太白楤木总皂苷对无水乙醇致大鼠胃溃疡的预防作用▲

范 妤 郭东艳 李 涛

(陕西中医药大学基础医学院，咸阳市 712046，电子邮箱：806919125@qq.com)

胃溃疡是消化性溃疡中最常见的类型。胃黏膜上皮的完整性、黏膜细胞更新、表皮生长因子、黏液-碳酸氧盐屏障、黏膜血流、前列腺素等因素构成了黏膜的防御屏障，幽门螺杆菌感染、应激、药物等因素是导致溃疡的攻击因子，保护胃黏膜的防御因子失衡是胃溃疡发生的主要原因[1-2]。中医药在防治胃溃疡方面具有独特优势。太白楤木是来五加科楤木属植物，药用根皮，也称楤木白皮、飞天蜈蚣七，是“秦岭七药”之一。太白楤木根皮具有祛风除湿、清热镇痛、活血散瘀功效[3]。太白楤木总皂苷(total saponin ofAraliataibaiensis，TSAT)是本实验室从太白楤木根皮中经提取纯化得到的皂苷类物质[4-6]。在前期实验基础上，本研究通过建立无水乙醇诱发大鼠胃溃疡模型，探讨太白楤木总皂苷对胃溃疡的预防作用，为“七药”资源药理作用的开发提供参考。

1 材料与仪器

1.1 实验动物 36只雌性SD大鼠，体重(200±20)g，购于第四军医大学动物试验中心，动物合格号：SCXK(军)2012-0007。适应性饲养7 d后用于实验。

1.2 实验药物及试剂 太白楤木药材购于陕西省眉县药材公司，经陕西中医药大学高级实验师鉴定为五加科植物太白楤木根皮；TSAT是根皮提取物，淡黄色粉末，气微，味微苦，含总皂苷80%，避光室温下保存。总蛋白定量试剂盒、H+-K+-ATP酶活力测试盒均购自南京建成生物工程研究所(生产批号：20180128，20180131)，其他试剂均为分析纯。

1.3 仪器 RM2235组织切片机(德国徕卡公司)，Centrifuge 5417R台式冷冻高速离心机(德国Eppendorf公司)，Model680酶标仪(北京伯乐生命科学发展有限公司)，ZEISS科研级显微镜(德国卡尔·蔡司公司)。

1.4 实验方法

1.4.1 实验分组与给药方法：使用随机数字表将36只雌性SD大鼠分为空白组、模型组、胃康灵组以及低、中、高剂量TSAT组，每组6只。空白组和模型组均给予0.9%生理盐水灌胃，胃康灵组给予胃康灵胶囊(黑龙江葵花药业股份有限公司，批号：20170920)0.5 g/kg灌胃，低、中、高剂量TSAT组分别给予3、6、12 g/kg的TSAT灌胃(给药剂量参照成人用量，按人与大鼠间等效剂量公式折算)。体积灌胃 10 ml/kg，1次/d，连续7 d。第6天起禁食不禁水 24 h，于末次给药1 h后，除空白组外，其余各组均予10 ml/kg无水乙醇灌胃，1 h后水合氯醛麻醉。

1.4.2 取材：麻醉后，从腹主动脉收集血液，4℃下3 000 r/min离心10 min，分离血清，-20℃冰箱保存。自胸骨剑突下沿腹中线开腹，暴露胃，结扎贲门与幽门后取出胃，检测胃液pH后，沿胃大弯剪开，纯净水轻轻洗出胃内容物，滤纸吸干，平铺于玻璃板上。一般观察后将部分胃组织浸泡于10%甲醛溶液中固定，将其余部分置于-80℃冰箱保存。

1.4.3 胃液pH值测定：取两滴胃液滴于pH试纸上，测定其pH值。

1.4.4 胃组织病理学检查：用10%甲醛固定大鼠胃组织48 h，制作4 μm石蜡切片，苏木精-伊红(hematoxylin-eosin staining，HE)染色，光镜下观察拍照，观察胃黏膜病理形态学改变。

1.4.5 胃黏膜组织H+-K+-ATP酶活性检测：取胃组织制备胃黏膜组织匀浆，测定总蛋白和胃黏膜组织H+-K+-ATP酶活力，均严格按照试剂盒说明书操作。

1.5 统计学分析 应用SSPS 18.0软件进行统计分析。计量资料以(x±s)表示，组间比较采用方差分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组大鼠胃黏膜大体形态 空白组大鼠胃黏膜表面光滑，呈淡粉红色；模型组大鼠胃黏膜呈深红色，肿胀，沿纵行皱襞可见条索样出血；胃康灵组大鼠胃黏膜肿胀，有散在点状出血；与模型组比较，各剂量TSAT组大鼠胃黏膜出血及损伤程度减轻。见图1。

2.2 各组大鼠胃黏膜的组织学形态 空白组大鼠胃壁黏膜层连续，胃小凹清晰，胃黏膜上皮及胃底腺结构完整；模型组大鼠胃黏膜层薄，上皮和固有层部分缺失，伴水肿，可见出血及坏死组织；胃康灵组胃黏膜较完整，出血及坏死均较模型组减轻；与模型组比较，TSAT各剂量组胃黏膜损伤均有不同程度减轻，胃黏膜较完整，出血及坏死组织减少。见图2。

2.3 各组大鼠胃液pH值及H+-K+-ATP酶活性比较 模型组大鼠胃液pH值高于空白组(P<0.05)，胃康灵组、中剂量及高剂量TSAT组胃液pH值均低于模型组(P<0.05)。模型组大鼠胃黏膜组织H+-K+-ATP酶活性低于空白组(均P<0.05)；胃康灵组及各剂量TSAT组胃黏膜组织H+-K+-ATP酶活性均高于模型组(均P<0.05)。见表1。

表1 各组大鼠胃液pH值及H+-K+-ATP酶活性比较(x±s)

注：与空白对照组相比，#P<0.05；与模型组相比，*P<0.05。

3 讨 论

胃溃疡是消化系统的常见病，病因复杂多样，目前认为其发病与胃黏膜攻击因子和防御因子平衡失调密切相关。胃溃疡以上腹部疼痛或不适、腹胀、反酸、恶心、呕吐等为主要临床特征，严重者可并发胃出血、穿孔等[7]。理想胃溃疡动物模型的建立是研究该疾病的病因及病机、寻找治疗药物的重要途径。乙醇诱导的急性胃溃疡模型制备方法可靠，周期短，损伤机制明确，有利于研究药物对胃溃疡防治机制的研究[8]。本实验利用无水乙醇诱导大鼠胃溃疡模型，结果显示，肉眼观察模型组大鼠胃黏膜可见散在出血点、条索样出血带和点状溃疡面，镜下观察可见胃黏膜组织破损、不完整，伴出血和炎细胞浸润，这表明胃溃疡大鼠模型复制成功。

从中药及天然药物中寻找疗效确切、成分单一、易于观察的有效活性成分是防治胃溃疡的有效途径之一，也被众多学者所重视。胃康灵胶囊是纯中药制剂，具有镇痛、抗炎、止血作用，其能够抑制胃酸分泌，促进组织再生，加速胃黏膜修复及溃疡的早期愈合，是目前临床常用的治疗胃溃疡药物[9]。因此本实验以胃康灵胶囊为阳性对照，观察TSAT对胃溃疡的预防效果。结果显示，与模型组比较，高、中、低剂量TSAT组大鼠胃黏膜溃疡面积显著减小，出血减少，肿胀减轻，胃黏膜层较完整，提示预防应用TSAT可减轻无水乙醇诱导的胃黏膜损伤。

H+-K+-ATP酶对胃酸的分泌及胃的消化功能具有重要的生理意义。H+-K+-ATP酶定位于胃黏膜固有层壁细胞胞膜上，是第二类质子泵，可通过自身磷酸化与去磷酸化完成H+/K+电中性跨膜离子的转运，将壁细胞内的质子输送到膜外行使其泌酸功能。检测胃黏膜组织中H+-K+-ATP酶的活性可以直接反映胃酸分泌水平[10-11]。本实验结果显示，胃康灵组、中剂量及高剂量TSAT组胃液pH值均低于模型组(P<0.05)，胃康灵组及各剂量TSAT组胃黏膜组织H+-K+-ATP酶活性均高于模型组(均P<0.05)。这提示TSAT能够降低胃液pH值，从而促进壁细胞分泌HCl；且在修复受损胃黏膜促进溃疡愈合的过程中，可通过提高壁细胞膜H+-K+-ATP酶活性，恢复其泌酸功能，改善胃液pH水平。

综上所述，预防应用TSAT可减轻无水乙醇诱导的胃黏膜损伤，同时可以提高胃黏膜中壁细胞膜H+-K+-ATP酶活性，改善壁细胞分泌功能，恢复胃液pH值。