肿痛熏洗液对肛肠手术后疼痛模型大鼠血清一氧化氮、前列腺素E2及白细胞介素-10水平的影响▲

冯予希 李五生 蒋青峰 李时超

(西南医科大学附属中医医院肛肠科，四川省泸州市 646000，电子邮箱：fyx669986@126.com)

机体在不良刺激影响下，致痛物质(如缓激肽、组胺 、5-羟色胺、NO与前列腺素等)被组织释放，致敏疼痛感受器，痛觉信息传导入感觉中枢后形成疼痛意识[1]。疼痛为肛肠手术后广泛存在的并发症，可引发尿潴留、排便困难、出血、水肿等其他并发症，严重影响手术质量、创面恢复以及患者生活质量。肿痛熏洗液为我院李五生教授应用于临床多年的经验方，其主要成分有酒黄连、酒黄芩、黄柏、白头翁等，具有明显的镇痛作用，且无明显的毒副反应[2]。本研究观察肿痛熏洗液对肛肠手术后疼痛模型大鼠血清NO、前列腺素E2(prostaglandin E2，PGE2)及白细胞介素-10(interleukin-10，IL-10)水平的影响，探讨其镇痛机理。

1 材料与方法

1.1 实验动物 健康清洁级SD大鼠40只，雌雄各半，体重为(200.0±20.0)g，鼠龄6～8，购自西南医科大学动物实验动物中心[合格证号：SYXK(川)2013-17]，并饲养于该实验中心动物房。雌雄分笼饲养，饮冷开水，自由摄食，适应性喂养3 d后开始实验。

1.2 实验药物及试剂 (1)肿痛熏洗液:由西南医科大学附属中医院制剂室煎药熬制，药物组成包括酒黄连10 g、黄柏30 g、炒栀子20 g、酒黄芩15 g、白头翁15 g、秦皮10 g、草红藤30 g、紫花地丁30 g、败酱草30 g、苦参30 g、白芷12 g、生大黄20 g、当归10 g、肉桂10 g、木香10 g。(2)马应龙麝香痔疮膏(武汉马应龙药业集团股份有限公司生产，国药准字：Z42021920；批号：170438)。(3)PGE2、IL-10酶联免疫吸附测定试剂盒均购自上海桥杜生物技术有限公司(PGE2货号：RA20017；IL-10货号：RA200951)。NO检测试剂盒购自苏州宇恒生物科技有限公司(货号：RA20010)。(4)2%戊巴比妥钠由西南医科大学实验室代购。

1.3 实验器材 手术包(包括眼科手术刀、镊子、剪刀等)、千分之一电子天平(SHIMADZU AUY220)、高速离心机(上海艾研生物科技有限公司)、酶标仪(美国Bio-Rad公司)、毛细玻璃管、-80℃冰箱、数显恒温水浴锅(常州诺基仪器有限公司，型号：HHS.21-4)等。

1.4 实验方法

1.4.1 动物分组及造模：将40只大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、生理盐水组、马应龙麝香痔疮膏组及肿痛熏洗液组，每组8只(每组大鼠雌雄各半)。除正常组大鼠外，其余4组大鼠根据文献[3]进行造模。按0.25 ml/100 g腹腔注射2%戊巴比妥钠麻醉大鼠后，将其仰卧固定于实验动物台，肛周及鼠尾近端备皮，将鼠尾近端包括肛周进行消毒，待肛门松弛后，以肛缘为界，切开皮肤至直肠黏膜，切口修剪成三角形缺损，底宽约1.0 cm，高约2.0 cm，深至皮下深筋膜层。造模成功后，继续雌雄分笼饲养饮冷开水，自由摄食。

1.4.2 创面换药：造模成功后，马应龙麝香痔疮膏组给予创面均匀涂抹马应龙麝香痔疮膏(0.18 g/kg)，然后用厚度约1mm纱布覆盖并予以胶布固定，2次/d。生理盐水组、肿痛熏洗液组分别给予生理盐水(25 ml/kg)及肿痛熏洗液(25 ml/kg)熏蒸，蒸汽温度为(37.0±1.0)℃ ，将大鼠放入自制动物熏蒸装置，开启数显恒温水浴锅，待蒸汽温度达到熏蒸要求后开始熏蒸，20 min/次，2次/d。正常组与模型组不做处理。

1.4.3 标本采集与保存：于给药3 d后，末次换药后1 h采集大鼠尾静脉采血1～2 ml，静置30 min后室温下2 000 r/min离心15 min，取上清液置于于无菌管，-20℃冰箱中保存备用。

1.4.4 检测指标：按试剂盒说明检测各组大鼠血清PGE2、IL-10水平。采用双管测定，取平均值后用标准物的浓度与A值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的A值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。按检测试剂盒说明检测各组大鼠血清NO水平，通过分光光度法比色,在波长546 nm下测定吸光度,并制作标准曲线，通过曲线可求得样品中NO水平。

1.5 统计学分析 采用SPSS 17.0软件进行统计学分析。计量资料用(x±s)表示，多组间比较采用方差分析，两两比较采用SNK-q法检验。以P<0.05表示差异统计学有意义。

2 结 果

模型组、生理盐水组、马应龙麝香痔疮膏组、肿痛熏洗液组血清IL-10水平均低于正常组，血清PGE2、NO水平均高于正常组(均P<0.05)。马应龙麝香痔疮膏组、肿痛熏洗液组血清IL-10水平均高于模型组与生理盐水组，血清PGE2、NO水平均低于模型组与生理盐水组(均P<0.05)。肿痛熏洗液组血清IL-10水平高于马应龙痔疮膏组(P<0.05)，而肿痛熏洗液组与马应龙麝香痔疮膏组血清PGE2、NO水平比较，差异均无统计学意义(均P>0.05)。见表1。

表1 5组大鼠血清NO、PGE2及IL-10水平比较(x±s)

注：与正常组比较，*P<0.05；与模型组比较，#P<0.05；与生理盐水组比较，aP<0.05；与马应龙痔疮膏组比较，bP<0.05。

3 讨 论

手术创伤可刺激炎性因子产生，进而提高机体疼痛敏感性，导致肛肠疾病患者术后出现急慢性疼痛[4-5]。研究表明，NO与一氧化氮合成酶是影响痛觉调控的重要因素，大量的一氧化氮合酶阳性神经元存在于许多动物和人类的隔区[6]。PGE2为花生四烯酸环氧合酶的代谢产物，是细胞生长因子和调节因子，也是重要的疼痛递质之一[7]。研究表明，IL-10的镇痛作用机制可能为抑制致炎致痛的NO及PEG2的产生，阻断细胞因子的级联反应，进而保护脊髓神经元[8-9]。因此，IL-10、PGE2、NO常作为评价肛肠疾病术后炎症反应程度的指标。

中医学认为，肛门局部血瘀气滞、湿热下注为肛肠疾病术后疼痛的机理[10]。有研究表明，药物的有效成分易通过肛门局部吸收而参与血液循环，经新陈代谢加快组织修复，改善疼痛、肿胀等不良症状[11]。中药熏洗可改善局部血液循环，发挥药物清热解毒、行气活血、消肿止痛的作用。肿痛熏洗液为我院长期应用于临床且疗效显著的经验方，全方以黄连解毒汤(黄连、黄柏、黄芩、栀子)为君药，发挥清热燥湿、泻火解毒之功，现代药理研究表明，黄连解毒汤具有抗菌、抗炎、抗氧化、抗血栓等作用[12]。白头翁、紫花地丁、败酱草为臣药，配合君药以清热解毒、祛瘀止痛；同时以苦参、白芷、秦皮为臣药，清除体内之肠风，发挥祛风止痒、收敛生肌等功效，防治术后肛门的局部瘙痒感；生大黄、当归为佐助药，既逐瘀通经止痛，又可活血补血；肉桂为反佐药，通过补火助阳，反佐清热解毒类药物的寒凉之性；木香为使药，调畅人体气机，行气止痛。诸药合用，共凑清热燥湿、益气活血化瘀、消肿止痛的作用[13]。本课题组前期研究已证实肿痛熏洗液具有明确的镇痛促愈作用，且无明显的毒副反应。本研究结果显示，马应龙痔疮膏组、肿痛熏洗液组血清IL-10水平均高于模型组与生理盐水组，血清PGE2、NO水平均低于模型组与生理盐水组(均P<0.05)，肿痛熏洗液组血清IL-10水平高于马应龙痔疮膏组(P<0.05)。说明肿痛熏洗液能够通过降低肛肠术后疼痛模型大鼠血清PGE2、NO水平，提高大鼠血清IL-10水平。

综上所述，肿痛熏洗液可能上调抗炎性细胞因子IL-10水平，降低致痛物质PGE2、NO水平，从而抑制疼痛因子及炎症反应，减轻肛肠术后疼痛。