细胞学胸腹水腺癌与间皮细胞的鉴别诊断

赵 乐

南阳市中心医院 (河南 南阳 473000)

胸腹水是临床疾病常见的体征，其形成原因较为复杂。常规细胞学检查时依据肿瘤细胞形态学特征进行判断。[1]由于肿瘤细胞在积液中没有组织及器官构架的约束而呈自由漂浮和增生状态，甚至经历数代繁殖失去了原来组织特征，同时受到刺激脱落的反应性间皮细胞也有恶性细胞的一些特征，细胞病理诊断医师很难对腺癌细胞和增生间皮细胞鉴别。[13]常规细胞学检查的敏感度不理想，将胸腹水内细胞进行薄层液基制片行免疫组织化学染色方法进行鉴别诊断很有临床应用价值[16]。我们用免疫细胞化学检测CR、HMBE-1、WT1、CDX2、E-cadherin、GLUT1，在胸腹水中腺癌细胞及增生间皮细胞的表达情况，探讨该组合在腺癌及增生间皮细胞鉴别诊断中的价值。

1 材料与方法

1.1研究对象 选取南阳市中心医院病理科2015年-2017年胸腹水标本100例。其中腺癌72例(肺癌34例、乳腺癌12例、胃癌18例、卵巢癌8例)，反应性增生间皮细胞28例(炎性病变22例、结核6例)。本研究是按照南阳市中心医院伦理委员会规定进行的，并获得所有患者的知情同意。

1.2液基细胞制片 取新鲜胸腹水标本200 ml，2 000 r/min离心，弃上清液，加入MonoGene细胞清洗液250 ml，500 r/min振荡5 min,2000 r/min离心5 min，弃上清液，沉渣倒入有细胞保存液的标本瓶中，静置15 min，使用迈威制片机制片7张，95%乙醇固定，1张用于HE染色用于常规细胞学检查，另6张用于细胞免疫化学染色，先存于-20℃冰箱备用。

1.3试剂及染色方法 所用CR、HMBE-1、WT1、CDX2、E-cadherin、GLUT1单克隆抗体及试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术公司。采用链霉菌抗生物素过氧化酶(SP)法，磷酸缓冲液代替一抗作为空白对照，DAB显色，苏木精复染，脱水透明后封片。

1.4结果判定 CR表达间皮部位为胞质和胞核。HMBE-1表达部位是胞膜周边，WT1表达部位为胞核，CDX2表达为胞核，E-cadherin表达为胞膜，GLUT1表达部位为胞质和胞膜。

1.5统计学分析 采用χ2检验，以P<0.05有统计学意义。

2 结果

2.1CR、HMBE-1及WT1在胸腹水中的表达 神经特异性钙结合蛋白(calretinin,CR)在间皮细胞中表达，胞核与胞质均着色，呈棕黄色颗粒状外观，[6]28例良性胸腹水见CR呈阴性表达(25/28，93%)，在腺癌中无表达。间皮抗原(HMBE-1)在间皮细胞中表达胞膜周边呈毛刺状改变，呈棕黄色颗粒。在增生间皮细胞中表达(24/28，85%)，72例腺癌胸腹水中仅有2例表达阳性(2/72,2%)，Wilms抑癌基因1(WT1)在间皮细胞中表达胞核着色，呈棕黄色颗粒外观，在增生间皮细胞中表达(23/28，82%)在腺癌中无表达。

2.2CDX2、E-Cadherin及GULT11在胸腹水中的表达 尾型同源框基因2(CDX2)在腺癌细胞中表达胞核着色，呈棕黄色颗粒外观，在腺癌细胞中表达(49/72,68%)在增生间皮细胞中无表达。上皮型钙粘附蛋白(E-cadherin)在腺癌细胞表达部位胞膜着色，呈棕黄色颗粒，在腺癌细胞中表达(63/72,88%)，在增生间皮细胞中无表达，葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)在腺癌细胞中表达明显，胞膜或胞质着色，呈棕黄色颗粒外观，在腺癌细胞中表达(65/72,90%)，在增生间皮细胞只有3例表达阳性(3/72,4%)

3 讨论

常规细胞学检查通常对间皮细胞与腺癌细胞不难鉴别，但增生间皮细胞呈团排列、双核、多核、核增大、核浆比增大等表现与高分化腺癌细胞难以鉴别，[8]对诊断造成困扰，需免疫组织化学染色进一步检查才能明确。[9]在日常诊断工作中，只根据一种抗体染色阳性而确定某种肿瘤经常导致错误，采用几种抗体进行标记是非常重要的。最好选用液基细胞制片来进行免疫细胞化学实验。液基制片的优点表现为制成的薄片背景清晰，[15]无背景干扰，便于结果的判断，且同一标本可制作多张涂片，便于抗体组合应用[14]。

本研究采用CR、HMBE-1、WT1、CDX2、E-cadherin、GLUT1六种抗体组合应用于胸腹水中腺癌细胞及增生间皮细胞的诊断与鉴别诊断。CR是一种钙结合蛋白，在间皮细胞中表达与胞核和胞质，敏感性93%，特异性96.9%，是日常较常用的间皮标志物。HMBE-1是间皮细胞的分子标记，该抗体与间皮细胞表面的抗原反应,[12]表达为胞膜着色，敏感性85%，特异性95.8%。WT1是与肾母细胞瘤发生、发展有关的基因，在上皮型间皮瘤中也有表达，在增生间皮细胞中表达胞核着色，敏感性82%，特异性100%。CDX2是一个在胃肠道发育中参与早期分化再生的转录因子,[3]在腺癌细胞中表达胞核着色，敏感性68%，特异性100%。E-cadherin是一种依赖性的跨膜蛋白，对上皮细胞间相互粘附和维持组织结构稳定有重要作用，[4]在腺癌细胞中表达胞膜着色，敏感性88%，特异性93.3%。GLUT1是一种调节跨膜糖转运的糖蛋白，其表达与细胞代谢及增殖水平量正相关,[3]在腺癌细胞中表达胞膜或胞质着色，敏感性90%，特异性95.9%。选择一组至少两种以上相互支持的抗体，同时再选反面否定的抗体，同时获得双重互补，正反两方面的证实。[2]CR、HMBE-1、WT1中一种或几种抗体在胸腹水中的异型增生细胞中表达阳性，而CDX2、E-cadherin、GLUT1表达阴性，即可表明是增生间皮细胞。反之，CDX2、E-cadherin、GLUT1中的一种或几种抗体表达阳性，而CR、HMBE-1、WT1表达阴性，则表明是腺癌细胞。

我们通过研究发现采用CR、HMBE-1、WT1、CDX2、E-cadherin、GLUT1六种抗体组合应用对细胞学胸腹水中腺癌细胞与增生间皮细胞鉴别诊断具有较大的帮助作用。各抗体在腺癌细胞与增生间皮中表达差异均有统计学意义。[17]各种抗体敏感性和特异性均有不同程度的局限性，而联合检测可双重互补，提高诊断的准确性，具有重要的临床价值。