正交实验优选痛风巴布膏剂的提取工艺

谢鑫 侯晓杰 李玮 李慧 庹林波 杨肖衣 张建锋

【摘 要】 目的：优选痛风巴布膏剂的最佳提取工艺。方法：以复方中马钱子碱含量和出膏率为考察指标，采用正交实验优选最佳提取工艺。结果：最佳提取工艺为提取2 次，每次加水量为10 倍，每次提取时间为0.5h。结论：正交实验优选的痛风巴布膏剂的提取工艺稳定、可行。

【关键词】 痛风巴布膏剂;正交实验;提取工艺;马钱子碱

【中图分类号】R284.2 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2019）23-0038-03

Rthogonal design is preferred for extraction process of Gout babu paste

XIE Xin1 HOU Xiaojie2*  LI Wei2 Li Hui2 TUO Linbo2 YANG Xiaoyi2 ZHANG Jianfeng3*

1.Qingzhen Hospital of Traditional Chinese Medicine，Qing zhen 551400， China;1.School of Pharmacy，Guizhou University of Chinese Medicine，Guiyang 550025， China;2.Sinopharm Group Tongjitang（Guizhou）Pharmaceutical Co.， Ltd. Guiyang 550009，China

Abstract：Objective Optimize the best extraction process of gout Babu paste. Methods The optimum extraction technology was optimized by orthogonal experiment based on the content of brucine and the ratio of extract from brucellia chinensis Results The best extraction process is 2 extraction times， each time the water is added 10 times， each extraction time is 0.5h. Conclusion The extraction technology of gout Babu paste optimized by orthogonal experiment is stable and feasible.

Keywords：Gout Babu Paste;Orthogonal experiment; Extraction Process; Strychnine

馬钱子为马钱子科植物马钱（Strychnosnux-vomica L .）的干燥成熟种子，马钱子碱为其主要有效成分之一，具有镇痛作用。马钱子味苦，性温，有大毒。具有通络止痛、散结消肿的功能[1]，临床上常用马钱子等药物治疗风湿性关节炎、痛风、肌肉疼痛等症。其中，痛风是一种临床综合征，主要是由于尿酸排泄减少或嘌呤代谢紊乱导致尿酸升高，最典型、最常见的临床表现为痛风性关节炎、后期形成的痛风结石。痛风的患病率随着人们生活水平的提高，较以往呈现明显增高趋势，40岁以上男性多发，常见第一跖趾关节，在其它较大关节也有发生，特别是是踝部与足部关节部位[2-3] 。本医院根据临床经验用制马钱子、红花、生半夏、生大黄等药物组成的复方对痛风症治疗，以洗剂形式进行治疗，但是洗剂给药不便，且在一定程度上制约药效的发挥，因此，为了改进洗剂的弊端，使复方发挥更大的疗效，本研究拟采用巴布膏剂，现以复方中马钱子碱含量和出膏率为考察指标，以提取时间、加水量、提取次数为影响因素，采用正交实验，优选痛风巴布膏剂的最佳提取工艺，以期发挥更佳的临床疗效。

1 仪器与试药

1.1 仪器 UltiMate3000型高效液相色谱仪（赛默飞），柱温箱，WP-UP-WF-20微量分析型超纯水机（淅川沃特浦水处理设备有限公司），AUW220D型分析天平（十万分之一），HH-S4数显恒温水浴锅（上海况胜实业发展有限公司），600T多功能型粉碎机（永康市铂欧五金制品有限公司），101-3AB型电热鼓风干燥箱（天津市泰斯仪器有限公司），YQ-1000A型超声波清洗仪（上海易净超声波仪器有限公司）。

1.2 试剂与试药 马钱子碱对照品（贵州迪大科技有限责任公司，批号GZDD-0543）;马钱子（贵阳济仁堂药店，批号20181203）红花（贵州同济堂药店，批号180801）;生半夏（貴阳济仁堂药店，批号20180904）;生大黄（贵阳一品药业，批号180110）;王不留行（贵阳芝林大药房，批号180802）;海桐皮（贵州同济堂药店，批号181-201）;艾叶（贵阳济仁堂药店，批号2018-1101）;冰片（贵州同济堂药店，批号180901）;痛风巴布膏剂（清镇市中医院，批号190102、190-203、190310）;甲醇为色谱纯;其它试剂均为分析纯，水为娃哈哈纯净水。

2 方法与结果

2.1 提取方法 根据痛风巴布膏剂处方特点和临床应用，该经验方为水煎煮后外用，临床效果较好，为了与原方制备方法保持一致，对复方采用水煎煮提取后浓缩，即得复方浓缩液。

2.2 出膏率测定 将上述浓缩液置已干燥且恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，然后放入105℃烘箱内干燥箱在中干燥至恒重后置干燥器中冷却30min，即得浸膏，迅速称定质量，计算出膏率。出膏率（%）=干膏重量/原药材重量×100%。

2.3 马钱子碱的测定

2.3.1 色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-0.01mol/L庚烷磺酸钠与0.02mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液（用10%磷酸调节pH值至2.8）（21：79）为流动相;检测波长为260nm[8] 。

2.3.2 对照品溶液制备 精密称定马钱子碱对照品5mg，置于10mL容量瓶中，加三氯甲烷适量使溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取2mL，置同一10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得每1mL含马钱子碱0.lmg。

2.3.3 供试品溶液制备 精密称定本品干膏0.3g，置5mL具塞容量瓶，再加入5.0mL三氯甲烷，搅拌至完全溶解，滤液过0.45μm的微孔滤膜，即得。

2.3.4 线性关系考察 按2.3.2项下对照品溶液制备方法制备对照品溶液，精密吸取对照品溶液1.0μL、5.0μL、9.0μL、13.0μL、15.0μL，在2.3.1项色谱条件下依次进样，测定马钱子碱峰面积，以进样量X（ug）为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程：Y=26.566X+0.9126，r=0.9998。表明马钱子碱在0.1～1.5μg范围内线性关系良好。

2.3.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液20μL，连续进行进样6次，按2.3.1项下色谱条件测定峰面积，计算RSD为2.91%，表明该方法精密度良好。

2.3.6 重复性试验 按2.3.3项方法制备6份供试品溶液，按2.3.1项下色谱条件依次进样，结果马钱子含量的RSD为1.89%，表明该方法重复性良好。

2.3.7 稳定性试验 精密吸取同一批号的供试品溶液20μL，依次在0、3、6、12、24h进样，按2.3.1项下色谱条件测定峰面积，计算RSD为2.46%，表明供试品溶液在24h内稳定。

2.3.8 加样回收率试验 精密称定已知马钱子碱含量的样品6份，各0.15g，分别加入0.1mg/mL的马钱子碱对照品溶液1.63mL，按2.3.3项下方法制备样品溶液并测定含量，计算加样回收率，结果平均回收率为99.5%，RSD为1.87%，表明该方法准确可行。

2.4 正交试验方法与结果

2.4.1 因素与水平 本实验采用水煎煮法提取，以马钱子碱的含量作为评价指标，选择L9（33）正交实验对提取时间（A）、加水量（B）、提取次数（C）进行优选，每组实验平行3次，共27次实验。见表1。

2.4.2 实验结果与分析 对9组实验，按2.1、2.2、2.3.1和2.3.3项下方法制备样品溶液，分别测定马钱子碱含量和干膏得率，并按照以下评分方程计算其综合评分：综合评分=马钱子碱含量隶属度×60+干膏得率隶属度×40，（隶属度=（指标值-指标最小值）/（指标最大值-指标最小值））。正交实验结果见表2，表3，并对结果进行方差分析，考察因素A、B、C对综合评分的主效应。结果见表4。

从表4可知，因素A、B、C对综合评分的主效应不显著（P>0.05），由表3中极差R值可知，各因素的影响大小依次为C>B>A，且C3>C2>C1，B2>B3>B1，A1>A3>A2由于C3与C2差异不大，从节约能源，利于生产考虑，选择提取2次更合适。综合比较后，确定A1B2C2为痛风巴布膏剂的最佳提取工艺，即10倍量的水，提取2次，每次0.5h。

3 讨论

本实验前期对乙腈-0.01mol/L庚烷磺酸钠与0.02mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液（用10%磷酸调节pH值至2.8）、乙腈-异丙醇-3%磷酸溶液、甲醇-十二烷基磺酸钠-磷酸二氢钾三种流动相进行了考察。考察发现乙腈-异丙醇-3%磷酸溶液为流动相时黏性特别大，容易堵塞柱子;甲醇-十二烷基磺酸钠-磷酸二氢钾为流动相时马钱子碱的色谱峰与其他峰分不开，且拖尾严重;乙腈-0.01mol/L庚烷磺酸钠与0.02mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液（用10%磷酸调节pH值至2.8）为流动相时马钱子碱的色谱峰与其他峰能较好的分开，且峰形较好。故本实验最终确定采用乙腈-0.01mol/L庚烷磺酸钠与0.02mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液（用10%磷酸调节pH值至2.8）为测定指标成分马钱子碱的流动相。

本研究使用的复方中选用的是制马钱子，生马钱子毒性大，仅供外用，且有毒成分能经皮膚吸收，外用不宜大面积涂敷。马钱子经炮制后毒性降低，可入丸散剂，供内服。制马钱子中马钱子碱的含量降低，马钱子碱氮氧化物含量明显增加，且马钱子碱及其氮氧化物药理作用相似，但马钱子碱的毒性成分比其相应的氮氧化物大15倍，而马钱子氮氧化物的镇痛作用强于马钱子碱，且具有药效发挥迟而药力持久的特点[4]。因此，为了保证临床用药安全、有效，复方选用制马钱子。以马钱子碱的含量为控制指标，正交实验结果表明，痛风巴布膏剂最佳提取工艺为A1B2C2，即10倍量的水，提取2次，每次0.5h。在此工艺下，马钱子碱的含量为0.1481%，小于2015版药典规定的含量，保证了临床用药安全。另外，本研究采用马钱子碱和出膏率两个指标进行综合评分，能够较全面地评价痛风巴布膏剂的提取工艺，且方法简单、成本低、精密度高，重现性好，为日后痛风巴布膏剂的研制奠定了基础。

参考文献

[1]中华人民共和国国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2015：50-51.

[2]赵正奇，叶超，王泽然，等.叶新苗针药结合治疗痛风性关节炎经验[J].中华中医药杂志，2019，43（4）：1527-1539.

[3]郑莉，杨家福，苏虹，等.彭江云分期辨治痛风性关节炎经验总结[J].辽宁中医杂志，2019，46（1）：38-40.

[4]陆兔林，金传山.中药炮制学[M].北京：中国医药科技出版社，2018：199-200.

（收稿日期：2019-09-22 编辑：陶希睿）

基金项目：贵州省中医药管理局中医药、民族医药科学技术研究课题：QZYY-2018-092;贵州省国内一流建设学科项目编号：（中药学）（GNYL[2017]008 号）;黔高教发[2017]158号-02-04 号。

作者简介：谢鑫（1980-），男，仡佬族，硕士，主管药师，研究方向为中药制剂研究。E-mail：7257097@qq.com

通信作者：侯晓杰（1984-），女，汉族，硕士，助教，研究方向为中药炮制研究。E-mail：605128843@qq.com;张建锋（1981-），男，汉族，硕士，副主任药师，研究方向为中药技术工艺及中药配方颗粒研究。E-mail：286911082@qq.com