不同加工方法对丹参中丹酚酸B和醇溶性浸出物的影响△

侯晓杰，张建锋，李玮*，吴珊珊

1.贵州中医药大学 药学院，贵州 贵阳 550025；2.国药集团同济堂(贵州)制药有限公司，贵州 贵阳 550009；3.国家苗药工程技术研究中心，贵州 贵阳 550025

丹参为唇形科植物丹参SalviamiltiorrhizaBge.的干燥根及根茎，春、秋二季采挖，除去泥沙，干燥。其具有活血祛瘀、通经止痛、凉血消痈、清心除烦的功能，用于胸痹心痛、癥瘕积聚、脘腹胁痛、心烦不眠、热痹疼痛、月经不调和经闭痛经等治疗[1]。传统认为丹参多以治疗心血管系统疾病为主，但现代药理学研究表明，其在抑菌、抗炎、心机保护、抗肿瘤、抗氧化和免疫调节等诸多方面，仍具有较强的药理作用[2-6]，主要包括丹参酮ⅡA、丹参素和丹酚酸等成分。

中药产地加工是中药品质形成的重要环节，同时也是影响临床用药的重要因素。丹参药材的产地加工一般采用产地采收后晒干，或将丹参晾晒至半干堆闷“发汗”后晒干[7-8]。2015版《中华人民共和国药典》收载丹参的加工方法为“除去杂质和残茎，洗净，润透，切厚片，干燥”。不同的加工炮制方法对丹参中化学成分的影响有差异，在丹参炮制品中，酒丹参中丹酚酸B含量最高，醋丹参次之，其次是生丹参，米炒丹参和炒丹参中丹酚酸B的含量很少，丹参炭中丹酚酸B的含量最低[9]。目前不同产地加工方法对丹参中丹酚酸B和醇溶性浸出物影响的报道甚少。为更好地控制和提高丹参质量，采用不同加工方法对丹参药材进行研究，对不同加工方法对丹参成分丹酚酸B和醇溶性浸出物的影响因素进行分析，优选丹参适宜的产地加工方法，为提高丹参质量和控制其品质提供参考。

1 材料

1.1 仪器

高效液相色谱仪，包括：LC-20AT二元梯度泵、SPD-20A检测器[岛津企业管理(日本)有限公司]；远红外干燥箱(YHG-600-S型，上海贺德实验设备有限公司)；十万分之一电子天平[AUW-220 D型，岛津仪器(苏州)有限公司]；千分之一电子天平(金诺JT-5003型，天津市恒奥科技发展有限公司)；超声清洗机(HS10260D，天津市恒奥科技发展有限公司)。

1.2 试药

对照品丹酚酸B(贵州迪大生物科技有限责任公司，批号：115939-25-8)；甲醇为色谱纯；水为娃哈哈纯净水；其余试剂均为分析纯。

丹参鲜药材由贵州中医药大学魏升华教授鉴定为正品，由贵阳德昌祥药业有限公司丹参药材种植基地提供。

2 方法

2.1 不同加工方法

详见表1。

表1 不同加工方法的操作步骤

2.2 丹酚酸B含量的测定及方法学考察

2.2.1 色谱条件 流动相：甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59)；流速：1.0 mL·min-1；色谱柱：WondaSil C18-WR(250 mm×4.6 mm，5 μm)；检测波长：286 nm；柱温：25 ℃。理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称定丹酚酸B对照品适量，置于10 mL棕色容量瓶，用60%甲醇溶解并稀释定容至10 mL，摇匀。即得质量浓度为0.262 5 mg·mL-1的丹酚酸B对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备 精密称定丹参粉末0.2 g，置于100 mL平底烧瓶中，精密加入60%甲醇40 mL，称定重量，在强超声频率下提取40 min，静置放冷，用60%甲醇补足减失质量，摇匀，过滤，取续滤液，即得。根据以上色谱条件得到丹酚酸B色谱图和丹参样品色谱图，见图1～2。

图1 酚酸B对照品色谱图

图2 丹参样品色谱图

2.2.4 线性关系考察 精密吸取1、6、10、18、22、25 μL对照品，分别进样测定，计算峰面积。以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得出丹酚酸B回归方程。

2.2.5 精密度试验 精密吸取供试品溶液10 μL，按照上面色谱条件连续进样6次，计算RSD值，得出仪器精密度良好。

2.2.6 重复性试验 按供试品溶液的制备方法，平行制备6份供试品溶液，计算RSD值，显示重复性良好。

2.2.7 稳定性试验 精密吸取供试品溶液10 μL，于0、2、4、8、16、24 h分别进样测定，计算RSD值，表明其在24 h内比较稳定。

2.2.8 加样回收率 精密称取6份丹参样品各约0.1 g，加入0.240 1 mg丹酚酸B对照品，按2.2.3项下方法制备供试品溶液，依法测定，计算回收率和RSD，表明该方法具有较好的准确性。

2.2.9 样品测定 对不同加工方法的样品分别精密称取约0.2 g，按2.2.3项下方法制备供试品溶液，对样品中丹酚酸B的含量测定和计算。

2.3 醇溶性浸出物含量测定

测定方法照2015版《中华人民共和国药典》四部浸出物测定法(2201)项下的热浸法测定。

3 结果与分析

3.1 方法学考察

依据线性关系考察的结果可得丹酚酸B回归方程：Y=1×106X-18 616(r=1)，结果表明，丹酚酸B在0.262 5～6.561 9 μg线性关系良好。丹酚酸B的精密度试验RSD为1.70%，表明仪器精密度良好。丹酚酸B的重复性试验RSD为1.64%，表明本法重复性良好。丹酚酸B的稳定性试验RSD为1.67%，表明供试品溶液在24 h内稳定。丹酚酸B平均加样回收率为100.52%(n=6)，RSD为1.97%，表明方法的准确度良好。

3.2 不同加工方法的丹酚酸B和醇溶性浸出物含量

应用不同加工方法对丹参的含量进行测定，结果见表2。

表2 不同加工方法的丹参中丹酚酸B和醇溶性浸出物的含量(n=34) %

由表2可知采用不同产地加工方法对丹酚酸B和醇溶性浸出物均有较大影响。丹酚酸B以丹参洗后晒干含量最高，40 ℃烘发汗后60 ℃烘干最低；在醇浸出物中，以洗后鲜切采用40 ℃烘干含量最高，以洗后采用100 ℃烘干最低。在不同加工方法中，丹参两种成分的含量阴干、晒干差异不明显，鲜切、烘干、发汗法与之比较则有明显差异，表明不同产地加工方法对丹参中丹酚酸B和醇溶性浸出物的含量影响显著。同时从表2中还可以看出干燥温度对丹酚酸B和醇溶性浸出物均有影响，温度在不同的加工方法中对有效成分也有影响。对不稳定的酚酸类成分，对其采用鲜切法，在40 ℃烘干效果优于60、80、100 ℃烘干效果，随着温度升高，丹酚酸B含量下降，除60 ℃样品洗后鲜切烘干外，其余含量相差不大，其原因有待进一步研究。烘干法中，无论是直接烘干还是洗后烘干，随着温度的升高其含量也有所下降，洗后60 ℃烘干除外。在发汗法中，晾晒发汗后烘干的药材随着温度的升高其含量有升高的趋势，以80 ℃为好，100 ℃则下降；烘后发汗的药材随温度的升高丹酚酸B含量增加，结果显示在发汗前最快速度失去部分水分是有利的，适当缩短干燥时间对保存成分是有利的。植物体内的生物酶是否影响整个过程，有待进一步探讨。对醇溶性浸出物来说采用烘干法的药材，无论是直接或洗后40 ℃烘干均好于直接或洗后60、80、100 ℃烘干，整体上随着温度的升高，醇溶性浸出物的含量明显下降；鲜切法中规律与烘干法中一致，鲜切100 ℃烘干样品除外。在发汗法中，晾晒发汗后烘干的药材随着温度的升高其含量有升高的趋势，以80 ℃为好，100 ℃则下降。整体上从实验结果来看，无论哪种发汗方法醇溶性浸出物含量差异不大，相对而言，晾晒发汗优于烘后发汗，其原因有待进一步研究。

4 结论与讨论

结果显示，对丹参采用不同产地加工方法，其丹酚酸B和醇溶性浸出物有较大影响，丹酚酸B含量以丹参洗后晒干的方法最高，其含量达到17.057 1%，醇溶性浸出物以洗后鲜切40 ℃烘干的方法处理后含量最高，其含量为25.293 0%。

丹参产地加工时有“忌水洗”的说法。丹酚酸B为水溶性成分，在烘干法中40、80 ℃烘干以及鲜切法中晒干、40 ℃烘干、60 ℃烘干的含量均比洗后高；醇溶性浸出物在晒干法、烘干法中40、80、100 ℃烘干以及鲜切法中阴干、晒干、100 ℃烘干的

含量均高于洗后的，“忌水洗”是有道理的。但丹酚酸B在烘干法中的其他温度处理以及鲜切法、阴干、晒干法处理的药材，其含量均比洗后处理的含量低；醇溶性浸出物在阴干法、烘干法中60 ℃烘干以及鲜切法中40、60、80 ℃烘干的样品中的含量均低于洗后处理的，水洗对其含量影响不显著。

发汗法是丹参药材产地加工方法之一，丹参发汗后内部颜色变为紫褐色。研究表明，发汗法中的丹酚酸B和醇溶性浸出物相对较低，两种成分的含量均低于其他方法，与文献报道“发汗法”为丹参传统的产地加工方法相悖，其产地加工方法有待进一步研究。