散发性乳腺癌与BRCA2基因rs206115位点多态性的相关分析

马金柱，赵铁映，刘明，张瑞，布日古德

（内蒙古医科大学附属医院普通外科，呼和浩特 010050）

研究［1］显示，乳腺癌发病率居女性恶性肿瘤发病首位，遗传、免疫及环境等因素共同作用导致乳腺癌发生。在与遗传相关的乳腺癌中发现乳腺癌易感基因1 （breast cancer susceptibility gene 1，BRCA1）和乳腺癌易感基因2 （breast cancer susceptibility gene 2，BRCA2） 突变广泛存在［2］。HEDAU等［3］研究发现，3期以上乳腺癌患者中BRCA1表达下降，但在BRCA1低表达或无表达乳腺癌患者中BRCA2高表达。目前，BRCA2对散发性乳腺癌的作用及其相关性仍不清楚。本研究选择BRCA2基因rs206115位点，探讨内蒙古地区蒙古族和汉族乳腺癌患者基因型分布差异，为乳腺癌的早期筛查及预防提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 临床资料及分组

收集2015年12月至2016年12月就诊于内蒙古医科大学附属医院乳腺外科并经病理确诊的原发性散发性乳腺癌患者101例 （病例组，蒙古族39例、汉族62例） ，良性乳腺疾病患者101例 （对照组，蒙古族39例、汉族62例） 。所有患者均知情同意。病例组年龄22～80岁，平均年龄 （45.53±13.70） 岁，对照组年龄19～74岁，平均年龄 （46.08±14.29） 岁，2组年龄差异无统计学意义 （t = -0.276，P = 0.782） 。抽取患者空腹外周静脉血 （2 mL） ，采血管使用乙二胺四乙酸 （ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA） 抗凝真空采血管，颠倒混匀并编号后-80 ℃冰冻保存备用。筛选标准： （1） 病例组，①患者原籍属于内蒙古地区，长期居住工作在此地区 （祖上三代内居住于内蒙古地区） ，无亲缘关系、无其他民族通婚史及一级亲属无乳腺癌家族病史的蒙古族及汉族女性患者；②经手术及病理确诊的原发性乳腺癌患者 （排除原位癌、双侧乳腺癌和合并其他恶性肿瘤） ；③抽血前均未经任何抗肿瘤治疗 （放疗+化疗） ；④无职业致癌物接触史。 （2） 对照组，①患者原籍属于内蒙古地区，长期居住工作在此地区 （祖上三代内居住于内蒙古地区） ，无亲缘关系、无其他民族通婚史蒙古族及汉族女性患者；②均通过体检或病理组织学等手段确诊，未检出患有肿瘤相关疾病；③无职业致癌物接触史。

1.2 实验方法

使用血液基因组DNA提取试剂盒 （SK8224） 进行基因组DNA提取。提取的 DNA -20 ℃保存。BRCA2基因位点扩增引物委托上海生工有限公司合成。rs206115位点的特异性扩增引物：F，5'-GGCTGAAT AGGGTTTGTTGTAAG-3' ； R，5'-CCAAAGCAGAATG CCTAACTC-3'；扩增片段长度330 bp。反应液混匀后在PCR仪上扩增，预变性95 ℃ 3 min，变性94 ℃ 30 s，退火55～60 ℃ 35 s，延伸72 ℃ 40～50 s，修复延伸72 ℃ 5～8 min，循环35次，最后鉴定PCR产物及产物测序。

1.3 统计学分析

采用Excel2003建立数据库。BRCA2基因rs206115位点各基因型分布频率进行Hardy-Weinberg平衡检验。采用SPSS17.0软件对实验数据及临床病理特征［包括年龄、病理类型、淋巴结转移、雌激素受体（estrogen receptor，ER） 、孕激素受体 （progesterone receptor，PR） 、人表皮生长因子受体2 （human epidermal growth factor receptor-2，Her-2） 及临床分期］进行统计。计数资料组间比较采用χ2检验，不满足χ2检验条件的采用秩和检验；计量资料用s表示，组间比较采用 t 检验，P ＜ 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2组一般资料比较

结果显示，病例组蒙古族和汉族样本在年龄分层、病理类型、淋巴结转移、ER、PR、Her-2及临床分期的分布差异无统计学意义（均P ＞ 0.05），见表1。对照组在年龄分层中 （＜35岁，蒙古族7例，汉族21例；35～＜60岁，蒙古族22例，汉族27例；≥60岁，蒙古族10例；汉族14例） 差异无统计学意义 （χ2=3.100，P =0.212） 。

2.2 各组BRCA2基因rs206115位点比较

结果显示，BRCA2基因rs206115位点可检测出3 种基因型：AA、 AG、 GG型，见图1。BRCA2基因rs206115位点基因多态性2组比较差异无统计学意义 （χ2=3.490，P = 0.175） 。 BRCA2基因rs206115位点各基因型分布频率符合Hardy-Weinberg平衡检验（P = 0.173） ，具有群体代表性。见表2。

病例组A等位基因频率为74.75%，G等位基因频率为25.25%；对照组A等位基因频率为65.35%，G等位基因频率为34.65%。与对照组比较，病例组BRCA2基因rs206115位点等位基因A分布频率显著增高 （χ2=4.259，P = 0.039） 。见表3。

3 讨论

乳腺癌是由基因因素 （基因的遗传多态性、基因突变等） 和非基因因素 （民族差异、生活习惯、致癌物接触等） 共同作用引起，2种因素都参与了乳腺癌的发生发展［4］。BRCA2基因是肿瘤抑制基因，位于人类染色体13q12.3，含有27个外显子，共编码3 418个氨基酸，BRCA2中已发现超过1 800种突变，BRCA2基因改变与乳腺癌的发生密切相关［5］。CAROLINE等［6］学者在研究BRCA1、BRCA2与乳腺癌关系时发现没有任何单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms，SNP） 和乳腺癌显著关联；JANE等［7］发现BRCA1突变携带者中BRCA2 rs206115位点降低双侧乳腺癌患病风险，而在非BRCA1突变携带者中rs206115位点与双侧乳腺癌患病风险之间未表现出明显的关系，这提示BRCA2基因影响乳腺癌的发生发展及预后可能是多个基因共同合作的结果；刘璐等［8］研究发现rs206115基因型与患者复发率表现出明显相关；笔者以往研究［9］也发现BRCA2蛋白异常表达在散发性乳腺癌发生、发展过程中起着一定作用。因此本研究选择BRCA2基因rs206115位点进行研究。

表1 病例组一般情况比较Tab.1 Comparison of general characteristics in the case group

图1 BRCA2 rs206115 AA、AG、GG基因型Fig.1 Genotypes of BRCA2 gene rs206115 loci

表2 各组BRCA2基因 rs206115位点基因型比较［n （%） ］Tab.2 Genotypes of BRCA2 gene rs206115 loci compared in each group ［n （%） ］

表3 病例组与对照组BRCA2 rs206115位点等位基因频率比较Tab.3 Allele frequency of BRCA2 gene rs206115 loci in case and control groups

目前已发现有超过200种BRCA1和BRCA2基因变异，有的变异直接致病，有的变异是非致病的，这些变异是导致乳腺癌多样性的原因之一［10］。SHIMELIS等［10］研究发现 BRCA2基因变异 （c.7522G＞A、p.Gly2508Ser） 增加了亚洲女性患乳腺癌的风险，而BRCA2基 因 中c.4258G＞T、p.Asp1420Tyr、c.8149G＞T与白种人乳腺癌呈负相关。王雯等［11］在对维吾尔族和汉族散发性乳腺癌患者BRCA1/2突变情况研究时发现BRCA1基因突变检出率高于BRCA2基因，这可能与新疆地区散发性乳腺癌发生相关。研究［12］发现良性乳腺病变中可能已存在一定的BRCA2突变累积，这增加了散发性乳腺癌的患病风险。不同地区、不同种族民族之间基因突变位点、突变频率、蛋白表达不尽相同，本结果显示在散发性乳腺癌中，与对照组比较，病例组rs206115位点等位基因A分布频率显著增高 （χ2=4.259，P = 0.039） ，rs206115的A基因可能是蒙汉族散发性乳腺癌的易感基因之一。A基因可能影响相关基因表达及蛋白质功能，增加了患乳腺癌的风险，本结果有民族特异性，是多种因素 （生活方式、激素水平及其他遗传因素等） 参与的结果。研究证明［13］SNP导致等位基因差异性表达，能部分解释表型不同与乳腺癌、胃癌等癌症的发生相关，这种差异性表达可能影响、调节细胞周期和细胞功能，引起细胞凋亡、泛素化，从而导致细胞丧失肿瘤抑制功能。本研究表明rs206115位点A等位基因的差异性表达与散发性乳腺癌具有相关性，但其具体细胞分子机制仍待进一步探究。目前，研究［14］已表明携带BRCA1或BRCA2基因突变的女性有患乳腺癌的高风险，因此在今后的临床工作中应尽早识别BRCA2基因rs206115位点的A等位基因，并与其他变异基因联合分析，使之成为乳腺癌风险评估的有效手段。

综上所述，BRCA2基因rs206115的A基因可能是蒙汉族散发性乳腺癌的易感基因之一。本研究样本量较少，在民族大融合的背景下，蒙古族生活习惯及饮食等方面都趋于汉化，蒙汉之间的差异减小，另外多种基因位点共同参与乳腺癌的发生发展。因此今后需扩大样本，同时增加对乳腺病变不同时期基因和病理组织的研究，以期进一步肯定BRCA2基因rs206115位点与散发性乳腺癌的相关性，同时找出更多散发性乳腺癌相关性位点，为乳腺癌的基因检测奠定基础。