正交试验法优选偏散汤颗粒的提取工艺

2019-03-14

中国社区医师 2019年2期

256500博兴县中医医院，山东省博兴

散偏汤出自《辨证录·头痛门》，为清代医家陈士铎所创，原文描述其症状为：“人有患半边头风者，或痛在右，或痛在左，大约痛于左者为多，……其病有时重有时轻，大约遇顺境则痛轻，遇逆境则痛重，遇怫抑之事而更加之风寒之天，则大痛而不能出户。”陈士铎总结其病机为肝胆郁气不宣，又加风邪侵袭少阳经，治宜急解少阳郁气，以川芎行气活血止痛，合白芍平肝气、生肝血；郁李仁、白芷助川芎以散头风；柴胡、香附开肝胆郁气；白芥子消痰；甘草调和滞气[1，2]。组方为白芍5钱，川芎1两，郁李仁1钱，柴胡1钱，白芥子3钱，香附2钱，甘草1钱，白芷5分，水煎服。清代的衡制1两约37.3 g，1钱约3.7 g[3]，折合现代剂量，每张处方剂量约87 g。因处方剂量较大，为便于患者服用，故制成颗粒剂。

资料与方法

仪器：AE240S型电子分析天平(METTLER TOLEDO)，高效液相色谱仪(日本岛津)，LC-15C泵，SPD-15C检测器，色谱柱Kromasil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)。

对照品：芍药苷(中国食品药品检定研究院，20 mg/支，110736-201713，经面积归一化法测定，含量95.1%)。

试剂：乙腈、磷酸为色谱纯，水为重蒸去离子水，其余试剂均为分析纯。

药材：均来自本院中药房。

结果

水提正交试验设计：分别称取白芍92.5 g，川芎185 g，郁李仁18.5 g，柴胡18.5 g，白芥子55.5 g，香附37 g，甘草18.5 g和白芷9.25 g，每份计434.75 g，共9份，参考相关文献，选取加水量、提取次数和时间3个因素，药材浸泡0.5 h后按L9(34)进行正交优选试验，以提取液中芍药苷含量和出干膏得率为综合评价指标进行评价，所选因素水平见表1。

表1 因素水平

芍药苷含量测定[4]：①色谱条件：填充剂选十八烷基硅烷键合硅胶，流动相是乙腈0.1%磷酸溶液(15：85)；检测波长230 nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于2 000。②对照品溶液制备：精密称取对照品芍药苷适量，置棕色容量瓶中，加甲醇制成每1 mL含60 μg的溶液，即得。③供试品溶液制备：分别精密移取各提取液10mL，水浴蒸至2 mL并转移到25 mL量瓶中，加甲醇15 mL稀释，超声处理(功率240 W，频率45 kHz)30 min，冷却至室温，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。④阴性样品溶液制备：按散偏汤颗粒提取方法制备提取液，精密移取10 mL，处理方法同“③”，得到阴性样品溶液。⑤线性与范围：精密称取芍药苷对照品(10.16 mg)，置于50 mL量瓶中，用甲醇溶解稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液，分别精密移取上述对照品贮备液1.0 mL、3.0 mL、5.0 mL、7.0 mL和9.0 mL置于10 mL量瓶中，以甲醇稀释至刻度，摇匀，作对照品溶液，分别吸取上述溶液各20 μL，注入高效液相色谱仪，测定。以芍药苷浓度(μg/mL)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程A=20745c-23701，r=0.999 2。结果表明，在20.32～182.88 μg/mL浓度范围内，芍药苷峰面积值与浓度具有良好线性关系。⑥精密度试验：取芍药苷对照品溶液(60.96 μg/mL)20 μL，注入高效液相色谱仪，连续进样6次，计算峰面积积分值的RSD，结果峰面积RSD=0.51%，仪器精密度良好。⑦重复性试验：取同一样品6份，处理方法同“③供试品溶液制备”，分别吸取上述溶液各20 μL，注入高效液相色谱仪，每个样品分别平行测定2次，计算芍药苷含量RSD，结果含量RSD1.31%，该方法重复性良好。⑧稳定性试验：取同一样品溶液分别于0、2、4、6、8和12 h进样，计算峰面积积分值的RSD，结果RSD0.93%，供试品溶液在12 h范围内稳定。

出膏率：精密移取各提取液60 mL，分别置干燥至恒重的蒸发皿中，水浴浓缩至近干，105℃干燥3 h，精密称定，计算。

最佳工艺确定：正交试验结果见表2，方差分析结果见表3～4。①正交试验及结果，见表2。②方差分析，见表3、表4。③结果：以散偏汤颗粒提取液中芍药苷含量和出干膏率为综合评价指标，均为因素B＞A＞C，直观提取工艺为药材加10倍量水提取2次，1.5 h/次。最佳工艺为药材加8倍量水提取2次，1.5 h/次。

工艺验证：称取散偏汤颗粒处方中各药材6份，分直观提取工艺组和最佳工艺组，每份药材总量计434.75 g，分别按直观最佳工艺A3B2C2和优选工艺A2B2C2提取，以上述方法测定，见表5。

结果表明，直观工艺与优选工艺无明显差异，最终确定药材加8倍量水提取2次，1.5 h/次，该提取工艺验证3次，芍药苷含量和出膏率稳定。