不同斑点果型青翘的质量研究

赵艳 雷振宏 王栋 王玉龙 郭岩军 李军

【摘   要】 为给连翘种质资源评价及其有效成分的开发利用提供参考依据。对3种不同果实表面斑点占比果型连翘植株（共40株）果实形态参数，青翘内连翘苷、连翘酯苷A检测和分析。测定结果表明，斑点占比居中的有效成分含量高于其他两类。育种可以优先考虑斑点居中种源。

【关键词】 青翘;斑点;连翘苷;连翘酯苷

Study on the quality of different spots Green Fructus forsythiae

Zhao Yan   Lei Zhenhong   Wang Dong   Wang Yulong   Guo Yanjun   Li Jun

（Shanxi Zhendong Daodi Druges Development Co.，Ltd.   047100 ）

[Abstract] To provide reference for the germplasm resources evaluation of forsythia forsythia and the development and utilization of its effective components.The fruit morphology parameters of three different fruit types of forsythia plants （A total of 40） were tested and analyzed，Detection and analysis of forsythin and Forsythiasid A.The results showed that the content of effective components in the speckle fraction was higher than the other two types.The spot centered provenance can be given priority in breeding.

[Keywords] Green Fructus forsythiae; spots; forsythin; Forsythiasid A

連翘来源于木犀科植物连翘Forsythia suspense （Thunb.）Vahl的干燥果实，常用大宗药材，有“疮家圣药”之称的美誉，最 早记载于《神农本草经》，列为下品。连翘味苦，性微寒。具有清热解毒，消肿散结，疏散风热之功效[1]。主治温热、疮疡、瘰疬、丹毒、斑疹、流感等。连翘还有抗菌、强心、利尿、镇吐等药理作用，有抗微生物、抗肝损伤、抗炎、保护心血管系统等作用，临床上常用连翘治疗急性风热感冒、痈肿疮毒、淋巴结结核、尿路感染等证。

晋东南地区地形与气候均交独特，是中药材连翘的重要产区之一，但存在的品种资源却是十分混杂。其中有大、中、小果型之分，也存在长叶、边缘有齿、边缘光滑等叶型，外观斑点有无、多少也有差异。根据植物体内活性成分的积累受遗传因素及环境的双重影响，形态变异滞后于生理生化变异的一般规律，可以推测，连翘植株变异在次生代谢产物上有所反应映[2]。为给连翘种质资源评价及其有效成分的开发利用提供依据，测定了该地区同一栽培群体下果实斑点不同连翘植株的形态参数，并对其果实中的连翘苷、连翘酯苷A的含量及相关性进行了初步分析，现将研究结果分析报道如下。

1  材料与方法

1.1  仪器与试剂

Aglient1260高效液相色谱仪（四元泵、紫外检测器、在线脱气机、柱温箱）;BSA124S电子天平（赛多利斯科学仪器）;KQ-500DB型数控超声波清洗机（昆山市超声仪器有限公司）;HY-3A多功能调速振荡器（江苏金坛市金城国胜实验仪器厂）;FW80高速万能粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）。

试验用水为双蒸水，乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯;连翘苷对照品（批号：含量为96.8%），连翘酯苷A对照品（批号：含量为92.9%），供含量测定用，均购自中国药品生物品检定所。

1.2  材料

材料来源于山西振东集团绿化园区定植的40株连翘植株，连翘植株经山西省长治学院植物学金山教授、铁军教授鉴定为木犀科连翘Forsythia suspense （Thunb.）Vahl。采摘时间为2018年8月25日，每株随机采果100个，将果实混匀按斑点面积比例不同分成三个组：Y≥60%、60%>Y>30%、Y≦30%，Y=斑点面积：果实表面积×100%。分别水煮8min，85℃烘箱干燥，待检[3]。

1.3  方法

1.3.1条件   色谱柱为Luna5uC18（2）100A（250mm×4.6mm，5μm），连翘苷测定流动相为乙腈-水（25：75，V：V），检测波长为277nm，柱温为室温，流速为1.0mL/min;连翘酯苷A测定流动相为乙腈-0.4%冰醋酸溶液（15：85，V：V），检测波长为330nm，柱温为室温，流速为1.0mL/min。HY-3A多功能调速振荡器，频率为125Hz。

1.3.2  对照品溶液的制备    精密称取连翘苷对照品11.47mg，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得;精密称取连翘酯苷A对照14.97mg，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（临用配置）。

1.3.3  供试品溶液的制备    连翘苷供试品溶液制备：取供试样品粉末（过三号筛）约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇15mL，称定重量，浸渍过夜，超声处理（功率250W，频率40kHz）25min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5mL，蒸至近干，加中性氧化铝0.5g拌匀，转移至中性氧化铝柱（100-120目，1g，内径为1.0-1.5cm）上，用70%乙醇80mL洗脱，搜集洗脱液，浓缩至干，残渣用50%甲醇溶解 ，转移至5mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

连翘酯苷A供试品溶液制备：取供试样品粉末（过三号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇15mL，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz）30min，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得[1]。

1.3.4  线性关系考察    分别精密量取浓度为1.11030mg/mL的连翘苷、1.39071mg/mL的连翘酯苷A对照品溶液3、5、8、10、12、15μL进样分析，测定峰面积，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，得连翘苷回归方程为（y=2219.4x+591.86，R2=0.9997），表明连翘苷进样量在3.33-13.32μg具有良好的线性关系;连翘酯苷A回归方程为（y=1771x+599.59，R2=0.9997），进样量在4.17-6.69μg具有良好的线性关系。

1.3.5  精密度试验    精密吸取对照品溶液10μL，重复进样5次，连翘苷峰面积的RSD为0.8%，连翘酯苷A峰面积的RSD为0.1%，表明该方法的精密度良好。

1.3.6  重复性试验    取供试品（同一批号），按供试品溶液的制备方法制备6份供试液，分别进样10μL，连翘苷峰面积的RSD为1.6%，连翘酯苷A峰面积的RSD为0.3%。

1.3.7  稳定性试验    精密吸取同一种供试品溶液在0、4、6、8、10、12h内重复进样6次，每次10μL，计算连翘苷峰面积的RSD为1.5%，连翘酯苷A峰面积的RSD为0.2%，表明供试品溶液在12h内稳定。

2  結果与分析

2.1  果实性状测定

根据分组，测定不同组的果实纵径、横径、百果均重、折干率（100%×干果重/鲜果重）等，评价不同斑点果实的性状，每项5次重复，去除最高、最低值，取均值。结果见表1。

三种斑点果实的连翘在该地区均有分布，Y≦30%较少，其余两种分布较为普遍。从表1可以得出，三种斑点类型横纵径和百果重差距不大，折干率Y≥60%较小，60%>Y>30%次之，Y≦30%最大。

2.2  有效成分含量测定

根据2015版《中国药典》通则2201项下方法测定，结果见表2：

从表2可以得出，三种果型的连翘苷、连翘酯苷A含量均高于药典标准，60%>Y>30%的连翘苷、连翘酯苷A的含量均高于其他两种类型。

三类型的有效成分含量较以往均较低，分析其原因，2018年4月5日，一场大雪突袭，气温急降，随后的冰冻，导致正在开花的连翘受到了严重的冻害，花瓣枯萎或者直接掉落，晋东南主产区青翘的产量急剧下降，好多植株颗粒无收，只有背风坡地或沟底有零星果实，质量较以往差距很大，试验还需后期继续跟进。

3  讨论

连翘以果实入药，青翘以其清热解毒功效，成为78个中成药的原料药，需求量很大，具有很好的药用价值和经济价值[1]。表面斑点是连翘的固有性状，能够反映连翘的内在质量[5]。连翘果实表面斑点的成因还未有明确报道，多在外因方面有些猜测，比如海拔、坡面、气候等外因[2]。本研究得出青翘斑点多和少对应的连翘苷、连翘酯苷A含量有相关性，表面斑点过多、多少，含量检测结果都不高，具体的量化关系还需扩大样本数量，进一步深入研究。本研究旨在针对连翘的良种繁育，选出优良品种，增加主产区的竞争优势。

参考文献：

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典.一部[M].北京：中     国医药科技出版社，2015：170.

[2] 王海莉.不同环境条件对连翘生长发育过程的影响[J].中医      学报，2014，29（11）：1630-1631+1634.

[3] 赵艳，等.青翘炮制工艺研究及其标准化操作规程（SOP）的      制定[J].园艺与种苗，2016，（1）：3-5+29.

[4] 夏伟，等.连翘不同果形质量评价[J].中国实验方剂学杂志，     2018，23（6）：60-64.

[5] 刘辰，等.连翘表面斑点生长规律及影响因子的影响[J].山      东化工，2018，47（10）：95-97.