两种配型标准在壮族肾移植患者配型中的应用效果对比

黄 冰 罗 欢 颜世能 高小坚 梁舒静 蒙 瑶

(广西中医药大学附属瑞康医院检验科，南宁市 530011，电子邮箱：rkhuangbing@163.com.cn)

肾移植是目前临床上治疗终末期肾衰竭的重要方法，而人类白细胞抗原(human leukocyte antigen，HLA)组织配型为肾移植选择最佳供者提供了重要依据。有研究表明HLA组织配型对移植肾的长期存活起着重要作用，良好的配型可使肾移植患者的10年成活率提高20%，20年成活率提高25%以上[1-3]。1990年美国器官分配联合网制定了应用于肾移植的HLA六抗原无错配(zero HLA-A，B，DR，antigen mismatch，0Ag MM)标准[4]，按0Ag MM标准选择移植供受者的肾脏移植可获得理想的肾存活率。1996年Terasaki提出了新的配型策略——HLA氨基酸残基配型(amino acid residue matching，Res M)，又称交叉反应组配型，该配型策略可以提高组织配型的配合率，使其能够满足更广泛的临床需要[5-6]。1998年我国谭建明等[7]在Terasaki教授指导下建立了中国汉族人群Ⅰ类、Ⅱ类Res M配型标准。本文回顾性分析了225例壮族肾移植术后患者的组织配型资料，旨在比较两种配型标准在壮族肾移植患者中的应用效果。

1 资料与方法

1.1 临床资料 纳入2005年12月至2017年12月在我院接受肾移植术的225例患者。纳入标准：受者均为初次肾移植；群体反应性抗体阴性；研究对象及其父辈、祖父辈三代双亲均为壮族；随访资料和HLA配型资料均完整；移植供与受者的ABO血型相符，淋巴细胞毒试验均<5%。排除标准：二次以上肾移植者；群体反应性抗体阳性者；三代内有民族通婚史者；伴有严重的心肝肺器质性病变者。225例患者中男167例，女58例，年龄16～71岁，平均38岁；原发病：慢性肾小球肾炎132例，IgA肾病34例，糖尿病肾病19例，高血压肾病22例，其他肾病18例。

1.2 HLA抗原分型方法 HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原分型采用聚合酶链式反应-序列特异性引物(polymerase chain reaction-sequence specific primer，PCR-SSP)技术进行测定。采集受检者静脉血2 ml并以乙二胺四乙酸抗凝，取200 μl全血用QIAampDNA Blood Mini Kit(德国QIAGEN公司，生产批号：20120909-222512、20130706-222419、20141024-222523)提取基因组DNA，DNA纯度(A260/A280)值为1.7～2.0。采用HLA-A/B/DR PCR-SSP基因分型试剂盒(美国Invitrogen公司，生产批号：Unitray Lot#003、004、005)进行HLA基因分型。操作步骤如下：取270 μl无菌蒸馏水和7.5 μl Taq DNA聚合酶(5 U/μl)加入含580 μl PCR缓冲液的DMix管中，震荡混匀；取上述混合液8 μl加入分型板的阴性对照孔，加80 μl全血标本至剩余缓冲液管中，震荡混匀；除阴性孔外，分型板其余每孔分别加入上述混合液8 μl，用密封条密封试剂板后置于PCR 扩增仪上进行扩增，循环程序：96℃ 60 s，1个循环；96℃ 25 s，70℃ 50 s，72℃ 45 s，5个循环；96℃ 25 s，65℃ 50 s，72℃ 45 s，21个循环；96℃ 25 s，55℃ 60 s，72℃ 120 s，4个循环；扩增完毕后放4℃冰箱保存。采用1×TAE液配制含0.5 μg/ml溴乙啶的2%琼脂糖凝胶，取扩增PCR产物10 μl在15 V/cm下稳压电泳20 min，紫外灯下观察结果；应用 SSP 软件分析基因型别。

1.3 配型结果判断标准 (1)按照0Ag MM配型标准[4]评定：以HLA-A、B、DR此3个位点6个抗原分析计算错配(mismatch，MM)情况，其中6个抗原全错配为6 MM，5个抗原错配为5 MM，以下依此类推。分为0～2个抗原错配(0～2 MM)、3～4个抗原错配(3～4 MM)、5～6个抗原错配(5～6 MM)3个组。(2)参照谭建明等[7]提出的中国汉族人HLA-Ⅰ、Ⅱ类的ResM标准评定：分为0～2个残基错配(0～2 MM)和3～4个残基错配(3～4 MM)两个组，配型标准见表1～2。

表1 HLA-Ⅰ类抗原Res M标准

表2 HLA-Ⅱ类抗原Res M标准

1.4 手术及术后处理 患者按常规方法进行肾移植手术，术后均给予抗排斥反应等常规治疗。

1.5 观察指标

1.5.1 统计两种评定标准下的错配情况。

1.5.2 急性排斥反应发生率以及移植肾功能恢复情况：统计两种评定标准下肾移植术后患者的急性排斥反应发生率以及移植肾功能恢复情况。(1)急性排斥反应[8]：肾移植术后患者出现移植肾区胀痛、少尿或无尿，B超检查显示移植肾略增大，肾皮质血流减少，动脉血流指数增高；同时伴有血肌酐升高、补体水平下降、血小板减少。(2)移植肾功能评价[9]：① 移植肾功能立即恢复：肾移植术后第5天血肌酐值≤265.2 μmol/L(3 mg/dl)；② 移植肾功能缓慢恢复：肾移植术后第5天血肌酐值>265.2 μmol/L(3 mg/dl)，但不需要血液透析；③ 移植肾功能延迟恢复(delayed graft function，DGF)：肾移植术后第1周血肌酐值未下降至400 μmol/L者。

1.6 统计学分析 采用SPSS 19.0软件进行统计学分析。计数资料以例数(百分比)表示，组间比较采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两种评定标准下的HLA配型结果 按0Ag MM标准配型，达到0～2 MM 54例(24.0%)、3～4 MM 165例(73.3%)，5～6 MM 6例(2.7%)；按Res M标准，达到0～2 MM 81例(36.0%)、3～4 MM 144例(64.0%)。两种标准的错配情况比较，差异有统计学意义(χ2=12.827，P=0.002)，其中0Ag MM标准配型的3～4 MM比例高于Res M标准，而0～2 MM比例低于Res M标准。

2.2 术后急性排斥反应发生情况 225例肾移植患者中，术后出现急性排斥反应68例，其中66例经免疫抑制治疗后恢复正常，2例无法恢复行移植肾切除。0Ag MM标准与Res M标准的0～2 MM组、3～4 MM组术后急性排斥反应发生率比较，差异均无统计学意义(均P>0.05)。在0Ag MM配型标准下，5～6 MM组、3～4 MM组、0～2 MM组术后急性排斥反应发生率依次降低(均P<0.05)。在Res M配型标准下，3～4 MM组术后急性排斥反应发生率高于0～2 MM组(P<0.05)。见表3。

表3 两种配型标准下患者术后急性排斥反应[n(%)]

注：与0～2MM比较，*P<0.05；与3～4MM比较，#P<0.05。

2.3 移植肾功能恢复情况 225例患者中，移植肾功能立即恢复156例(69.3%)，移植肾功能缓慢恢复25例(11.1%)，DGF 44例(19.6%)。0Ag MM标准与Res M标准的0～2 MM组、3～4 MM组移植肾DGF率比较，差异均无统计学意义(均P>0.05)。在0Ag MM配型标准下，5～6 MM组、3～4 MM组、0～2 MM组DGF发生率依次降低(均P<0.05)；在Res M配型标准下，3～4 MM组DGF发生率高于0～2MM组(P<0.05)。见表4。

表4 两种配型标准下DGF发生率比较[n(%)]

注：与0～2 MM比较，*P<0.05；与3～4 MM比较，#P<0.05。

3 讨 论

HLA系统是人类主要组织相容性系统，是导致移植物排斥反应的主要抗原。由于HLA抗原的多态性，要为肾移植受者找到HLA完全相同的肾脏非常困难。美国国立器官分配中心制定了HLA 0Ag MM标准，与传统的抗原配型标准相比，该标准可以提高供-受者HLA的匹配率，减少移植物丢失。谭建明等[7]建立了目前国内比较认同的中国汉族人群HLA-Ⅰ、Ⅱ类Res M标准，提高了供-受者组织相容的匹配率，降低了移植排斥发生率。在本组225例壮族肾移植患者中，按0Ag MM标准，达3～4 MM者的比例较高，为73.3%，高于按Res M标准下的比例，而达0～2 MM者的比例低于按Res M标准下的比例，这提示Res M标准能提高肾移植供-受者HLA相配的概率。

在肾移植中，供受者的组织相容程度与肾移植术后急性排斥反应发生情况密切相关。本研究结果显示，0Ag MM标准与Res M标准的0～2 MM组、3～4 MM组术后急性排斥反应发生率比较，差异均无统计学意义(均P>0.05)；而在同一标准下，0～2 MM组的急性排斥反应发生率均低于3～4 MM组(均P<0.05)。提示按照Res M标准配型并不增加急性排斥反应的发生率；同一标准下酸残基错配个数越少，急性排斥反应发生率越低。

李留洋等[10]研究发现，HLA抗体影响移植肾早期肾功能恢复，随着错配率的增加，术后抗供者的特异性抗体出现升高的比率也逐渐增加。本研究结果显示，0Ag MM标准与Res M标准的0～2 MM组、3～4 MM组的DGF发生率比较，差异均无统计学意义(均P>0.05)，提示按照Res M标准配型并不增加DGF的发生率。而在同一标准下，0Ag MM配型结果为0～2 MM组的DGF率低于3～4 MM组(P<0.05)，提示错配个数越多，DGF发生率越高。

综上所述，与0Ag MM标准比较，按照Res M标准进行配型能提高肾移植供-受者HLA相配的概率，但不增加移植肾急性排斥发生率及DGF率，这种配型策略亦适用于壮族人群肾移植。