血清mir-200a对卵巢上皮癌的诊断价值

黄鹏翀

卵巢上皮癌(epithelial ovarian cancer，EOQ)又称为上皮性卵巢癌，数据显示，全球每年新确诊为上皮性卵巢癌的妇女约为225万，每年全球死于卵巢上皮癌的患者约为14万，临床针对该病的主要治疗手段为外科减瘤手术联合卡铂放化疗，但患者5年生存率仍低于30%[1]。而EOQ发病早期并无特殊症状，难以诊断，且发展迅速，严重危害女性生命健康，临床资料显示，若在EOQ早期确诊并给予有效治疗，5年生存率约为90%[2]。微小RNAs(microR-NAs，miRNAs)作为临床目前研究最热门的肿瘤检测因子群，由其最原始存在形式(pre-miRNA)经过一次加工成为长度为70～100个碱基的miRNAs前体而被命名，越来越多的研究表明，miRNA在人体基础细胞发生变化，如脂肪代谢、细胞分化、细胞凋亡等过程中起着重要作用[3]。本研究通过检测不同患者血清mir-200a水平的变化，分析血清mir-200a对卵巢上皮癌的诊断价值。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取2013年1月至2016年12月我院收治疑似卵巢上皮癌患者156例，入选标准：①年龄介于18～65岁间女性；②入院时均经二维超声、三维超声等影像学检测为疑似病例需进行下一步确诊；③排除妊娠期或哺乳期妇女；④均签署知情同意书。根据组织活检及细胞病理学诊断分为卵巢良性病变组(n=109)与卵巢上皮癌组(n=47)。卵巢良性病变组患者年龄37～61岁，平均年龄(50.21±12.60)岁；黏液性囊腺瘤59例，浆液性囊腺瘤50例。卵巢上皮癌组患者年龄26～63岁，平均年龄(49.65±17.29)岁；按FIGO分类标准和WHO分级标准：Ⅰ期5例，Ⅱ期18例，Ⅲ期14例，Ⅳ期10例，其中25例患者发现淋巴结转移。另取同时期来我院行健康体检妇女(n=100)作为对照组，健康妇女年龄28～60岁，平均年龄(51.26±18.56)岁。上述受试者入院时采血后均采用实时PCR检测血清中mir-200a的表达量。

1.2 方法

所有受试者均在入院时抽取晨起空腹静脉血5 ml，标本采集后送检验科高速离心(3 000 r/min)后取上清液后放置于-80 ℃环境中保存。采用实时荧光定量PCR法测定所有样本中血清mir-200a水平：吸取1 μl反转录酶、5 μl RNA与3 μl引物(miRNAs特异茎环引物和TaqMan miRNAs反转录试剂盒由美国Applied Biosystems公司提供)，将上述反应体系放置在16 ℃ 30 min、42 ℃ 30 min、85 ℃ 5 min环境下进行反转录，之后吸取2 μl反转录产物与10 μl TaqMan引物进行混合，上述定量反应均放置于GeneAmp PCR 9700 Thermocycler中进行PCR扩增[4]，后记录mir-200a相对水平。针对卵巢上皮癌组患者进行生存分析，分析指标包括年龄、临床分期、淋巴结转移、病理类型等。

1.3 统计学方法

采用SPSS18.0进行统计学分析，其中计量资料以均数±标准差的形式表示并采用两独立样本均数t检验进行组间比较，并采用受试者操作特性曲线(ROC)分析血清mir-200a对卵巢上皮癌诊断的价值，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3组受试者血清mir-200a比较

卵巢上皮癌组患者血清mir-200a相对表达量为(4.32±0.86)，卵巢良性病变组为(1.24±0.63)，对照组为(1.10±0.57)，卵巢上皮癌组患者血清mir-200a水平明显高于对照组与卵巢良性病变组的(t=27.60,25.50，P<0.05)，对照组与卵巢良性病变组的血清mir-200a水平比较，差异无统计学意义(t=1.68，P>0.05)。

2.2 mir-200a与卵巢上皮癌临床病理特征的关系

血清mir-200a与临床分期有关(P<0.05)，与年龄、病理类型、淋巴结转移无明显相关性，见表1。

表1 卵巢上皮癌患者血清 mir-200a表达量与不同临床病理特征的关系

2.3 血清mir-200a对卵巢上皮癌的诊断价值分析

ROC曲线显示，血清mir-200a诊断卵巢上皮癌的临界值为3.81，敏感度与特异度分别为82.98%、81.65%。如图1所示。

图1 血清mir-200a对卵巢上皮癌的诊断价值分析的ROC曲线

3 讨论

卵巢癌是妇科三大恶性肿瘤中病死率最高危害最大的妇科常见肿瘤，而上皮性卵巢癌是卵巢癌患者最为常见的组织学类型，根据不同卵巢上皮癌的组织学可再细化为浆液性卵巢上皮癌、黏液性卵巢上皮癌、透明细胞瘤、子宫内膜样癌、未分化癌及Brenner癌[5]。但卵巢上皮癌的发病机制仍不完全清晰，故临床上仍然没有针对性的药物，主要治疗手段仍以外科减瘤手术联合卡铂放化疗为主。调查显示，70%卵巢上皮癌患者确诊时已为癌症晚期，治疗后5年生存率25%～30%，而若能在卵巢上皮癌发生早期即及时确诊并给予相应治疗，患者5年生存率可高达90%[6]。miRNA是动物体内长度为19～25个核苷酸的非编码小分子，随着miRNA的研究热度上升，大量文献证明miRNA可通过基因层面影响各类细胞行为，并在基因学水平体现出细胞癌化现象的发生，并与肿瘤的发生、分化等过程密切相关[7]。本研究所选用的mir-200a是mir-200家族中的一员，Iorio MV等发现上皮性卵巢癌患者体内卵巢组织的mir-200家族表达水平明显高于卵巢良性肿瘤患者[8]，但目前针对mir-200a与卵巢上皮癌的相关性研究尚未引入临床应用中。现笔者通过检测不同患者血清mir-200a水平的变化，分析血清mir-200a对卵巢上皮癌的诊断价值，以期寻找一种更为灵敏的诊断手段。

本研究发现卵巢上皮癌组患者血清mir-200a明显高于对照组与卵巢良性病变组的，说明卵巢上皮癌患者血清mir-200a是明显有别于健康正常女性与卵巢良性病变患者。研究发现，卵巢上皮癌患者卵巢组织中mir-200家族主要以mir-200a、mir-200b和mir-200c为主[9]，其中mir-200a水平显著高于其余两者[10]。本研究通过生存分析发现，血清mir-200a与临床分期有关，说明肿瘤癌化程度越后期，血清mir-200a水平越高，肿瘤恶性程度越高。除此之外，国内外对mir-200a的研究发现，mir-200a可作为调节因子影响上皮细胞-间充质转化(EMT)过程，并通过不可逆性导致E-cadherin丢失，进而影响细胞间紧密连接程度，影响肿瘤细胞迁移[11]。ROC曲线显示，血清mir-200a诊断卵巢上皮癌的临界值为3.81，敏感度与特异度为82.98%、81.65%，对诊断卵巢上皮癌具有较高的敏感度与特异度。国外Taylor等发现采用Real-time PCR检测卵巢癌患者外周血清与卵巢癌细胞中mir-200a水平无差异[12]，且血液中mir-200a在经历多次循环冻结后更可稳定存在，稳定性明显高于现有的CEA、CA135等肿瘤标志物，检测结果稳定准确。

综上所述，血清mir-200a对卵巢上皮癌具有一定的诊断价值，可作为诊断卵巢上皮癌的辅助指标之一。