残疾基因同源物2相互作用蛋白在皮肤基底细胞癌中的表达及临床意义

袁绍萍 温炬 李常兴 田歆 秦思 张青华

1南方医科大学第二临床医学院，广州510630；2广东省第二人民医院皮肤科，广州510317；3 南方医科大学南方医院皮肤科，广州523008；4 广州市皮肤性病防治所，510095

皮肤基底细胞癌病程呈慢性进行性发展，至今尚无特异的肿瘤标志物用于诊断。残疾基因同源物2（DAB2）相互作用蛋白（disabled homolog 2 interactive protein，DAB2IP）是最近发现的Ras-鸟苷三磷酸酶激活蛋白（Ras-GAP）家族新成员，具有调控细胞凋亡、抑制血管生成、抑制肿瘤生长、转移和放疗耐受等生物学功能［1］。我们检测了DAB2IP 蛋白在皮肤基底细胞癌组织和良性皮赘组织中的表达，初步探讨其在皮肤基底细胞癌发生、发展中的作用。

一、材料与方法

1.临床资料：采用回顾性分析方法，选择2012年1月至2017年11月在广东省第二人民医院皮肤科及广州市皮肤病防治所门诊或住院接受皮肤肿物切除且资料完整的患者105例，其中除皮损外无其他明显临床症状，但是有皮赘，为明确皮赘性质，患者要求手术切除并经病理检查证实为良性皮赘患者26 例作为对照组，男15 例，女11 例，年龄30 ～65岁。病理证实为皮肤基底细胞癌患者79例作为病例组，男36例，女43例，年龄30 ～91岁；皮损位于头面部68例，躯干或四肢11 例，78 例为单发，1 例为多发（上唇和鼻部）；皮损最小0.2 cm×0.3 cm，最大6.0 cm×7.0 cm。79 例基底细胞癌患者中，浅表型7例（8.9%），结节溃疡型52例（65.8%），色素型4例（5.1%），囊肿型3例（3.8%），硬斑病型或瘢痕型13例（16.5%）。所有患者均为初发，术前均未行基因治疗、放化疗及免疫治疗等，均采用手术治疗，并签署了知情同意书。病例组均进行了免疫组化P53、Bcl-2 及Ki-67 蛋白检测。

2.免疫组化法检测两组手术切除组织中DAB2IP表达：所有标本均经4%甲醛固定，石蜡包埋，连续切片。用已知阳性切片作阳性对照，所有切片内汗腺上皮为内对照。采用1∶800 稀释的DAB2IP 兔多克隆抗体（AB87811，英国Abcam 公司）在4 ℃孵化器中孵育18 ～24 h，继而用二抗（RE7280-K 检测试剂盒，德国Leica 公司）孵育后，DAB 显色，苏木素复染。分析DAB2IP表达与皮肤基底细胞癌组织临床表型的相关性。

3.结果判定：两位医生独立阅片，采用双盲法进行结果判定。高倍镜下各选3 个视野观察，根据每个视野中阳性细胞数占总细胞数的百分比进行积分：0 ～5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为3分，51%～75%为3分，＞75%为4 分；染色强度以多数阳性细胞呈现的颜色特征为标准计分：无染色为0 分，淡黄色为1 分，棕黄色为2 分，褐黄色为3分。二项相加，0 ～1分为阴性（－），2 ～3分为弱阳性（+），4 ～5分为中等阳性（++），6 ～7分为强阳性（+++）。若有不同评判结果（有分歧的样本为总样本的1%），需重新进行评估，直到得到两位专家一致的意见。

4.统计学处理：所有数据通过Epidata3.0 录入，并用SPSS21.0 进行统计分析。本研究资料均为计数资料，采用χ2检验进行比较。P＜0.05表示差异有统计学意义。

图1 免疫组化检测良性皮赘组织和基底细胞癌组织中残疾基因同源物2相互作用蛋白（DAB2IP）的表达 1A：良性皮赘组织（×200），呈弱阳性或无表达；1B（×100）、1C（×200）：浅表性基底细胞癌组织，尚未突破基底膜的肿瘤细胞团块大部分被染成棕黄色至褐黄色，其间仍可见较多未染色的瘤细胞；1D（×100）、1E（×200）：浸润性基底细胞癌组织，浸润至真皮的肿瘤细胞绝大多数被染成棕黄色至褐黄色，其间可见少量的未染色瘤细胞，DAB2IP呈强阳性表达

二、结果

1.病例组和对照组DAB2IP 蛋白表达：DAB2IP 在对照组中呈弱阳性或无表达。病例组中，33 例DAB2IP 为强阳性表达（图1）。DAB2IP蛋白在对照组和病例组中的阳性表达率分别为42.3%和93.7%，差异有统计学意义，见表1。

2.DAB2IP 表达与基底细胞癌临床表型及病理指标的相关性分析：DAB2IP 蛋白阳性率在不同年龄、性别及肿瘤大小组间差异均无统计学意义（均P＞0.05），但浅表性（原位癌）组明显低于浸润性组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

3.P53、Bcl-2、Ki-67 与DAB2IP 在皮肤基底细胞癌中的表达情况：79例皮肤基底细胞癌中，Ki-67蛋白阳性（阳性细胞＞10%）31例（39.2%），P53蛋白阳性35例（44.3%），Bcl-2蛋白阳性42 例（53.2%）。其中Ki-67 蛋白阳性表现为瘤细胞团部分着色，细胞核着色强阳性，且每个随机视野下阳性细胞比例大于10%。此外，31例表达Ki-67蛋白的患者也均阳性表达了DAB2IP蛋白。

三、讨论

DAB2IP是近年来新发现的一种GTP酶激活蛋白，具有Ras-GAP同源结构域，即酶的活性中心。其可抑制Ras的活性，介导多种肿瘤相关信号通路，如Ras-Raf-MAPK 通路、PI3K/AKT 通路、NF-κB 通路、EGFR 通路等，从而影响细胞的增殖、存活和凋亡［2］。多项研究发现，DAB2IP 在肝癌［3］、结直肠癌［4］、胆囊癌［5］、前列腺癌［6］等实体肿瘤中的表达下降，从而猜测DAB2IP具有抑癌作用。

表1 残疾基因同源物2相互作用蛋白（DAB2IP）在良性皮赘（对照组）和基底细胞（病例组）组织中的表达

表2 残疾基因同源物2相互作用蛋白（DAB2IP）表达与基底细胞癌临床表型及病理指标相关性分析

本研究显示，皮肤基底细胞癌组织中DAB2IP阳性表达率（93.67%）显著高于良性皮赘组织（42.30%），提示DAB2IP可能参与皮肤基底细胞癌的发生。此外，浅表性基底细胞癌DAB2IP 阳性率低于浸润性基底细胞癌，其DAB2IP 高表达可能提示肿瘤进展。此结果与前列腺癌［6］、结直肠癌［4］、胆囊癌［5］等中DAB2IP的抑癌作用相反。我们推测，DAB2IP本身既可作为抑癌基因也可作为致癌基因，可能主要取决于载有此基因的组织细胞的种类或所处的不同阶段。

本研究中，79 例皮肤基底细胞癌中有31 例Ki-67 蛋白阳性，且Ki-67阳性的癌细胞均表达DAB2IP蛋白。Ki-67抗原是一种存在于增殖细胞核基质内的核蛋白，主要表达于细胞生长周期G1、S、G2 和M 期，在G0 期时缺乏表达，是用来检测细胞增殖的常用指标。Ki-67和DAB2IP蛋白的同时表达可能提示，肿瘤细胞处于非静止期和较高的增殖状态。

目前，尚未有研究DAB2IP 在皮肤癌中作用的报道，本研究也未从细胞层面来证实DAB2IP 在皮肤基底细胞癌中的致癌作用，仅起到抛砖引玉的作用，以期对这一领域的研究提供线索。