HPLC法测定羚贝止咳糖浆中吗啡的含量

王天学，刘学良，魏文芝

(1.青海省食品检验检测院，青海 西宁 810016；2.青海省食品药品监督管理局食品药品审评中心，青海 西宁 810007；3.青海省药品检验检测院/青海省中藏药现代化研究重点实验室，青海 西宁 810016)

羚贝止咳糖浆由紫苑(蜜)、茯苓、平贝母、罂粟壳、山楂、羚羊角等十三味中药制成，具有宣肺化痰、止咳平喘的功效[1]，常用于治疗小儿肺热咳嗽及痰湿咳嗽[2，3]。处方中罂粟壳主要有效成分吗啡，具有良好的镇静镇咳作用，但同时具有成瘾性与中枢抑制，使用不当会对人体造成危害，对于儿童常用药，安全性尤为重要。羚贝止咳糖浆现行质量标准收载于卫生部药品标准中药成方制剂第十八册[4]，对吗啡无控制指标，因此为有效控制羚贝止咳糖浆中吗啡的含量，本研究参考相关文献[5，6]，采用高效液相色谱法对吗啡含量进行测定。此方法简单、可靠、重现性好，报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Waters e2695-2487高效液相色谱仪(UV检测器，Empower 3工作站，美国Waters公司)，CP225D电子天平(十万分之一，德国Sartorius公司)。

1.2 试药

吗啡(中国食品药品检定研究院，批号171201-200822)；3批羚贝止咳糖浆样品分别由吉林省东丰药业股份有限公司(批号20150112)、吉林龙泰制药股份有限公司(批号160713)、吉林敖东集团力源制药股份有限公司提供(批号171207)；色谱乙腈(Merck)及纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Sunfire C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：乙腈：0.01 mol·L-1磷酸氢二钾∶0.005 mol·L-1庚烷磺酸钠溶液(18∶41∶41)；检测波长：220 nm；柱温：30 ℃；流速：1 mL·min-1；进样量：5 μL。理论塔板数以吗啡峰计不低于15 000。

2.2 溶液的配制

2.2.1 对照品溶液 精密称取吗啡对照品6.16 mg，置100 mL量瓶中，加含5 %乙酸的20 %甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀(即得每1 mL 含吗啡 0.246 4 mg的对照品溶液)，精密量取5 mL，置20 mL量瓶中，加含5%乙酸的20%甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1 mL 含吗啡0.061 6 mg的对照品溶液)。

2.2.2 供试品溶液 精密量取本品5 mL，加浓氨溶液1 mL，使成碱性，用三氯甲烷提取4次，每次 20 mL，合并提取液，热水浴挥干三氯甲烷，残渣加含5 %乙酸的20 %甲醇溶液使溶解，并定量转移至 5 mL棕色量瓶中，加含5%乙酸的20%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

2.2.3 阴性对照溶液 取除罂粟壳外的其他药材饮片，按照羚贝止咳糖浆的处方工艺模拟制成阴性样品，并按照供试品溶液制备方法进行制备，既得羚贝止咳糖浆无罂粟壳阴性对照溶液。

2.3 专属性试验

精密量取对照品溶液、供试品溶液与阴性对照溶液，按“2.1”项下的色谱条件进样，记录色谱图。羚贝止咳糖浆供试品溶液色谱图和吗啡对照品溶液色谱图在相应的位置上有相同的色谱峰，而阴性对照溶液在此处无色谱峰。结果表明，处方中其他成分在此色谱条件下不影响吗啡的测定，此方法专属性较强，可以用于羚贝止咳糖浆中吗啡的测定。结果见图1。

2.4 线性关系考察

分别精密吸取上述浓度为 0.246 4 mg·mL-1的吗啡对照品溶液0.1、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 mL，分别置 10 mL棕色量瓶中，加含5%乙酸的20%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀。分别精密量取 5 μL，按“2.1”项下色谱条件，注入高效液相色谱仪，记录峰面积，以吗啡浓度(X，μg·mL-1)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，进行线性回归，得吗啡回归方程：Y=3 219 780X-1 499.8，r=0.9 999。结果表明，吗啡在2.464～246.4 μg·mL-1范围内具有良好的线性关系。

2.5 精密度试验

精密吸取同一对照品溶液(0.059 4 mg·mL-1)5 μL，在“2.1”项色谱条件下，连续进样6次，记录吗啡对照品溶液峰面积，计算得出RSD为0.1%(n=6)，表明HPLC仪器精密度良好。

2.6 重复性试验

精密量取由吉林东丰药业股份有限公司生产的同一批号的样品(批号20150112)6份，按“2.2”项制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件，精密量取5 μL，测定吗啡含量，结果平均含量为 16.38 μg·mL-1，RSD为1.2%(n=6)，表明此方法重复性良好。

图1 HPLC色谱( 峰1为吗啡)

2.7 稳定性试验

精密量取由吉林东丰药业股份有限公司生产的同一批号样品(批号20150112)，按“2.2”项下的方法制成供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件分别于0、6、12、18、24 h，注入高效液相色谱仪，以吗啡峰面积的相对标准偏差反映样品的稳定性，测得RSD为0.99 %，表明供试品溶液中吗啡在本研究所述实验条件和环境中24 h内稳定。

2.8 加样回收率试验

精密量取已知含量的由吉林东丰药业股份有限公司生产的同一批号的样品(批号20150112，吗啡含量为 16.38 μg·mL-1)6份，每份 2.5 mL，分别精密加入吗啡对照品溶液(浓度为 0.049 28 mg·mL-1) 1 mL，按“2.2”项下的方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，计算结果，吗啡加样回收率为98.8%，RSD为1.44%(n=6)，表明回收率满足测定要求。见表1。

2.9 样品测定

取3个厂家的3批羚贝止咳糖浆，按“2.2”项下的方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，吗啡含量测定结果分别为16.4、13.6、14.3 μg·mL-1，3批样品中吗啡含量测定结果均在此检查方法的线性范围内。

表1 吗啡加样回收率

3 结语

羚贝止咳糖浆现行质量标准控制指标少，仅针对麻黄、金银花、陈皮三种药味进行薄层色谱鉴别，无含量测定指标。张宪平等[7]对制剂中绿原酸进行定量测定，胡安青[8]对制剂中橙皮苷进行含量测定，对制剂中吗啡含量的控制未见报道。

罂粟壳为罂粟科植物罂粟(PapaversomniferumL.)的干燥成熟果壳，味酸涩，性平，有毒，用于久咳、久泻、脱肛、脘腹疼痛[9]，使用不当会引起毒副作用，不但影响疾病治疗还会引起社会问题[10]，本研究建立的吗啡HPLC测定方法，操作简单，准确性好，可用于羚贝止咳糖浆中吗啡的质量控制。