富马酸酮替芬缓释胶囊的制备与体外释放度评价*

黎炜烘

(广州科的信医药技术有限公司，广州 510260)

富马酸酮替芬(ketotifen fumarate)为口服强效过敏递质阻释剂，为抗变态反应类药物，临床用于变应性鼻炎和过敏性支气管哮喘的预防和治疗。富马酸酮替芬为高溶解高渗透性药物，半衰期3～5 h，口服经胃肠道可迅速完全吸收，生物利用度3%～4%，生物制剂学研究表明其适于被开发成缓释制剂[1-2]。目前，国外只有富马酸酮替芬缓释片上市，没有缓释微丸制剂上市，国内只有普通制剂批准上市，暂时没有缓释制剂上市和注册申报。开发缓释微丸制剂可以满足临床用药需求。缓释微丸为多单元型给药系统，较缓释片具有局部刺激性小、体内分布面积大、生物利用度高、受食物和胃排空影响小、不易出现突释、易分剂量等优点，临床应用优于缓释片，已逐渐成为目前缓控释制剂的研究热点之一[3]。笔者在市售缓释片的基础上，制备1天1次、24 h释放的富马酸酮替芬缓释微丸制剂，并对其体外释放度进行评价，以期为富马酸酮替芬缓释制型的进一步开发提供实验依据。

1 仪器与试药

1.1仪器 MINI250型多功能挤出滚圆包衣机(深圳市信宜特科技有限公司)；G20多功能湿法混合制粒机(深圳市信宜特科技有限公司)；ZRS-8G型智能溶出实验仪(天津海益达科技有限公司)；Waters2695高效液相色谱仪(沃特世公司)；T6紫外-可见分光光度仪(北京普析通用仪器有限责任公司)；BSA124S电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司，感量：0.01 mg)。

1.2试药 富马酸酮替芬原料药(浙江苏泊尔制药有限公司，批号：022-120604，含量：99.8%)，富马酸酮替芬对照品(中国食品药品检定研究院，批号：100230-200602，含量：100%)，Zaditen®L.P.缓释片(Novartis Pharma S.P.A，规格：2 mg，批号：004，006，015)，微晶纤维素(台湾明台化工股份有限公司，批号：C1306070)，乳糖(Meggle Group，批号：L1315)，Aquacoat ECD(乙基纤维素水分散体，FMC Corporation，批号：J8617)，EudragitNE30D(丙烯酸乙酯-甲基丙烯酸甲酯共聚物水分散体，Evonik Industries AG，批号：B140712095)；Surelease(乙基纤维素混悬液，上海卡乐康包衣技术有限公司，批号：IN526253)，乙基纤维素(上海卡乐康包衣技术有限公司，批号：KI10533T12)，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1缓释胶囊的制备 称取处方量主药和辅料，过筛孔内径150 μm(100目筛)混合均匀，加适量黏合剂溶液制成软材，挤出滚圆机制得湿微丸，置烘箱中干燥，筛取筛孔内径590～710 μm(24～30目)含药丸芯。按处方量配制缓释包衣溶液，将含药丸芯置流化床包衣机中，调节参数使丸芯处于最佳流化状态，待丸芯预热温度达物料温度高定值后，将包衣溶液用喷枪进行包衣，包衣结束后取出缓释微丸置烘箱中熟化24 h。将熟化后的缓释微丸根据含量规格(每粒2 mg)，灌装于2号空心胶囊。

2.2含量测定方法 取样品20粒，精密称定，计算平均装量，取内容物，混合均匀，精密称取适量(相当于酮替芬1 mg)，置100 mL量瓶，加水适量，振摇使富马酸酮替芬溶解，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液，照紫外-可见分光光度法(《中华人民共和国药典》2015年版四部通则 0401)，在301 nm波长处测定吸光度；另取富马酸酮替芬对照品，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每毫升约含14 μg的溶液，同法测定，计算，并将结果乘以0.7272，即得[4]。

2.3释放度测定及方法学验证

2.3.2溶出介质溶解度测定 分别用介质1、介质2、介质3和介质4配制成37 ℃富马酸酮替芬过饱和溶液，测得其溶解度分别为46.88，27.39，24.30和20.25 mg·mL-1，均能满足漏槽条件。

2.3.3检测波长的选择 分别取用上述4种介质配制的对照品溶液、自研样品溶液和市售缓释片溶液，在190～400 nm波长范围内扫描，均测得λmax为301 nm，所以选择301 nm作为检测波长。

2.3.4干扰实验 分别取用上述4种介质配制的空白辅料溶液和空心胶囊溶液，在301 nm波长处测定吸光度，结果显示均无吸收，不干扰测定。分别取对照品溶液、自研样品溶液和缓释片溶液，用孔径0.45 μm滤膜滤过5 mL后，取续滤液和原液在301 nm波长处测定吸光度，滤过前后吸光度无变化，滤膜不产生吸附干扰影响。

2.3.5线性关系考察 取对照品适量，分别用上述4种介质，配制成1.0，2.5，5，7.5，10，12.5 μg·mL-1线性实验溶液，在301 nm波长处测定吸光度。以浓度-吸光度进行线性回归，线性回归方程分别如下，介质1C=23.64A+5.82(r=0.999 3)、介质2C=24.66A+3.22(r=0.999 8)、介质3C=24.50A+1.97(r=0.999 4)、介质4C=25.75A+2.87(r=0.999 2)。

2.3.6重复性实验 取用上述4种介质配制5 μg·mL-1供试品溶液各6份，在301 nm波长处测定吸光度，计算得介质1 RSD=0.84%(n=6)、介质2 RSD=0.92%(n=6)、介质3 RSD=1.03%(n=6)、介质4 RSD=0.98%(n=6)。

2.3.7加样回收率实验 取已知含量的供试品5份，分别用上述4种介质，配制供试品溶液，精密加入1 μg·mL-1对照品贮备液1 mL，在301 nm波长处测定吸光度，计算平均回收率：介质1为99.3%(RSD=1.12%，n=5)、介质2为98.9%(RSD=0.99%，n=5)、介质3为100.5%(RSD=1.07%，n=5)、介质4为99.6%(RSD=1.18%，n=5)。

2.3.8溶液稳定性实验 取“2.3.6”项供试品溶液，置37 ℃水浴中放置36 h，分别于0，2，4，6，8，10，12，24，36 h取样，在301 nm波长处测定吸光度，计算得介质1 RSD=1.53%(n=9)、介质2 RSD=1.77%(n=9)、介质3 RSD=1.36%(n=9)、介质4 RSD=1.29%(n=9)。4种介质9个时间点的RSD均<2.0%，表明供试品在36 h内稳定。

2.3.9非模型依赖相似因子计算方法及判断 相似因子(f2)是衡量两条溶出释放曲线相似度的参数，计算公式如下。

其中n为取样时间点个数，Rt为参比样品在t时刻的溶出度值，Tt为自制样品在t时刻的溶出度值。相似因子的具体测定步骤如下：①分别取自制样品和参比样品各12片(粒)，测定其溶出曲线；②取两条曲线上各时间点的平均溶出度值，根据上述公式计算f2；③f2值越接近100，则认为两条曲线相似。一般情况下，f2值高于50，可认为两条曲线具有相似性，自制样品与参比样品具有等效性[6]。

2.4缓释微丸包衣的影响因素考察

2.4.1包衣材料及包衣增重 分别考察AquacoatECD、EudragitNE30D、 Surelease和乙基纤维素4种缓释包衣材料及包衣增重对释放性能的效果，并与Zaditen®L.P.缓释片进行比较。参照《中华人民共和国药典》2015年版富马酸酮替芬胶囊溶出度项下的小杯法，以水200 mL为介质，转速75 r·min-1，分别测定试制样品的释放曲线，结果见图1-4。结果表明，用Surelease包衣增重6%的释放曲线最接近缓释片。

图1 AquacoatECD包衣增重对释放度的影响

Fig.1EffectsofAquacoatECDcoatingweightonreleasingrate

图2 EudragitNE30D包衣增重对释放度的影响

Fig.2EffectsofEudragitNE30Dcoatingweightonreleasingrate

2.4.2致孔剂用量及包衣增重 以Surelease为包衣材料，添加3%和5%致孔剂，考察不同包衣增重对释放性能的效果，并与Zaditen®L.P.缓释片进行对比。按“2.4.1”项溶出方法分别测定试制样品释放曲线，结果见图5和图6。结果表明，加入3%致孔剂包衣增重8%的释放曲线与缓释片比较的f2值达到83，加入5%致孔剂包衣增重10%的f2值为70，筛选出最佳包衣处方为Surelease+3%致孔剂包衣增重8%。

图3 Surelease包衣增重对释放度的影响

Fig.3EffectsofSureleasecoatingweightonreleasingrate

图4 EC-10cps包衣增重对释放度的影响

Fig.4EffectsofEC-10cpscoatingweightonreleasingrate

图5Surelease+3%致孔剂包衣增重对释放度的影响

Fig.5EffectsofSurelease+3%porogencoatingweightonreleasingrate

图6Surelease+5%致孔剂包衣增重对释放度的影响

Fig.6EffectsofSurelease+5%porogencoatingweightonreleasingrate

2.5体外释放度及均一性实验 取3批Zaditen®L.P.缓释片和3批缓释胶囊中试样品，分别测定在pH值1.2盐酸、pH值4.5磷酸盐缓冲液、pH值6.8磷酸

盐缓冲液和水中的释放曲线，并将结果与市售缓释片平均释放度进行f2值拟合，计算f2值和批内批间RSD。结果，3批缓释胶囊在4种介质中的释放曲线与缓释片平均释放曲线相似因子f2值均>50，两者体外具有一致性[5-8]，缓释胶囊批内批间RSD值均小于市售缓释片。实验结果见表1～4。

3 讨论

富马酸酮替芬为非难溶性药物，制剂规格较低，较适合采用挤出滚圆法制备含药丸芯。微晶纤维素是一种成丸促进剂，具有非常好的吸水性能和成丸性能，加入一定量乳糖可以使含药丸芯表面更加完整和光滑，有利于后续包衣[9]。以一定浓度的粘合剂溶液作为润湿剂制备软材，可以提高丸芯硬度和收率，有利于包衣。Surelease是乙基纤维素水分散体，所含成分包括有乙基纤维素、中碳链甘油酯、油酸、浓氨溶液和水，固体含量为25%，使用时无需加入增塑剂，常作为片剂和小丸的疏水性缓释包衣材料，应用时可用水稀释至8%～15%进行包衣，通常加入致孔剂以调节膜的溶解性以此达到调节药物的释放[9]。

表1pH值1.2盐酸溶液释放度及均一性实验结果

剂型与批号1 h累积释放百分率RSD2 h累积释放百分率RSD3 h累积释放百分率RSD4 h累积释放百分率RSDf2值缓释片 00411.83±2.0517.3119.64±2.3712.0724.45±2.148.7532.16±1.976.1264 00613.45±0.886.5222.03±0.813.6929.30±1.083.6835.17±1.283.6491 01515.12±1.5410.1924.22±1.024.2131.06±1.635.2537.53±1.905.0673 平均13.47±1.349.9721.96±1.878.5228.27±2.809.8934.95±2.206.29缓释胶囊 KF15100115.91±0.311.9225.28±0.250.9829.43±0.391.3436.42±0.381.0380 KF15100215.38±0.301.9524.65±0.411.6829.23±0.230.7735.63±0.260.7485 KF15100316.47±0.291.7826.21±0.331.2730.41±0.250.8137.29±0.140.3876 平均15.92±0.442.7725.38±0.642.5229.69±0.511.7336.45±0.681.86

表2pH值4.5磷酸盐缓冲液释放度及均一性实验结果

剂型与批号1 h累积释放百分率RSD2 h累积释放百分率RSD3 h累积释放百分率RSD4 h累积释放百分率RSD6 h累积释放百分率RSD缓释片 00413.68±1.4410.5321.87±1.727.8428.44±2.007.0233.83±2.146.3143.24±2.816.50 00616.42±1.257.5826.40±1.947.3734.24±2.407.0140.93±2.897.0651.62±3.807.36 01517.47±1.227.0128.17±1.605.6935.83±2.326.4642.50±2.886.7853.00±3.857.26 平均15.86±1.9612.3325.48±3.2512.7532.84±3.8911.8439.09±4.6211.8249.29±5.2810.72缓释胶囊 KF15100113.08±0.302.2723.47±0.451.9231.12±0.391.2635.35±0.150.4345.03±0.982.17 KF15100213.79±0.533.8423.32±0.662.8129.79±0.501.6834.80±0.371.0544.73±0.430.95 KF15100313.25±0.302.2923.07±0.451.9430.08±0.461.5435.08±0.411.1645.29±1.022.24 平均13.37±0.302.2523.29±0.160.7130.33 ±0.571.8935.07±0.230.6445.02±0.240.51

续表2pH值4.5磷酸盐缓冲液释放度及均一性实验结果

剂型与批号8 h累积释放百分率RSD10 h累积释放百分率RSD12 h累积释放百分率RSD16 h累积释放百分率RSD24 h累积释放百分率RSDf2值缓释片 00451.45±3.246.3058.24±3.536.4064.58±3.735.4771.00±4.125.8089.03±6.437.2364 00660.62±4.617.6067.89±4.997.3674.38±5.307.1383.82±6.457.6993.38±3.253.4880 01562.17±4.547.2969.50±4.646.6775.67±4.035.3385.67±6.197.2294.17±2.642.8072 平均58.08±5.799.9865.21±6.099.3471.54±6.068.4780.16±7.999.9792.19±2.773.00缓释胶囊 KF15100155.25±0.901.6361.03±0.821.3467.00±1.291.9379.09±1.101.3992.70±0.370.4085 KF15100255.04±0.581.0660.85±1.462.3967.86±0.811.1981.17±1.642.0292.61±1.601.7384 KF15100354.93±1.091.9961.07±0.651.0767.86±1.341.9880.16±1.051.3191.81±0.660.7285 平均55.07±0.130.240.99±0.100.1667.57±0.410.6080.14±0.851.0692.37±0.400.43

表3pH值6.8磷酸盐缓冲液释放度及均一性实验结果

剂型与批号1 h累积释放百分率RSD2 h累积释放百分率RSD3 h累积释放百分率RSD4 h累积释放百分率RSD6 h累积释放百分率RSD缓释片 00413.46±1.279.4622.02±1.607.2528.76±1.635.6634.69±2.065.9443.83±2.495.68 00616.69±1.237.3427.22±1.876.8635.10±2.316.5941.78±2.816.7353.09±3.686.93 01518.17±1.337.3228.83±1.946.7336.17±2.486.8743.83±3.317.5554.67±2.945.39 平均16.11±2.4114.9426.03±3.5613.6833.34±4.0012.0140.10±4.8011.9650.53±5.8511.58缓释胶囊 KF15100114.18±0.312.1824.03±0.532.2130.68±0.431.3937.21±0.381.0350.21±1.092.17 KF15100214.24±0.483.3924.19±0.532.1731.36±0.381.2337.38±0.962.5649.11±0.460.95 KF15100314.28±0.584.0824.18±0.672.7831.78±0.762.3937.06±0.591.5849.07±0.621.26 平均14.23±0.040.2724.13±0.080.3131.27±0.451.4437.22±0.130.3549.46±0.531.07剂型与批号8 h累积释放百分率RSD10 h累积释放百分率RSD12 h累积释放百分率RSD16 h累积释放百分率RSD24 h累积释放百分率RSDf2值缓释片 00451.15±3.336.5158.84±3.425.8164.57±4.066.2973.63±4.105.5786.51±4.044.6761 00661.96±4.397.0869.06±4.857.0274.62±4.726.3382.55±5.406.5590.97±4.354.7982 01563.67±4.276.7170.67±4.896.9176.50±4.235.5384.67±4.935.8293.00±2.532.7270 平均58.93±6.7911.5266.19±6.429.7071.90±6.418.9280.28±5.867.3090.16±3.323.68缓释胶囊 KF15100158.64±0.621.0565.53±1.322.0171.91±1.431.9982.17±0.871.0592.17±0.690.7585 KF15100258.48±0.881.5065.51±0.761.1673.04±1.261.7382.54±1.191.4592.37±0.740.8084 KF15100358.51±0.811.3965.63±0.490.7573.67±0.710.9682.03±1.471.8092.17±0.900.9785 平均58.54±0.070.1265.56±0.050.0872.88±0.731.0082.25±0.210.2692.23±0.100.10

Zaditen®L.P.缓释片是采用水不溶性蜡质骨架材料制成的缓释片，规格为2 mg，属于小剂量制剂，其制备过程中物料的混合均匀度对释药行为影响比较大，且骨架片制备时局部的缺陷易引起整个片剂的突释。而缓释微丸的释药行为是由组成一个剂量的各单个微丸释药行为的总和，个别微丸在制备上的失误或缺陷不致对整个制剂的释药行为产生较大影响，因此在释药规律的重现性、一致性方面优于骨架型缓释片。富马酸酮替芬缓释胶囊是缓释微丸制剂，是在Zaditen®L.P.缓释片基础上的改良型新药，是对缓释片的剂型和处方工艺进行优化且具有明显临床优势的药品。通过CMC以及体外多种介质释放曲线的研究，在保证与缓释片体外释放曲线一致(f2>50)的前提下，缓释胶囊的批内批间RSD值小于缓释片，初步证明缓释胶囊的处方工艺比原剂型更优。临床方面的优势需要进行体内释放评价和大样本临床实验来进一步验证。

表4水释放度及均一性实验结果

剂型与批号1 h累积释放百分率RSD2 h累积释放百分率RSD3 h累积释放百分率RSD4 h累积释放百分率RSD6 h累积释放百分率RSD缓释片 00411.00±1.109.9620.17±1.336.5927.33±1.635.9732.83±2.146.5143.00±2.375.50 00613.22±1.3510.2420.85±1.406.7329.73±1.735.8334.10±2.035.9543.48±2.646.07 01514.67±1.379.3222.67±1.215.3431.67±1.976.2135.67±2.075.7945.50±2.435.34 平均12.96±1.8514.2521.23±1.296.0929.58±2.177.3434.20±1.424.1543.99±1.333.02缓释胶囊 KF15100111.47±0.292.5620.55±0.552.6628.21±0.341.2032.56±0.461.4142.29±0.370.87 KF15100212.15±0.362.9621.12±0.401.9028.45±0.582.0532.11±0.451.4142.43±0.461.10 KF15100311.58±0.443.7620.13±0.582.8927.96±0.622.2231.85±0.431.3542.21±0.852.01 平均11.73±0.302.5620.60±0.411.9928.20±0.200.7232.18±0.290.9142.31±0.090.21批号8 h累积释放百分率RSD10 h累积释放百分率RSD12 h累积释放百分率RSD16 h累积释放百分率RSD24 h累积释放百分率RSDf2值缓释片 00450.17±2.324.6259.17±3.666.1866.50±1.221.8474.17±2.403.2487.50±4.094.6783 00653.96±3.837.0962.79±2.564.0868.38±3.765.5075.64±5.677.4987.74±5.255.9892 01555.83±3.927.0264.67±2.163.3470.33±3.444.9078.17±5.156.5989.50±4.515.0381 平均53.32±2.895.4262.21±2.804.4968.40±1.922.8075.99±2.022.6688.25±1.091.24缓释胶囊 KF15100152.00±1.001.9360.68±0.701.1566.25±0.931.4074.88±0.781.0490.79±0.630.6986 KF15100251.31±1.102.1560.15±1.151.9265.99±0.981.4875.25±0.440.5892.09±1.271.3883 KF15100351.25±0.741.4460.21±0.430.7166.40±0.570.8574.93±0.590.7691.04±0.360.6584 平均51.52±0.340.6660.34±0.240.4066.21±0.170.2675.02±0.160.2291.31±0.560.62