TAFI与缺血性脑卒中相关的研究进展

吴宇卉 国娟 冯娟

摘 要：TAFI是一种能被凝血酶、凝血酶调节蛋白、纤溶酶等物质激活的血浆酶原，在凝血系统、纤溶系统以及炎性反应中均起到调节作用，故TAFI及其基因多态性是缺血性脑卒中发病的重要因素及发病基础，成为疾病的严重程度、进展及预后的标志物。TAFI抑制剂的应用也可以加强缺血性脑卒中的治疗。本文综述了目前TAFI的作用机制及其抑制物的治理作用，为将其应尽早应用于临床进行预防及治疗提供依据。

关键词：TAFI基因多态性;缺血性脑卒中;TAFI抑制物

中图分类号：R54 文献标识码：A 文章编号：1671-2064（2019）23-0178-02

缺血性脑卒中是世界上最重要的致殘病因，世界第二大致死病因。它严重危害人类健康，并给社会带来沉重的经济负担，而中国是世界上卒中的发病率和死亡率最高的国家。因此，研究TAFI有助于识别缺血性脑卒中的危险因素和高危个体，并应用临床改善疾病进展及预后。

1 TAFI的作用机制

TAFI由423个氨基酸组成，是循环在血浆中的不活跃的前体，可转化为活性形式-羧肽酶B样酶的糖蛋白。由凝血酶、纤溶酶和凝血酶调节蛋白激活，由肝细胞合成并分泌，在内皮细胞、巨噬细胞、巨核细胞及血小板中也已经证实存在肝外TAFI的产生及表达。

1.1 凝血

在凝血通路中，凝血酶通过凝血酶依赖、FXIIIa驱动的纤维蛋白网络交联和激活凝血酶激活的纤溶抑制物来参与血栓的稳定。凝血酶-凝血酶调节蛋白复合物被认为是TAFI的生理激活剂之一。复合物产生的凝血酶和内皮上的凝血酶调节蛋白浓度是TAFI激活的重要调节因子，并呈剂量依赖性。

凝血酶调节蛋白为内皮细胞受体，既可以激活TAFI也可以激活血浆蛋白C，这取决于其浓度。低浓度（5nM）TM使TAFI的活性增高，当浓度进一步升高时（10nM），TAFI的活性相对下降，而血浆蛋白C被更多地激活，从而抑制凝血酶的形成。

1.2 纤溶

TAFI的功能不仅限于凝血系统的调节，而且在纤溶调节中起着广泛的作用。凝血块扩增过程中产生的凝血酶将产生足够的活化TAFI来调节纤溶。凝血酶调节蛋白复合物激活时，激活肽从催化结构域释放出来。TAFIa通过不断去除部分降解的纤维蛋白上的C-末端赖氨酸残基，消除纤溶酶原结合位点，抑制纤溶酶原激活和纤溶功能受损，从而降低纤溶酶原激活率和纤溶率。因此，推测凝血酶的形成和TAFI的激活可能导致凝血系统和纤溶系统的失衡，从而导致血栓性疾病，尤其是缺血性脑卒中。

1.3 炎症

TAFI作为一种急性时相蛋白，发挥调节体内炎性反应的功能。TAFIa可通过降解生物活性多肽过敏毒素、缓激肽、骨桥接素C末端的精氨酸，使这些炎性因子失去诱导炎症反应的活性，从而调节炎症变化，并调节血压和血管张力。

1.4 基因与遗传效应

由于TAFI抗原水平的个体间变异较大，与生活方式特征的相关性较弱，因此认为TAFI抗原主要受遗传控制。

TAFI基因定位于染色体13q14.11，全长约48kb，包含11个外显子目前已鉴定出大量的TAFI基因多态性，其中2个导致了氨基酸替换，即Thr147Ala和Thr325Ile。携带TAFI1040T变异的个体比突变的非携带者具有更低的TAFI抗原水平，但由于突变分子在37°C下比非突变的TAFI更稳定，因此具有突变的受试者表现出比非突变携带者更低的纤溶潜能。

TAFI研究中的不同结果可能是由于抗体对不同TAFI异构体反应的多样性。但由于一些用于ELISA测定的TAFI-Ag在不同异构体之间具有不同的测定灵敏度，导致对与TAFI基因多态性相关影响的高估，目前使用不依赖基因型分析的研究结果。

2 TAFI与缺血性脑卒中的联系

2.1 缺血性脑卒中患者TAFI水平升高

Montaner等人在发病24小时内测量30名老年缺血性卒中患者的TAFI抗原提示水平升高，且神经症状的严重程度与TAFI抗原之间存在显著的相关性。Santamaría等人对114名患有缺血性脑卒中的患者进行调查，在事件发生后的第一个月内，患者的TAFI水平高于对照组，并且提供证据表明高风险的缺血性脑卒中与高TAFI水平有关。Leebeek等人对124名最近首次发生缺血性脑卒中的患者实施溶栓试验发现，功能性TAFI水平增加。Ladenvall等人实施的利用Sahlgrenska学院缺血性卒中研究数据对照研究提示缺血性脑卒中患者血浆TAFI与对照组相比升高，并且这种差异对于释放的TAFIa比完整的TAFI更为明显。这种关联在所有缺血性卒中亚型都能观察到，表明血浆TAFIa升高增加脑血栓栓塞事件的风险，且与潜在病因无关。

2.2 TAFI与缺血性脑卒中严重程度的影响关系

Brous等人对136例急性脑卒中患者入院后7.5h、24h、72h和卒中后第7天的血浆TAFI浓度进行了测定，结果显示中风发作后的前72小时，TAFI浓度显著下降，随后在第7天恢复到基线水平，该结果与更严重的脑卒中、不利的脑卒中演变和不良的长期脑卒中结局有关。K.JOOD等人利用来自SAHLSIS队列前瞻性随访的数据来研究TAFI水平与卒中后预后、未来死亡和/或复发性血管事件的可能联系。研究发现恢复期血浆TAFIa与幸存者未来死亡或复发血管事件有关联，与传统血管危险因素无关。Mertens等人对起病<24h的超急性缺血性脑卒中患者脑脊液及血浆中TAFI水平进行检测，发现病例组脑脊液TAFI水平较正常对照组明显升高，且TAFI水平与脑卒中后3个月的进展及转归有关，并分析得出最可能与脑卒中超急性期血脑屏障功能障碍有关。

关于TAFI对于脑损伤的作用，存在争议。Orbe等人的研究人文TAFI缺乏可导致大脑中动脉注射凝血酶后24小时脑损伤增加，神经元变性。Denmore等人在短暂性脑中动脉闭塞小鼠模型中风后24小时对小鼠进行神经学评分，评估脑血栓形成负荷，并计算脑梗塞大小。结果显示抑制TAFI可显著减少脑卒中后24小时50%的脑梗死面积。实验表明TAFI对缺血性脑卒中模型具有保护作用，其作用机制是抑制纤维蛋白沉积，防止纤维蛋白的过度积累，从而改善再灌注、限制缺血性脑损伤。而Kraft等人用塔菲-/-小鼠评估了脑卒中的发展、脑内纤维蛋白的形成和卒中后的功能结局。表明TAFI对缺血脑损伤后血栓形成和神经元变性没有起主要作用。

3 TAFI基因多态性与缺血性脑卒中的相关性

Akatsu等发现TAFI的Ala147Thr和Thr325Ile基因多态性与脑梗死发生无相关性。Leebeek等研究也发现缺血性卒中患者的TAFI基因型分布与正常人没有明显差别。最近Ladenvall等的研究，共分析TAFI基因11个不同位点的SNP，在单位点分析中没有发现SNP与缺血性脑卒中有关联，但亚型分析中显示H2B与隐源性缺血性脑血管病相关，H2B携带者患病风险增加，单倍体H1B可降低小血管病变患病风险，而单倍体H2D和H2E可增加小血管病变的风险。这些结果可能与研究样本较小有关，其代表性与普通人群存在一定差异，或者不同的人群可能会有不同有结果，需要研究不同位点的多态性，同时进行单倍体型分析，得到的结果会更有价值。

4 TAFI与溶栓

在脑梗塞的患者中，即使应用了最有效的溶栓治疗，仍然有50%的患者不能得到早期、完全和持久的再灌注，并且出血率增高。因此科学家们提出了一个能增强溶栓疗效又相对安全的新方法，即联合运用TAFIa的抑制剂。下调TAFI的抗纤溶活性可以通过两种途径：一是直接与TAFIa反應降低其活性;二是间接途径，如结合血浆中的凝血酶阻止其对TAFI的活化。

4.1 研究成果

Christine Alessi等人连续测定静脉注射rt-PA溶栓剂和未溶栓治疗患者的TAFI水平。在溶栓患者中，入院时TAFIa/ai水平更高，TAFI抗原水平稍低;而T与NT之间TAFI酶原总量没有明显差异。溶栓患者的NIHSS评分与TAFIa/ai峰值水平之间的关系相当一致，这加强了将TAFIa作为溶栓治疗靶点的兴趣。接受t-PA治疗的缺血性脑卒中患者调整脑卒中危险因素之前，TAFI水平与再通率有。在动物模型中，TAFI的抑制已显示加速t-PA诱导的体外血栓溶解并增强血栓溶解。这些结果提示活化的TAFI抑制剂可作为溶栓治疗的佐剂。

另一项表明TAFI是治疗或预防血栓栓塞性疾病的有吸引力的药理学靶点的观察是，在塔菲-/-小鼠中没有过度出血。可能是由于TAFI-/-小鼠表现出与健康大脑微血管结构显示出非常一致的结构和功能组织模式，提供了对出血的非常程度的保护，并且TAFI有作为抗炎和内皮屏障稳定剂的新作用，这可能有助于解释该模型中没有脑出血。这种安全的治疗对急性缺血性脑卒中的治疗尤其有利，因为传统的溶栓药物和抗凝血药物不可避免地会增加出血相关的发病率和死亡率。

4.2 临床应用

来自土豆的羧肽酶抑制物是TAFI的特异性抑制物，在兔动脉栓塞模型中用联合应用t-PA和CPI，发现改善了t-PA的纤溶作用，同时不增加对血压、APTT、PT以及纤维蛋白原等的影响，因此目前认为CPI可能是溶栓治疗中t-PA新的有效辅助制剂。agashima等在兔颈静脉血栓模型中也发现静脉联合应用CPI和t-PA。90min后，颈静脉血栓重量明显减轻，这也说明联合应用CPI抑制TAFI可以增强t-PA诱导的血栓溶解，提高溶栓疗效。

Yoshiyuki Morishima等人将人正常血浆以及缺乏TAFI的血浆分别与依度沙班、PCI混合，测定凝块溶解时间，得出结论依度沙班的作用主要依赖于TAFI。依度沙班和TAFIa抑制剂的联合应用可能有利于血栓栓塞性疾病的治疗。

最近的研究表明，水蛭素是一种特异性的凝血酶抑制剂，能够特异性抑制活化的凝血酶而间接地抑制TAFI，从而增强纤溶。研究发现，从扇头蜱粘液囊提取的蜱羧基肽酶抑制物能与TAFI紧密结合，在活体外重组体rTCI的抗纤溶能力是重组CPI的十倍，所以其在预防和治疗血栓性疾病上很有发展潜力。

5 结语

凝血与纤溶过程的失衡是血栓形成的主要原因，是动脉粥样硬化所致血栓性疾病急性发作的关键因素。炎性反应参与动脉粥样硬化过程，是血栓性疾病发作的基础。TAFI在凝血和纤溶两个系统中发挥调节作用，也是调节炎性反应和炎性因子水平的重要因素。TAFI及其基因多态性可能成为预测急性缺血性脑卒中的一个新标志物，并与疾病的严重程度、发展及预后相关。已在动物血栓模型上运用TAFI抑制剂促进溶栓，并取得较好疗效。因此，目前应加强对TAFI及其抑制物的深入研究，并将其应尽早应用于临床进行预防及治疗。