苦皮藤不同部位有效成分提取研究

程茂高，乔卿梅，王文静，魏志华，赵 青

(河南牧业经济学院，河南 郑州 450046)

苦皮藤为卫矛科南蛇藤属多年生藤本植物，广泛分布于我国长江流域和黄河流域各省，具有祛风除湿、活血通络、解毒杀虫等功效，是重要的中药资源，临床上可用于治疗头癣、跌打、痈疽等。近年来，因具有抗肿瘤活性、神经保护活性以及在自身免疫性疾病中的作用，苦皮藤受到越来越多的关注[1-2]。苦皮藤提取物还具有杀菌活性和杀植物线虫活性[3]。其杀虫成分是以β-二氢沉香呋喃为骨架的多元醇酯类次生代谢产物，具有拒食、麻醉、熏蒸和毒杀等作用，主要分布在根皮中,叶子、果、木质部也有。目前对于苦皮藤的化学成分、杀虫机理与作用方式、农药制剂等的研究都取得了一定的成果[4-5]，但对其提取工艺的研究还不深入[6-7]。本研究以苦皮藤素 A 的含量为标准，对苦皮藤根皮、茎皮、假种皮、种子、叶等不同部位的有效成分提取工艺进行研究，望为其有效利用提供依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

苦皮藤Celastrusangulatus采集于河南南阳宝天曼，经过本课题组鉴定。苦皮藤素A标准品由河南省生物技术开发中心提供，含量≥98%，化学名称为1β,2β-二乙酰氧基-4α,6α-二羟基-8α,15-二异丁酰氧基-9β-苯甲酰氧基-β-二氢沉香呋喃，分子式C34H46O13，相对分子质量662.7。Alliance-e2695型高效液相色谱仪(新加坡沃特斯公司)，HH-4S电热恒温水浴锅(江苏省金坛市峰华仪器厂)，RE-2000A旋转蒸发器(常州市智阳机械设备有限公司)，SHB-95B循环水式真空泵(郑州市长城科学器材有限公司)，BSA224S-CW电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司)，色谱甲醇(天津市四友精细化学品有限公司)，其它试剂为市售分析纯。

1.2 实验方法

1.2.1苦皮藤有效成分的提取

材料的提取采用回流提取法。将苦皮藤的根皮、茎皮、假种皮、种子、叶分别在60℃ 烘箱中烘干，粉碎后过40目筛。称取50g粉末干样置于无纺布小袋内，放入1000mL圆底烧瓶中，分别加入适量的甲醇、石油醚和氯仿后，浸泡1h，水浴条件下回流提取，过滤。残渣重复提取2次，合并滤液，用旋转蒸发仪减压浓缩，浓缩液置于蒸发皿中，水浴蒸发至无溶剂，得提取物，4℃ 保存备用。

1.2.2苦皮藤素A的含量测定

将提取物分别用甲醇溶解后，滤去不溶物，收集滤液，准确量取一定量的滤液稀释一定倍数，经0.45μm 微孔滤膜过滤，得待测样品，HPLC 测定其含量。色谱条件：Lab Tech C18柱(150mm×4.6mm，5μm)；流动相甲醇水=73；进样量：10μL；流速：1.0m L/min；检测波长232nm。

苦皮藤素A得率值为“平均值±标准差”，利用SPSS20软件 LSD法进行分析，不同大写字母表示处理间差异极显著(P<0.01)，不同小写字母表示处理间差异显著(P<0.05)。下同。

2 结果与分析

2.1 不同提取工艺对根皮提取率的影响

从表1可以看出，不同溶剂对苦皮藤素A 的提取率有显著影响，提取能力为甲醇>石油醚>氯仿。使用甲醇作为提取溶剂时，适当提高提取温度，可以利用较低的料液比在较短的时间内取得较高的提取率；而对于石油醚，则需要通过提高料液比、降低提取温度、延长提取时间的途径来提高苦皮藤素A 的提取率。综合考虑，选用甲醇作为苦皮藤根皮的提取溶剂具有更高的经济性和安全性。

图1 苦皮藤素A标准品的HPLC图

表1 不同提取工艺下根皮中苦皮藤素A得率

2.2 苦皮藤不同部位有效成分提取率

表2 苦皮藤不同部位有效成分提取率

3 讨论与结论

苦皮藤各部位所含化学成分存在差异，其生理作用也各不相同。陈玲等[8]从苦皮藤根皮石油醚提取物中分离到7个化合物，朱文丽等[9]从苦皮藤根皮醇提取物中鉴定出11个化合物，龚雪龙[10]从苦皮藤根皮的乙醇提取物中分离得到 17个化合物，张海艳等[1]从苦皮藤种子的石油醚回流提取液中分离得到6个β-二氢沉香呋喃多醇酯类化合物，杨征敏等[11]从苦皮藤假种皮的25%醇提取物中分类鉴定出3种具有杀菌活性的化合物。本研究以苦皮藤素A作为苦皮藤活性成分指标时，按照料液比16加入甲醇作为提取溶剂，在适当的高温条件(如70-80 ℃)下提取2 h，提取3次，可以从苦皮藤的根皮、茎皮、假种皮、种子、叶中提取较高含量的有效成分。不同溶剂对苦皮藤不同部位提取的结果提示，苦皮藤素A在苦皮藤中的分布：茎皮>叶>假种皮>种子。