大果榉组织培养研究

张若晨，王良民

（1.山西运城农业职业技术学院，山西运城044000；2.山西农业大学林学院，山西太谷030801）

大果榉，又名小叶榉、枹榆，落叶乔木，高达20m，小枝无毛，叶卵状长圆形或卵形，果实为核果[1]。其树冠庞大，落叶量较多，具有改良土壤的效果，是很好的造林树种。树叶颜色随生长季节发生变化，一般春季刚萌芽的幼叶为紫红色，然后变成鲜绿色，再变成深绿色，到了秋季逐渐变成红色、紫色和棕色，具有很高的观赏价值[2-3]。果实很多空瘪粒，结实率不稳定，影响繁殖。

大果榉具有较高的造林价值和观赏价值，已被列为河南省重点保护植物，也是山西省的珍稀乡土树种[4]。但是其资源贫乏，天然种源少，结实率低而不稳定[5]。所以，进行大果榉人工繁殖技术研究具有重要的生产和生态意义[6-10]。

本试验利用大果榉茎段进行组织培养，找出大果榉组织培养的最佳培养基配方及培养条件，从而为建立大果榉快繁体系提供理论依据，为大果榉的繁育提供新途径。

1 材料和方法

1.1 试验材料

选取山西农业大学植物园及林学院苗圃所栽种的大果榉，植物园大果榉树龄在50 a以上，苗圃所栽种大果榉是由中条山泗交林场引种栽培。2018年5月取以上2种材料的大果榉1年生嫩枝茎段作为外植体材料。

1.2 试验方法

1.2.1 材料处理 于8：00—9：00取大果榉1年生幼嫩枝条作为外植体材料，用塑料保鲜膜保湿带回实验室，用加去污粉或洗洁精的水浸泡5 min后，用流动的自来水冲洗30 min，在超净工作台上用0.1%升汞灭菌，用无菌水冲洗3次，再用75%的酒精消毒30 s，用无菌水冲洗3次[11-17]。

1.2.2 培养方法

1.2.2.1 培养条件 pH值5.8，培养温度为（25±1）℃，光照强度为2 500 lx，光照时间为15 h/d。培养20～30 d后，测定组培苗的生长指标。

1.2.2.2 初代培养 外植体材料消毒后剪成1 cm左右带腋芽的茎段，置于无菌滤纸上吸干水分，接种于起始诱导培养基WPM上，试验设置不同质量浓度 6-BA（0.1，0.5，1.0，2.0 mg/L）和 NAA（0.1，0.5，1.0，2.0 mg/L），研究对大果榉诱导芽的影响，培养20 d后统计萌发率。

1.2.2.3 继代培养 在无菌条件下，将初代培养中诱导出的芽苗切成带芽的1.0 cm左右的茎段，接种到增殖培养基WPM上培养，试验设置不同质量浓度的 6-BA（0.5，1.0 mg/L）与 NAA（0.1，0.5，1.0 mg/L）组合，研究对大果榉增殖的影响，20 d后观察芽苗的生长情况，计算增殖率。

1.2.2.4 生根培养 在无菌条件下，将增殖产生的2～5 cm的丛生芽分切成单株，转入生根培养基诱导生根，观察记录生根时间及生长情况，30 d后统计生根数，计算生根率。生根培养基以MS，1/2 MS，WPM为基本培养基，附加不同质量浓度的IBA（0.05，0.1，0.5，1.0 mg/L）和 6-BA（0.02 mg/L）。

2 结果与分析

2.1 不同激素配比对茎段初代培养的影响

表1 不同质量浓度6-BA，NAA对茎段不定芽诱导率的影响

由表1可知，不同质量浓度6-BA处理下不定芽诱导率差异显著，在0.1～1.0 mg/L内诱导率呈现升高趋势。在0.1 mg/L6-BA中加入不同质量浓度NAA处理下的不定芽诱导率差异不显著，茎段腋芽处有明显膨大现象（图1），但是很少成功萌发，并且外植体未见有伸长迹象，茎段有一层黄色愈伤；6-BA为0.5，1.0 mg/L时，诱导率在不同质量浓度的NAA下差异显著；0.5 mg/L 6-BA＋0.5～1.0 mg/L NAA时，所接茎段有明显伸长现象，腋芽膨大明显，一部分所包裹鳞片成功萌发，但是生长状况不佳，苗较细弱，并且叶片小而卷曲；在1.0 mg/L6-BA＋0.1～0.5 mg/LNAA时，腋芽萌发率较高，有效芽较多，并且生长状况良好，叶片伸展且颜色较绿（图2）；在6-BA达到2.0 mg/L时，NAA为0.1，0.5 mg/L时的诱导率差异显著，诱导率普遍较低，只见腋芽处膨大，很少有萌芽成功，外植体基部膨大，并且变脆，在切割时易碎。

2.2 不同激素配比对再生嫩茎增殖的影响

将消毒后的茎段接种到含不同激素的培养基上，生长20 d后，统计不定芽数目及增殖率（表2）。

由表2可知，当6-BA质量浓度一定时，随NAA质量浓度升高，增值率出现先升高后降低的趋势；在NAA0.5mg/L下增殖率最大；6-BA为0.5mg/L时，NAA 0.1 mg/L与1.0 mg/L浓度下大果榉增殖率差异不显著；6-BA为1.0 mg/L，NAA在不同质量浓度下的增殖率差异显著。而在相同质量浓度NAA下，大果榉嫩茎增殖率在6-BA 1.0 mg/L质量浓度时较0.5 mg/L质量浓度下高，且在NAA为0.5 mg/L与1.0 mg/L时，6-BA1.0 mg/L与0.5 mg/L的分析结果差异性显著。由此可见，大果榉嫩茎增殖的最佳培养基为WPM＋1.0 mg/L6-BA＋0.5 mg/LNAA。

表2 不同激素配比对茎段增殖的影响

2.3 不同激素配比对不定芽生根培养的影响

由表3可知，MS，1/2 MS基本培养基无法使不定芽生根，在添加一定量植物生长调节剂后，虽有生根迹象，但生根状况较差，不定芽在不含任何激素的WPM培养基上有部分苗能生出根，因此，选WPM作为基本培养基较好。

表3 不同培养基及激素对不定芽生根的影响

在相同激素配比下，WPM中的试管苗长势好于1/2 MS培养基，在IBA 0.1 mg/L时，生根率最高，但是生根慢，根较细弱，试管苗生长较慢；在加入6-BA后，试管苗生根要明显早于只含有IBA的试管苗，在0.02 mg/L 6-BA＋0.05 mg/L IBA时诱导率为58.25%，虽不及IBA0.1 mg/L时的生根率高，但是生根早，生根系数最大，且根系较发达（图3），苗生长健壮（图4）；但是在生长素浓度较高时（0.5 mg/L），愈伤组织生长过快，在长出根后，愈伤组织仍有明显增长，但是根生长较慢，致使有生长慢的根又被愈伤包被，影响试管苗的生长。因此，WPM＋0.02 mg/L 6-BA＋0.05 mg/L IBA为大果榉茎段生根培养的最适培养基。

3 结论与讨论

本试验对大果榉的再生体系进行了初步的研究，结果表明，茎段不定芽在0.1～1.0 mg/L 6-BA下诱导率呈现升高趋势，在6-BA达到2.0mg/L时，诱导率普遍较低，且基部膨大，变脆，在切割时易碎，不利于繁殖。茎段诱导不定芽在1.0 mg/L 6-BA＋0.1～0.5 mg/LNAA生长良好，腋芽萌发率较高，有效芽较多，并且生长状况良好，叶片伸展且颜色较绿。大果榉茎段增殖的最佳培养基为WPM＋6-BA1.0 mg/L＋NAA0.5 mg/L。

通过对MS，1/2 MS和WPM这3种培养基和添加激素进行比较得出，最佳培养基为WPM＋0.02mg/L 6-BA＋0.05 mg/LIBA，在该培养基培养下，生根早，且根系发达。