VEGF及基质金属蛋白酶与卵巢癌临床分期的相关性分析

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(华中科技大学同济医学院附属协和医院妇产科，湖北 武汉 430000)

卵巢癌是临床上最常见的妇科恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率有逐年升高的趋势，已成为威胁女性健康和生存的重要杀手[1]。卵巢癌早期患者通常可进行手术治疗，但中晚期患者或发生转移的患者通常无特效的治疗手段，患者预后较差[2-3]。因此，分析卵巢癌患者临床分期及是否发生淋巴转移的相关生物分子对临床诊断和治疗具有重要的参考价值。血管内皮生长因子及其受体是特异性的促血管内皮生长因子，调控了细胞的增殖、分化和迁移等过程[4]；基质金属蛋白酶及其抑制剂参与了恶性肿瘤的发生、发展等过程，且与肿瘤细胞的增殖和凋亡及转移过程密切相关[5-6]。本文分析血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)及基质金属蛋白酶与卵巢癌临床分期及淋巴转移的相关性，报道如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象

以本院2006年1月至2009年4月期间诊治的卵巢癌患者为研究对象。根据国际抗癌联盟UICC(2002年)的分期及诊断标准，140例卵巢癌患者Ⅰ期40例，Ⅱ期30例，Ⅲ期30例，Ⅳ期40例；发生淋巴转移患者70例，未发生淋巴转移患者70例。所有患者均经过病理学诊断确认。卵巢癌患者年龄56～72岁，平均(64.6±10.3)岁。所有患者均知情并签署知情同意书，并经过医院伦理委员会批准。

1.2 分析指标及方法

140例不同临床分期卵巢癌患者(卵巢癌组，n=140)血清中VEGF及基质金属蛋白酶水平的变化，并分析发生淋巴转移(发生淋巴转移组)及未发生淋巴转移(未发生淋巴转移组)患者血清中上述因子水平的变化。VEGF及血管内皮生长因子受体( VEGFR，vascular endothelial growth factor receptor) 检测试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司，基质金属蛋白酶2( metalloproteinase2，MMP-2)检测试剂盒购自R&D公司，MMP-9(metalloproteinase9，MMP-9)检测试剂盒购自Santa Cruz公司，基质金属蛋白酶抑制剂1( the inhibitor of metalloproteinase 1，TIMP-1)检测试剂盒购自R&D公司。检测采用酶联免疫吸附测定法进行，所有操作均按照试剂盒说明书进行。

酶联免疫吸附测定法步骤：用移液器加入标准品和样品20 μL到各自微孔中，每个标准品和样品做两孔平行，再按每孔80 μL加入单抗工作液，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置20 ℃恒温箱中反应30 min;小心揭开盖板膜，在洗板机上用洗涤液洗板，8孔8道，每孔250 μL，2点吸液，洗板5次，最后在吸水纸上将残余液滴拍干；每孔加入酶标二抗100 μL，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板置20 ℃恒温箱中反应25 min，取出重复上述洗板步骤;显色:每孔加入底物A液50 μL，再加B液50 μL，振荡混匀，用盖板膜盖板后，置20 ℃恒温箱中20 min;测定:每孔加入终止液50 μL，振荡混匀，用双波长450 nm/630 nm检测，测定每孔OD值。按上述程序重复操作2次，将加入100 μL酶标二抗后的孵育时间分别改为30 min和35 min。

1.3 统计分析

数据统计采用SPSS20.0统计软件完成，计量资料用均数±标准差表示，两组比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析，总体比较有差异再采用LSD-t检验进行两两比较，相关性分析采用Spearman进行。P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1 不同临床分期卵巢癌患者血清中VEGF及基质金属蛋白酶水平变化

与对照组相比，卵巢癌组患者血清中VEGF、VEGFR、MMP-2、MMP-9及TIMP-1水平均明显升高(P<0.05)，且随着临床分期的增加，上述因子水平明显升高(P<0.05)，见表1。

2.2 发生淋巴转移卵巢癌患者血清中VEGF及基质金属蛋白酶水平变化

与未发生淋巴转移组患者相比，发生淋巴转移组患者的VEGF、VEGFR、MMP-2、MMP-9及TIMP-1水平均明显升高(P<0.05)，见表2。

2.3 VEGF及基质金属蛋白酶与临床分期的相关性分析

VEGF及基质金属蛋白酶与临床分期密切相关：VEGF、VEGFR、MMP-2、MMP-9及TIMP-1水平与患者临床分期呈明显的正相关(相关系数分别为0.446、0.309、0.354、0.411和0.432)，见表3。

表1 不同临床分期卵巢癌患者血清中VEGF及基质金属蛋白酶水平变化 (pg/mL)

表2 发生淋巴转移卵巢癌患者血清中VEGF及基质金属蛋白酶水平变化 (pg/mL)

表3 VEGF及基质金属蛋白酶与临床分期的相关性分析

3 讨 论

卵巢癌给患者和家庭带来沉重的负担。中晚期卵巢癌患者治疗效果差，患者的预后不尽如人意。因此，分析卵巢癌临床分期及是否发生淋巴转移相关的生物大分子对临床诊断和治疗具有重要的参考价值。血管内皮生长因子及其受体参与调控了多种恶性肿瘤的病理及生理学过程，且可作为药物治疗的潜在靶点[7-8]。在分析VEGF在子宫内膜样腺癌中的表达及其临床意义时也证实VEGF表达在子宫内膜样腺癌组织中增高，可能促进子宫内膜样腺癌的发生发展及转移浸润[9]。以往的研究也证实乳腺癌组织中VEGF均呈阳性表达，且与乳腺癌组织的发生、浸润、转移密切相关[10]，VEGF水平异常与多发性骨髓瘤患者疾病进展及预后相关[11]。本文卵巢癌组患者血清中VEGF、VEGFR水平均明显升高，且发生淋巴转移组患者的VEGF、VEGFR水平均明显升高，提示VEGF与卵巢癌患者临床分期及淋巴转移密切相关。基质金属蛋白酶及其抑制剂在多种恶性肿瘤中表现异常，且已有的证据显示其可能与恶性肿瘤的发生及发展过程密切相关[12-13]。沈树娜等[14]也指出腹水中MMP-2和MMP-9水平可能成为鉴别卵巢良恶性病变的标记物，且与卵巢恶性肿瘤患者预后有关。基质金属蛋白酶及其抑制蛋白共同参与了细胞外基质的重构过程，而肿瘤细胞快速增殖的过程中伴随有基质的降解和重构以适应细胞的快速增殖，同时肿瘤细胞的转移也需要基质降解后肿瘤细胞在新的位点进行基质重构进而增殖形成新的病灶。这与本文中卵巢癌组发生转移患者血清中MMP-2、MMP-9及TIMP-1水平升高的结论一致。