ECRG4在口腔鳞癌中的表达及其临床意义

尹国相，徐文品，邹俊东，焦 琨，刘冬蕊，邢如霄，叶佳朋，张 伟*

(吉林大学口腔医院 1.口腔颌面外三科·吉林省牙发育及颌骨重塑与再生实验室；2.修复科,吉林 长春130021)

口腔鳞状细胞癌(OSCC)是口腔颌面部最常见恶性肿瘤，约占头颈部恶性肿瘤80%以上[1]，本研究通过免疫组织化学技术检测食道癌相关基因4(ECRG4)在口腔鳞癌中的表达情况，分析其与口腔鳞癌病理分型的关系。

1 材料与方法

1.1 临床资料

选取2017-2018年经吉林大学口腔医院确诊的30例OSCC患者，其中男性18例，女性12例，年龄47-76岁；其中高分化鳞癌12例，中分化鳞癌12例，低分化鳞癌6例，对应的癌旁组织30例，收集10例正常患者牙龈组织。纳入标准：患者均系成年人，病例资料完整，无其他系统性疾病，术前无放疗、化疗或激素治疗史，术后均经病理组织学确诊。病理标本均连续切片，每例标本选取不同部位切片5张。

1.2 方法

ECRG4多克隆抗体购自北京博奥森生物技术有限公司，工作浓度1∶500；兔源性超敏二步法免疫组织化学检测试剂盒、浓缩型DAB试剂盒购自北京中杉金桥公司；山羊血清、枸橼酸盐抗体修复液购自武汉博士德生物工程有限公司。免疫组化染色按试剂盒说明书操作。采用OlympusBX51T显微镜进行观察、拍照。

1.3 结果判定标准

采用半定量分析，显微镜下随机选取5个视野观察，按阳性着色范围和阳性染色强度分别计分。阳性细胞数量积分：阳性细胞数≤5%记0分，5%<阳性细胞数≤25%记1分，25%<阳性细胞数≤50%记2分，50%<阳性细胞数≤75%记3分，阳性细胞数>75%记4分；染色强度积分：无色记0分，淡黄色记1分，黄色或深黄色记2分，棕褐色记3分。染色强度积分与阳性细胞数量积分相加，≥6分为强阳性(+ + +)，4、5分为阳性(+ +)，2、3分为弱阳性(+)，0分为阴性(-)，弱阳性(+)和阴性(-)记阴性表达，强阳性(+ + +)和阳性(+ +)记阳性表达。

1.4 统计学分析

使用EXCEL和SPSS 24.0统计软件进行分析。采用χ2检验、t检验对本实验的结果进行相应统计分析，所有统计数据以P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 鳞癌组织、癌旁组织及正常组织中ECRG4表达情况

30例口腔鳞癌组织中，ECRG4阳性表达14例，阳性表达率46.7%(14/30)；相对应30例癌旁组织中,ECRG4阳性表达20例，阳性表达率66.7%(20/30)；10例对照组中ECRG4全部阳性表达，阳性表达率100%(10/10)。三组间差异具有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 鳞癌组织、癌旁组织及正常组织中ECRG4表达情况

2.2 不同分化程度鳞癌组织中ECRG4表达情况

高分化鳞癌组织12例，ECRG4阳性表达9例，阳性表达率75%；中分化鳞癌组织12例，ECRG4阳性表达4例，阳性表达率33.3%；低分化鳞癌组织6例，ECRG4阳性表达1例，阳性表达率16.7%，可见分化程度越低，ECRG4表达下调越明显，三组间差异具有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 OSCC患者癌组织中ECRG4阳性表达率

3 讨论

口腔鳞状细胞癌是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤，常规治疗手段包括手术治疗、放疗和化疗，但以上三种方法均会对患者造成不同程度的副损伤，因此，寻找肿瘤特异性治疗的靶点，成为近年来学者关注的热点。

ECRG4是使用mRNA差异显示技术从高癌症家族和正常食管组织分离的差异表达序列[2]。ECRG4的基因位于染色体2 q14.1-14.3，是一段约12500个碱基组成的序列，其cDNA全长为772 bp，开放阅读框由444个碱基组成，编码148个氨基酸残基的多肽[3]。在大量正常组织中均有表达，包括食管、眼、乳房、心脏、肾脏、肠道、淋巴细胞等。体外实验也表明，在多种肿瘤细胞中，如结肠癌细胞，人头颈部肿瘤细胞，人喉癌细胞中过表达ECRG4可以促进肿瘤细胞的凋亡，抑制肿瘤细胞的增殖[4，5]，因此，ECRG4被认为是一种候选抑癌基因。Wen等发现食管癌患者中ECRG4的表达水平与食管癌患者的TNM分期，肿瘤的浸润程度，淋巴结转移程度及手术后复发率密切相关[6]，而类似的现象在乳腺癌、结肠癌和鼻咽癌中也得到证实[7-9]。

本研究结果显示：ECRG4在口腔组织中有表达。30例口腔鳞癌组织中ECRG4阳性表达率明显低于口腔正常组织，而肿瘤分化程度越低，其表达下调越明显，说明ECRG4与口腔鳞癌的发生、发展密切相关，而与患者年龄、性别无关，说明ECRG4可以作为一种口腔鳞癌候选抑癌基因，其发挥抑癌作用的机制可能是通过下调 NF-κ 以及该通路的靶基因—Cox-2 的表达来实现的[15]。本研究初步探讨ECRG4在口腔鳞癌中的表达及其临床意义，旨在为口腔鳞癌的基因治疗及分子靶向治疗提供新的研究方向。