋白43是仍然是被发现的存在于小鼠早期腔前卵泡中的唯一间隙连接蛋白。因此，间隙连接蛋白的缺乏可导致卵泡发育停滞。

【关键词】间隙链接;卵泡发育;卵丘细胞;卵泡

【中图分类号】R249【文献标识码】B【文章编号】2095-6851（2019）02-058-02

不孕症为发生在育龄期，未采取任何避孕措施有正常性生活，同居1年为妊娠的患者。根据世界卫生组织评估，约每7对夫妇中有1对夫妇存在生殖障碍。在我国的流行调查中，国内不孕症患者比率已高达已婚夫妇的10%，增长超过上世纪80年代调查结果一倍[1]。而40年前兴起的治疗不孕不育的新方法-人类辅助生殖技术，在不断的进步中为数以万计的患病夫妇带来福音。

辅助生殖技术是以受孕为目的技术，方法包括对胚子、合子、胚胎进行医学技术等操作，其发展主体为体外受精-胚胎移植及其繁衍技术。上世纪60年代人类首次开展针对试管婴儿的研究，至1978年人类首例试管婴儿于英国诞生，仅十年后在张丽珠教授的带领下我国首例试管婴儿也成功诞生[2]。多项流行病学调查显示，不孕的原因复杂，女方因素占45-55%，男方因素占35%，男女双方共同因素占10%-20%，不明原因不孕约占10%[3、4]。其中女性不孕的病因主要有排卵异常、输卵管因素、子宫内膜异位症、子宫因素、宫颈因素[5]等;男方因素则分为睾丸前性因素，包括内分泌疾病等因素引起;睾丸性因素：染色体异常、引起睾丸损伤的其他病因;睾丸后性因素：精子运输障碍和精子功能障碍

基金项目：本论文是贵阳市科技局2015年科研项目课题研究成果 《定量检测间隙链接蛋白并预测卵泡成熟和IVF-ET妊娠结局的相关性研究》（项目编号【20051001】社21号）

作者简介：须文驰，女，汉族 1990年生，贵州贵阳人，初级，硕士。生殖内分泌。

通讯作者：陈卓，女，生殖内分泌。

等[5，6]。根据患者不孕不育的病因，可选择的辅助生殖包括人工授精（AI）、体外受精-胚胎移植技术（IVF-ET）、卵母细胞质内单精子注射（ICSI）[7]及胚胎移植前诊断（PDG）等技术。而这些技术能够成功的基础之一则是拥有正常健康的卵子。在辅助生育治疗的促排卵过程超出生理水平的促性腺激素使得多个卵子发育，其中可能存在一些内在缺陷的卵子也获得继续发育成熟的机会，而这些卵子与正常的卵子混杂在一起进行了受精，也可能被移植，导致妊娠率下降，流产率升高，所以移植前评估卵子的质量变得至关重要。

卵泡是女性生殖系统的基本功能单位，由膜细胞、颗粒细胞、卵母细胞组成，其中透明带分隔卵母细胞和颗粒细胞。目前评价卵母细胞和胚胎质量主要依赖于相应的形态学参数：卵冠丘复合物（OCCC）：卵丘颗粒细胞与卵母细胞之间的对话起关键作用，放射冠颗粒细胞凸入胞浆，穿过透明带，卵母细胞膜存在间隙连接细胞间分泌足量透明质酸，从而形成放射状，胞浆成熟与放射冠有重要的关系。成熟卵母细胞的形态评估方法包括MII卵母细胞的纺锤体、透明带、极体、透明带下间隙、卵细胞折光内容物等。卵子的无创非形态学评估：代谢评估指标包括卵泡液中氧、ATP、VEGF、培养系统的氧消耗量、抗苗勒管激素水平等。

在卵泡发育过程中卵母细胞与颗粒细胞，以及膜细胞之间的细胞连接可传递信号交流卵母细胞所需营养及。卵泡种数量较多的通讯蛋白为间隙连接蛋白（Cx）43，其缺失可直接影响卵泡成熟及早期胚胎的发育。子宫平滑肌和心肌细胞中均有间隙连接蛋白特异性表达;临产后子宫肌细胞间隙连接蛋白的大量形成，为子宫宫缩发动和同步收缩提供了必要的条件。其表达经过雌二醇、催产素等甾体激素调节后形成的刺激信号，致使mRNA和蛋白的表达上调，最终诱发宫缩。而孕酮可對间隙连接通道形成抑制作用机制为阻止间隙连接蛋白从高尔基体装配至肌肉细胞膜上。同时，因为编码间隙连接蛋白的基因的变异导致其他器官发生疾病的研究也在逐渐增多。Martin CS等人的研究及Barbara T等人的实验中分别印证了当编码Cx26及Cx30的基因变异时，实验组小鼠出现耳聋的症状。而在近20年里有大量的研究表明因编码Cx40及Cx43的基因变异致使小鼠出现心律失常。另外，在骨科相关的研究中，Flenniken及 Dobrowolski等人的研究中确认Cx43的变异与多种退行性变相关。在神经内科研究方向，既往同样有研究间隙连接蛋白的报道，其中Cx32的变异可致周围神经病变。

间隙连接的基础是间隙连接蛋白通道，它由六聚体蛋白-间隙连接蛋白组成。各项研究均证实Cx43在人卵丘细胞的间隙连接中扮演了重要角色，是卵泡能发育成熟的关键。卵丘卵母复合体中Cx43表达降低使得间隙连接通讯中断，从而恢复减数分裂。其他间隙连接蛋白如Cx37、Cx40在采用基因芯片的新技术下检测到存在，其在卵泡成熟的过程中在卵丘细胞上所扮演的角色仍有待进一步认知。大量研究表明，卵子发生与卵泡形成依赖于卵母细胞与卵泡液中细胞的相互影响。而部分研究发现卵丘细胞和颗粒细胞的转录组学中没有发现已知的标记物能同时评估该两种细胞。

由于卵泡处于无血管的微环境中，细胞间间隙连接对于卵泡成熟的重要性不言而喻。然而仍有许多表达在卵母细胞-颗粒细胞复合体上的未知连接蛋白也可能起到作用。未来需进一步深入研究间隙连接对卵巢卵泡发育的影响。

参考文献：

[1]罗丽兰.不孕与不育[M]. 2版. 北京：人民大学出版社， 2009：99-846.

[2]乔杰.人类辅助生殖技术的新进展[J].中国实用妇科及产科杂志.2008.1（24）：33-34.

[3]杨一华.李蓉.生殖医学专业英语教程[M].人民卫生出版社，2018：12-13.

[4]法尔科恩.赫德.临床生殖医学与手术[M].北京大学医学出版社. 2009，p550-557.