女贞子多糖抑制MDA缓解CCl4致小鼠肝损伤

2019-03-20梁世岳王建国周志江李海花

中国饲料 2019年5期

朱琪，梁世岳，王倩，王建国，周志江，李海花

（1.天津大学化工学院，天津津南300350；2.天津市畜牧兽医研究所，天津西青300381；

3.天津师范大学生命科学学院，天津西青300387；4.天津农学院动物科学与动物医学学院，天津西青300384）

女贞子多糖（LLPS）是女贞子的重要活性成分，具有抗炎、抗氧化、抗癌和调节免疫等多重功效（Yin等，2017）。由四氯化碳（CCl4）诱导的小鼠化学性肝损伤模型主要损害肝实质组织，其机理十分复杂，与脂质过氧化反应相关（Jiang等，2018）。本试验研究女贞子多糖对小鼠生长性能、肝损伤后肝脏指数、肝功能和脂质过氧化产物丙二醛（MDA）的影响，旨在探明其保肝的作用机制，为临床应用奠定基础。

1 材料方法

1.1 试验动物试验动物购自北京实验动物中心，清洁级昆明雄性小鼠36只，体重18 g左右，天津市畜牧兽医研究所动物房饲养，预饲期1周。饲养管理严格按照《实验动物管理条例》执行。

1.2 药品的准备

1.2.1 女贞子多糖的制备根据水提纯的原理进行女贞子多糖的提取，称取40 g的女贞子粉放于320 mL的蒸馏水中，100℃加热回流2 h，用真空泵抽滤，把分离出的水溶液用旋转蒸发仪脱除水分浓缩至浓度约3 g/mL时停止，此时加入一定量乙醇（约67 mL），让乙醇的体积分数占70%，再用玻璃棒进行搅拌15 min，后静置沉淀6 h。真空泵抽滤析出沉淀物，抽滤出得到的滤饼为女贞子多糖，最后放于烘箱中烘干，称重得到4.1 g女贞子多糖，得糖率为10.25%。

1.2.2 四氯化碳注射液的制备 0.1 mL的CCl4添加9.9 mL的液体石蜡混匀，制得1%的CCl4注射液。

1.3 试验分组与造模攻毒前：清洁型试验昆明小白鼠36只，均雄性，随机分为6组，每组6只，即空白对照组（正常饮水），模型组（CCl4肝损伤），阳性药物组（饮水添加0.25%肝太乐0.1g/片），女贞子高、中、低剂量组（饮水中添加0.2%、0.1%和0.05%的女贞子多糖）。自由饮水采食，每天记录体重、饮水量和采食量。

攻毒后：在第14、16、19天和第21天对除对照组外的每一只小白鼠皮下注射1%的CCl4液体石蜡溶液10 mL/kg。末次攻毒后全部小鼠禁食12 h后处死解剖分离肝脏称重，按当日体重计算肝脏指数（mg/g），用全自动生化分析仪测定血清生化指标及MDA。

1.4 统计分析试验数据用Excel软件录入，然后用SPSS 20.0软件进行数据的单因素方差分析（one-way ANOVA），结果用“平均值±标准差”表示，P＞0.05表示差异不显著，P＜0.05表示为差异显著，P＜0.01为差异极显著。

2 结果

2.1 女贞子多糖对小鼠生长性能的影响在饮用女贞子多糖试验第14天，攻毒前对各组小鼠称重，记录饮水量和采食量，所得结果见表1。由此可知，添加女贞子多糖中剂量组料重比最低，但与各组比较差异不显著（P＞0.05）。

表1 女贞子多糖对小鼠生长性能的影响

2.2 女贞子多糖对小鼠肝脏指数的影响由表2可知，模型组小鼠肝脏重量与对照组比较差异极显著（P＜0.01），与其余各组比较差异显著（P＜0.05）。从肝脏指数来看，模型组极显著高于对照组（P＜0.01），其他各组均能不同程度的对抗肝脏指数的升高，且除低剂量组与模型组比较差异显著（P＜0.05）外，其余各组与模型组比较均差异极显著（P＜0.01）。

表2 女贞子多糖对小鼠肝脏指数的影响

2.3 女贞子多糖对小鼠肝脏功能（血清生化指标）的影响由表3可知，模型组的血清总蛋白水平比对照组显著降低（P＜0.05），其余各组均有明显减轻这种降低的趋势（P＜0.05），但各组间差异不显著（P＞0.05）。血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶的变化趋势基本一致，各药物组均有缓解转氨酶升高的作用，且差异显著（P＜0.05），从AST/ALT的值来看，模型组显著低于对照组（P＜0.05），各药物组除了女贞子高剂量组与模型组差异不显著（P＞0.05），其余各药物组差异均显著高于模型组（P＜0.05）。

2.4 女贞子多糖对小鼠肝脏和血清MDA含量的影响由表4可知，各组小鼠肝脏和血清中的MDA变化趋势基本一致，模型组极显著高于对照组（P＜0.01），各药物组除肝脏女贞子多糖低剂量组显著低于模型组（P＜0.05），各组均极显著低于模型组（P＜0.01）。

表3 女贞子多糖对小鼠肝功能指标的影响

表4 女贞子多糖对小鼠肝脏和血清MDA含量的影响

3 讨论

女贞子多糖作为畜禽补充剂，具有药用和营养双重功效，其丰富的营养成分可促进畜禽的生长发育，降低腹泻率，提高平均日增重，同时调节脂类代谢，增强其生产性能（黄新苹等，2016）。本研究发现，在饮水中添加女贞子多糖对小鼠的生长性能无显著影响，说明女贞子多糖对小鼠生长并无毒副作用，饮水安全。研究表明，日粮中添加不同水平女贞子萃取物有提高断奶仔猪日增重、采食量、降低料重比的趋势，但差异不显著（P＞0.05）（张超等，2012）。这与本研究的结果相一致。肝脏指数是反映肝脏功能的重要指标之一，CCl4所致的小鼠肝损伤模型可出现肝组织充血、水肿，脂肪变性，肝指数上升等一系列的病变（吕娟涛等，2010）。本研究发现，女贞子多糖各组均可显著缓解模型组所致的肝指数升高，且与肝太乐组作用相一致，这说明女贞子多糖的保肝效果和肝太乐近似。当肝脏发生病变时，肝细胞合成蛋白质的功能减退，血浆中蛋白质即会发生质和量的变化。临床上用各种方法检测血浆蛋白的含量来协助诊断肝脏疾患，并作为疗效观察，预后判断的指标。本研究发现，模型组小鼠血清总蛋白比对照组显著降低，中药各组均有缓解这种降低的作用，且效果与肝太乐相当。

ALT与AST主要分布在肝脏的肝细胞内，如果肝细胞坏死，ALT和AST含量就会升高，其升高的程度与肝细胞受损的程度相一致，因此是目前最常用的肝功能指标（Zhang等，2018）。本研究结果显示，女贞子多糖可以缓解肝损伤所致的ALT和AST升高，但效果不如肝太乐。

丙二醛为肝脏脂质过氧化的产物，CCl4所致的肝损伤机制与自由基密切相关，生物体内，自由基作用于脂质发生过氧化反应，氧化终产物为丙二醛，会引起蛋白质、核酸等生命大分子的交联聚合，且具有细胞毒性，丙二醛含量的多少说明肝脏细胞膜受到伤害的程度（Wang等，2018）。由结果可知，女贞子多糖可以显著降低CCl4所致的肝脏和血清中MDA含量，通过抑制脂质过氧化作用起到保肝的效果，这与特女贞苷保肝护肝的机理相一致（胡冬梅等，2016）。