止吐六味散质量标准*

陈香梅，鲍布日额，苏日娜，新红

(内蒙古民族大学蒙医药学院，通辽 028000)

止吐六味散是蒙医临床常用药之一，由甘草、小茴香、蔓荆子、粳米(微炒)、芫荽子和柿子或酸梨干等量配制，共研末制成散剂。本方出自《诊治明医典》，具有止吐功效，用于呕吐、妊娠呕吐等[1-2]。笔者检索发现，该药的相关研究甚少。除制剂方法、性能、主治外，其他研究近乎空白。该方的质量评价研究至今笔者尚未见报道[3-8]。因此，笔者在本实验对止吐六味散进行质量研究，以期为制定该方质量标准提供参考。

1 仪器与试药

1.1仪器 Nikon E200电子显微镜和DS-U3拍照装置(北京恒三江仪器销售有限公司)，T-1700M马弗炉(郑州天纵电气设备有限公司)，DHG-9023A型电热恒温箱(宁波江南仪器厂)，ULMATE3000高效液相色谱仪(Thermo Fisher科技公司)，AUY-120电子天平(max 210 g，感量：0.01 mg，日本岛津公司)，KQ-100E超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2试药 止吐六味散(锡盟蒙医研究所提供，批准文号：内药制字M13040163，批号：20160616，20160809，20150417，20160325，20150313，20160719，20160703，20161004)，阴性对照药(内蒙古民族大学蒙医药学院制剂实验室制)，乙腈(色谱级，天津市科密欧化学试剂有限公司，批号：20141106，含量≥99.9%)；甲醇(色谱级，天津市科密欧化学试剂有限公司，批号：20170606，含量≥99.9%)；芳樟醇对照品(北京索莱宝科技有限公司，批号：20161031，含量≥98%)，甘草苷对照品(北京索莱宝科技有限公司，批号：20161031，含量≥98%)，甘草酸单铵盐对照品(北京索莱宝科技有限公司，批号：20160824，含量>98%)，茴香醛对照品(上海源叶生物科技有限公司，批号：Y14M7C11129，含量≥98%)，酸梨干对照药材(内蒙古自治区食品药品监督管理局提供，批号：20160717，山梨醇含量：23.874 mg·g-1)。

2 方法与结果

2.1粉末的鉴定 取止吐六味散适量(批号：20160616)，水合氯醛、稀甘油制片进行显微观察，生物光学显微镜下观察显微特征，鉴别结果见图1。

2.1.1晶鞘纤维 晶鞘纤维是甘草区别于其他五味药的粉末特征，多形成束，直径8～20 μm。

2.1.2复粒淀粉 淀粉粒是止吐六味散中最多见的显微特征，而复粒淀粉则是粳米区别于其他五味药的粉末特征。多由2～8个分粒组成，2个或多个脐点，呈多面体形，层纹及脐点不明显。

2.1.3非腺毛 非腺毛为蔓荆子在止吐六味散中区别于其他组分的粉末显微特征，顶端细，基部较粗，长14～68 μm，多弯曲，有疣状突起。

2.1.4石细胞 酸梨干中石细胞较多，有单一散着或多数堆在一起，次生壁很厚，直径约40 μm，细胞壁上有纹孔道。

2.1.5网纹细胞 小茴香中有网纹细胞呈卵圆形网状壁孔，直径4～10 μm，长7～20 μm。

2.2成分测定

2.2.1水分测定 依照《中华人民共和国药典》(2015年版)附录ⅨH水分测定法(烘干法)测定止吐六味散中水分含量[9]。其测定结果见表1，其中M1为恒重后称量瓶质量；M2为试样加称量瓶质量；M3为烘干后试样加称量瓶质量。平均水分含量7.37%，RSD=5.96%。

2.2.2灰分测定 依照《中华人民共和国药典》(2015年版)附录ⅨK总灰分测定法和酸不容性灰分测定法对止吐六味散的灰分含量及酸不溶性灰分含量进行测定。测定结果见表2，其中M1为恒重后的坩埚质量；M2为试样加坩埚的质量；M3为烘干后的试样加坩埚的质量；M4为残渣及坩埚质量。平均灰分含量4.27%，RSD=0.043%；平均酸不溶性灰分含量1.4%，RSD=3.78%。

2.2.3浸出物含量测定 依照《中华人民共和国药典》(2015年版)附录ⅩA浸出物测定法中水溶性浸出物测定法测定止吐六味散水溶性浸出物含量。结果见表3，其中M1为恒重后浸出物加表面皿恒重质量；M2为浸出物加表面皿蒸干后恒重质量。平均浸出物含量21.84%，RSD=1.75%。

2.3薄层鉴别

2.3.1止吐六味散中芫荽子的TLC鉴别 取止吐六味散4.0 g，加入乙醚12 mL冷浸4 h，滤过，滤液挥干，残渣加三氯甲烷1 mL溶解，作为供试品溶液，同法制备芫荽子单味药及阴性对照；吸取供试品各2 μL，芳樟醇对照品2 μL，分别点于本实验室自制硅胶G板上，以正己烷-乙酸乙酯(8：2)为展开系统，5%磷钼酸无水乙醇溶液显色，105 ℃烘至斑点显色清晰[10]。结果见图2。

2.3.2止吐六味散中小茴香的TLC鉴别 按照《中华人民共和国药典》(2015年版一部)“小茴香”条薄层鉴别方法，取止吐六味散3.0 g，加入乙醚30 mL，超声处理10 min，滤过，取滤液挥干，残渣加三氯甲烷1 mL溶解，作为供试品溶液，同法制备小茴香单味药及阴性对照；茴香醛对照品制备成每毫升含1 μL溶液。吸取供试品各10 μL，茴香醛对照品溶液1 μL分别点在本实验室自制硅胶G板上，以石油醚-乙酸乙酯(8：2)为展开系统，用二硝基苯肼显色[9]。结果见图2。

A.晶鞘纤维；B.复粒淀粉；C.非腺毛；D.石细胞；E.网纹细胞

Tab.1MoisturedeterminationofZhituliuweisan

g

表2止吐六味散灰分测定

Tab.2AshdeterminationofZhituliuweisan

g

2.3.3止吐六味散中甘草的TLC鉴别 取止吐六味散2.0 g，加入乙醚50 mL，加热回流1 h，滤过，残渣加入甲醇30 mL继续加热回流1 h，滤过，滤液挥干，残渣加水40 mL使溶解，用正丁醇提取3次，合并正丁醇液，用水洗涤 3次，蒸干，残渣加甲醇5 mL使溶解，作为供试品溶液。取甘草酸单铵盐对照品，加甲醇制成每毫升含2 mg的溶液，作为对照品溶液。同法制备甘草单味药及阴性对照；吸取供试品各2 μL，分别点于GF254板上，以乙酸乙酯-甲酸-乙酸-水(8：1：1：1)为展开系统，105 ℃加热至斑点显色清晰[11-13]。结果见图2。

表3止吐六味散浸出物测定

Tab.3DeterminationofwaterextractiveinZhituliuweisan

g

2.3.4止吐六味散中酸梨干的TLC鉴别 取止吐六味散3.0 g，加入石油醚30 mL，超声处理15 min，滤过，滤液挥干，残渣加三氯甲烷1 mL溶解，作为供试品溶液，同法制备酸梨干对照药材，单味药及阴性对照；吸取供试品各5 μL，分别点在本实验室自制硅胶G板上，以正己烷-乙酸乙酯(8：2)为展开系统，5%磷钼酸无水乙醇溶液显色，105 ℃烘至斑点显色清晰[14]。结果见图2。

2.4止吐六味散中甘草苷和甘草酸含量测定

2.4.1色谱条件 色谱柱Syncronis C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，柱温：38 ℃，流动相：乙腈-0.05%磷酸，流速：1 mL·min-1，波长：263 nm[15-16]。

1.对照品或对照药材；2.止吐六味散；3.单味药；4.相应阴性对照

Fig.2TLCofFuructusCoriandri(A),FuructusFoeniculi(B),RadixGlycyrrhizae(C),PyrusussuriensisMaxin.(D)inZhituliuweisan

2.4.2对照品溶液的制备 精密称取甘草苷对照品适量，加70%乙醇制成每毫升含甘草苷30 μg的溶液。以此为母液，分别配制成6.0，12.0，18.0，24.0，30.0 μg·mL-1的对照品溶液。精密称取甘草酸铵对照品适量，加70%乙醇制成每毫升含甘草酸39 μg溶液，以此为母液分别配制成7.8，156，23.4，31.2，39.0 μg·mL-1对照品溶液。

2.4.3供试品溶液的制备 称取止吐六味散约1.2 g，加70%乙醇100 mL，称定质量，超声处理(250 W，40 Hz)30 min，放冷，再称定质量，用70%乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液即得。

2.4.4线性关系考察 精密吸取上述各浓度甘草苷对照品溶液10 μL注入液相色谱仪，各3次，得相对峰面积。以甘草苷对照品浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。回归方程为Y=22.622X-0.0691，r=0.9999。甘草苷在0.06～3.00 μg之间呈良好的线性关系。

精密吸取上述各浓度甘草酸对照品溶液10 μL注入液相色谱仪，各3次，得相对峰面积。以甘草酸对照品浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。回归方程为Y=14.06X-0.0026，r=0.9999。甘草酸在0.0784～0.3920 μg呈良好的线性关系。

2.4.5精密度实验 精密称取止吐六味散(批号：20160616)，按“2.4.3”项方法制备，精密吸取10 μL，连续进样6次。甘草苷、甘草酸相对峰面积的RSD为0.57%，0.71%。结果表明该仪器精密度良好。

2.4.6稳定性实验 精密称取止吐六味散(批号：20160616)，按“2.4.3”项方法制备，精密吸取10 μL，分别在0，2，4，6，8，10，12 h注入液相色谱仪。甘草苷、甘草酸相对峰面积RSD为0.46%，0.02%。结果表明止吐六味散供试液在12 h内稳定。

2.4.7重复性实验 精密称取同一批号止吐六味散(批号：20160616)6份，按“2.4.3”项方法制备，精密吸取10 μL注入液相色谱仪，每一份各3次进样。甘草苷、甘草酸相对相对峰面积RSD为0.53%，0.03%。结果表明该方法重复性良好。

2.4.8回收率实验 精密称取同一批止吐六味散(批号：20160616)各9份，每份约1.2 g，分别以1：0.8，1：1，1：1.2含量加入甘草苷对照品和甘草酸对照品，按“2.4.3”项方法制备，精密吸取10 μL注入液相色谱仪，得甘草苷、甘草酸相对峰面积，RSD分别为0.33%～1.82%，0.78%～1.33%。平均回收率分别为99.06%～101.90%，99.66%～100.83%。结果见表4。

表4止吐六味散加样回收率实验结果

Tab.4ResultsofrecoverytestonZhituliuweisan

成分称样量/g原有量加入量测得量mg回收率平均回收率RSD%甘草苷1.202 41.136 20.908 92.034 698.841.214 11.147 30.913 82.051 198.9199.060.231.201 21.135 10.910 82.040 799.431.201 31.135 21.113 62.239 899.191.201 91.135 71.145 22.250 297.3298.150.971.202 41.136 21.127 62.240 597.931.210 31.143 71.380 12.524 0100.011.201 71.135 61.378 22.540 9101.96101.901.821.200 51.134 51.218 72.398 5103.71甘草酸1.203 12.929 52.340 05.268 799.971.202 52.928 12.297 65.280 2102.37100.831.331.200 32.922 72.343 65.269 5100.141.201 72.926 12.930 75.856 699.991.200 52.923 22.987 65.901 899.70100.290.781.200 12.922 22.919 85.876 5101.181.211 72.950 43.530 56.490 2100.261.203 12.929 53.515 56.397 798.6599.660.891.200 22.922 53.555 16.480 6100.08

2.4.9样品测定 精密称取止吐六味散8批，按“2.4.3”项方法制备，精密吸取10 μL注入液相色谱仪，测得甘草苷、甘草酸相对峰面积，计算甘草苷、甘草酸含量。结果见表5。

表58批止吐六味散中甘草苷与甘草酸含量测定结果

Tab.5ContentdeterminationonLiquiritinandGlycyrrhizicacidineightbatchesofZhituliuweisanmg·g-1

编号批号提供方甘草苷甘草酸Z120160616内蒙古锡盟蒙医研究所0.9452.435Z220160809内蒙古锡盟蒙医研究所0.8052.439Z320150417内蒙古国际蒙医医院0.9112.417Z420160325内蒙古国际蒙医医院1.3652.165Z520150313内蒙古民族大学附属医院0.9941.874Z620160719内蒙古民族大学附属医院0.6062.155Z720160703内蒙古锡盟正蓝旗蒙医医院0.5762.582Z820161004内蒙古锡盟正蓝旗蒙医医院0.5522.289

3 讨论

止吐六味散配伍组分中除芫荽子外，均有区别于其他五味单药的粉末显微特征。显微鉴别中专属性特征是其关键因素，有些单味药的特征缺乏专属性，这对于有相同显微特征的成药的检查带来不便，如止吐六味散中芫荽子的显微特征糊粉粒和簇晶在小茴香中均存在，木化细胞也存在于甘草中，其粉末特征专属性较缺乏，造成交叉干扰。为避免检查出错，该药定性鉴别需以薄层色谱法佐证。

从芫荽子的TLC鉴别结果可看出，止吐六味散和芫荽子与芳樟醇对照品在相应位置上显相同暗绿色斑点，斑点清晰，Rf值约0.51，分离明显，阴性则无干扰；止吐六味散和小茴香与茴香醛对照品在相应位置显相同橙色斑点，斑点清晰，Rf约0.62，分离明显，阴性无干扰；止吐六味散和甘草单味药与甘草酸对照品在相应位置显黄棕色斑点，Rf值约0.42，阴性无干扰；止吐六味散和酸梨干与酸梨干对照药材在相应位置有相同暗绿色斑点，分离清晰，Rf值约0.64，阴性无干扰。以上方法专属性强，重现性好，可作为鉴别止吐六味散中芫荽子、小茴香、甘草和酸梨干的薄层鉴别方法。

贾善学等[17]报道，同一品种，不同厂家不同批号的中成药总灰分含量有一定差异，但差异不大，伪品灰分含量极其高。华佗再造丸正品总灰分3.9%，伪品灰分含量78.4%。为保证药品质量制定灰分标准非常必要。中成药中水分、浸出物等均有必要制定限定标准。实验中，由内蒙古锡盟蒙医研究所提供的止吐六味散，测得水分含量6.89%～7.75%；灰分含量4.06%～4.40%，酸不溶性灰分含量1.24%～1.44%，水溶性浸出物含量21.17%～22.63%。

甘草为该方君药，因而选择甘草酸和甘草苷作为止吐六味散的定量控制指标，按照《中华人民共和国药典》(2015年版一部)甘草的含量测定方法，测定8批止吐六味散样品甘草苷、甘草酸含量。甘草苷含量0.552～1.365 mg·g-1；甘草酸含量1.874～2.582 mg·g-1，其中内蒙古锡盟正蓝旗蒙医医院提供的样品中甘草苷的含量较其他少，而甘草酸含量与其他提供样品相似。

目前国家药品监督管理局公布的第2批 《国家非处方药药品目录》 中收载了蒙药止吐六味散[18]，本研究为止吐六味散的质量标准制定提供参考依据。