农产品质量安全检测机构农药残留检测能力验证的方法与技巧

◎ 帅 云，万宏伟，王 娟，覃事玉

（湖南省常德市农产品质量安全检验检测中心，湖南 常德 415000）

定期对检验检测机构开展能力验证是资质认定、机构考核等主管农产品检验检测机构的特定要求[1]。量值溯源尚难实现或无法实现时，可以利用能力验证来检测测量结果的可信性[2]。

2014—2018年，常德市农产品质量安全检验检测中心参加了湖南省农委组织的农产品质检机构检测能力验证，均一次通过。通过对2018年能力验证进行分析总结，现对检验检测机构参加农产品农药残留检测能力验证提出方法与技巧，以供参考。

1 材料与方法

1.1 考核样品

此次能力验证分为必考项目（34项）和选考项目（37项），常德市农产品质量安全检验检测中心均报名参加，必考项目和选考项目有3项相同，共68种农药。本次能力验证发放的样品为已破碎芹菜样品，由湖南省农产品质量检验检测中心统一制备，实验室发放的样品在4个100 mL离心管中，其中1个空白样品、3个平行样品，每个样品均为50 g。

1.2 主要仪器和试剂

气相色谱仪Agilent 7890A ECD检测器，气相色谱仪Agilent 7890B FPD检测器，液相色谱串联质谱仪（LC/MS/MS）UPLC-XEVO TQD（美国waters公司）。

乙腈（色谱纯）、丙酮（色谱纯）、正己烷（色谱纯）、甲醇（色谱纯）、甲苯（色谱纯）、蒸馏水（屈臣氏）。

1.3 检测方法

采用NY/T 761-2008《蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留检测方法》和GB/T 20769-2008《水果和蔬菜中450种农药及相关化学品残留量的测定-液相色谱-串联质谱法》进行检测。

1.4 检测项目

（1）必考项目。甲胺磷、氧乐果、甲拌磷、对硫磷、甲基对硫磷、甲基异柳磷、水胺硫磷、乐果、敌敌畏、毒死蜱、乙酰甲胺磷、三唑磷、丙溴磷、杀螟硫磷、二嗪磷、马拉硫磷、亚胺硫磷、伏杀硫磷、六六六、百菌清、三唑酮、异菌脲、腐霉利、五氯硝基苯、乙烯菌核利、氯氰菊酯、氰戊菊酯、甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、氟氯氰菊酯、溴氰菊酯、氟氰戊菊酯、联苯菊酯和氟胺氰菊酯，共34种农药。

（2）选考项目。辛硫磷、涕灭威（涕灭威砜、涕灭威亚砜）、克百威（三羟基克百威）、灭多威、甲萘威、三氯杀螨醇、腐霉利、五氯硝基苯、乙烯菌核利、多菌灵、吡虫啉、氟虫腈、啶虫脒、哒螨灵、苯醚甲环唑、嘧霉胺、烯酰吗啉、虫螨腈、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐、咪鲜胺、嘧菌酯、二甲戊乐灵、噻虫嗪、氟啶脲、灭幼脲、阿维菌素、除虫脲、灭蝇胺、甲霜灵、霜霉威、多效唑、氯吡脲、氯虫苯甲酰胺、氯菊酯、醚菊酯、虫酰肼和吡唑醚菌酯，共37种农药。

2 能力验证结果

2018年农产品质量检测技术能力验证结果见表1，回收率在70%～130%为合格。由表1可知，所有检测结果均为合格。

表1 2018年芹菜中农药残留定性定量检测结果表

3 能力验证的具体方法与技巧

3.1 仪器状态与条件

仪器在能力验证之前，需要进行常规性的维护，使仪器的灵敏度、重复性和精密度符合要求，确保仪器能正常运行[3-4]。然后把所有考核项目中的农药上机进行检测，确定农药在仪器上的保留时间和响应值，并通过不断的调整仪器参数，选择合适的仪器条件，让结果更加准确，确保以最好的状态迎接能力验证[5]。

3.2 量具、试剂及标准物质

在标准物质溶液配制及样品前处理过程中，所使用的量具会对结果的准确性造成影响，所以都需要进检定或校准，包括微量移液器、瓶口分液器、大肚移液管、容量瓶，以确保移取溶液和定容体积的准确性[6]。移液器和大肚移液管的使用要遵守使用规范，否则会使检测结果有误差。

所用的试剂如乙腈、正己烷、丙酮、甲醇、甲苯要使用色谱纯，最好是使用同一厂家生产的试剂，方便排查仪器出现杂质峰的问题。

农药标准物质溶液要使用有证标准物质溶液，使用时注意有效期，最好在能力验证前再打开安瓿瓶进行配制，现配现用，确保标准物质溶液的浓度准确性。

3.3 样品前处理

样品前处理依据NY/T 761-2008《蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留检测方法》和GB/T 20769-2008《水果和蔬菜中450种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》进行，为了提高实验得到的数据的准确性，可以按以下方法进行。

NY/T 761-2008《蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留检测方法》整个前处理过程主要是由称取样品，根据样品质量添加提取试剂乙腈，匀浆，加入7 g氯化钠，振荡，静置30 min，再分别移取10 mL到2个25 mL烧杯中，水浴蒸发近干。

一个烧杯做有机磷类前处理，用1～2 mL丙酮淋洗25 mL烧杯2～3次，转移到5 mL容量瓶，丙酮定容，用0.22 μm有机滤膜过滤至样品瓶中，待测。

另一个烧杯做有机氯和氨基甲酸酯类前处理，先在烧杯中加入2 mL正己烷，然后将弗罗里硅柱用10 mL丙酮+正己烷（10+90）预淋洗，当溶剂液面到达佛罗里硅柱吸附层表面时，立即倒入上述待净化溶液，用25 mL烧杯接收洗脱液，用丙酮+正己烷（10+90）冲洗烧杯后淋洗佛罗里硅柱，少量多次，接收的洗脱液约15 mL左右。再将接收洗脱液的25 mL烧杯放在水浴恒温振荡器上加热，蒸发至5 mL以下，最好到2～3 mL，然后转移至5 mL容量瓶中，用1～2 mL正己烷淋洗小烧杯转移至容量瓶中，最后用正己烷定容至5 mL，取1～2 mL移入到2 mL进样瓶中，待测。

GB/T 20769-2008《水果和蔬菜中450种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》整个前处理过程主要是由称取试样，加入提取试剂乙腈，匀浆提取，加入氯化钠，再匀浆提取1 min，振荡，静置30 min。然后将氨基柱放入固定架上，加样前先用4 mL乙腈-甲苯（3+1）预洗Sep-Pak氨基柱，用鸡心瓶接取滤液，当液面到达氨基柱填充物顶部时，用移液器加入2 mL提取液，再每次用2 mL乙腈-甲苯（3+1）洗涤氨基柱3次。收集所有滤液，然后在旋转蒸发仪上，40 ℃水浴旋转浓缩近干，加入2 mL甲醇定容，用PTFE滤膜过滤至15 mL离心管中，然后用移液器移取0.2 mL样品溶液于进样瓶中，再加入0.8 mL蒸馏水，混匀，用于液相色谱串联质谱（LC/MS/MS）的测定[7]。

整个前处理过程由一个经验丰富的实验人员完成，另外一人进行辅助，最大限度的减少随机误差。其中有几个细节需要注意：①在吸取液体或定容时，尽量用同一方法进行保证准确，如移取10 mL提取液时，统一都用大肚移液管或者微量移液器，不要一个样品用大肚移液管，另外一个又用微量移液器。②进行有机氯测定前处理和液质前处理时，淋洗活化固相萃取柱尽可能保证淋洗液的体积一致。③液相色谱-串联质谱法的前处理，在旋转蒸发时，鸡心瓶中的滤液保留一滴不干，用鸡心瓶的余热蒸干，避免出现农药损失，影响回收率[8-9]。

3.4 定性定量方法

能力验证要求领样后3 d之内做出结果并上报，时间比较紧张，为保证能力验证顺利通过，采取以下几个措施。

（1）样品完成前处理之后，先将空白样品和1号样品上机检测，确定农药种类和大致浓度，再用空白基质提取溶液配成基质混合标准工作溶液，添加浓度与能力验证样品浓度尽量接近，提高准确度[10]。

（2）液质进行定量计算时，是用标准物质溶液校准曲线进行计算，样品上机浓度需要落在校准曲线范围内，提高数据的准确度。

（3）由于此次样品为50 g，提取溶剂为50 mL，计算结果时，需要用原始计算公式进行计算，不能用简化公式，防止出现计算错误。湖南省农产品质量检验检测中心在此次能力验证中规定计算结果保留3位有效数字。

式（1）中，ρ-标准溶液中农药的质量浓度，单位为mg·L-1；A-样品溶液中被测农药峰面积；As-农药标准溶液中被测农药的峰面积；V1-提取溶剂总体积，单位为mL；V2-吸取出用于检测的提取溶液的体积，单位为mL；V3-样品溶液定容体积，单位为mL；m-试样的质量，单位为g。

（4）在条件允许的情况下，可以进行添加回收率实验和重复性实验，进一步提高数据和结果的准确性。

（5）数据处理时，处理方法要保持一致，比如积分时，同一农药品种采用同样的积分方法，提高结果准确性[11]。避免因为处理方法不一致，对结果产生影响。

4 小结

只有熟悉整个能力验证流程，把控好整个实验过程，精益求精，才能顺利通过能力验证。