化学发光法测定CA50及CA242方法学评价*

陈建平，祝文彩，杨曙梅，丛 辉

（南通大学附属医院医学检验科，江苏226001）

消化道肿瘤是人类最常见的恶性肿瘤之一,好发年龄40～60岁,早期诊断、及早治疗是改善患者预后、提高生存质量的关键。糖类抗原50（CA50）是一种缺少岩藻糖残基碳水化合物部分的独特糖蛋白,在胰腺、肝脏、结直肠等消化道恶性肿瘤中有较高的检出率,对恶性肿瘤的疗效观察、预后判断具有一定的临床意义[1-2]。糖类抗原242（CA242）是一种唾液酸化的鞘糖脂类抗原,主要用于胰腺癌、结直肠癌的辅助诊断,对肿瘤疗效判断、追踪观察具有重要意义[3-4]。

北京科美生物技术公司研制的CHEMCLIN 1500全自动化学发光免疫分析仪检测感染性疾病标志物、肿瘤标志物,作为近年批准项目进入临床实验室应用。本研究选择CA50及CA242两个肿瘤标志物,在CHEMCLIN 1500系统上评价检测的精密度、正确度、检出限和分析测量范围,为临床应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂 北京科美生物技术有限公司CHEMCLIN 1500全自动化学发光免疫分析仪及配套的CA50、CA242试剂、校准品及质控品。

1.2 检测标本 南通大学附属医院确诊的结直肠癌患者30例,静脉采血3 mL,4 000 r/min离心10 min,分离血清备用。

1.3 方法学评价和实验方法

1.3.1 精密度评价：参照NCCLS EP5-A2[5],常规IQC在控后按标本检测程序进行检测。选择科美公司 CA50（批号 20140718）、CA242（批号 20131121）相应的低、高两个水平质控品作为检测标本,连续测定 20 次,计算批内精密度均值（）、标准差（S）及变异系数（CV）；选取低、高两个水平质控品,连续测定20 天,计算批间精密度均值（）、标准差（S）及变异系数（CV）。

1.3.2 正确度评价：参照NCCLS EP15-A[6],按照检测定值的参考物质计算偏差进行验证：分别选择CA50（批号 20140926）、CA242（批号 20140910）的 4号（S3）及6号（S5）标准品,每天测定2次,连续测定5天,计算10次检测结果均值,与靶值进行对比,计算检测值与靶值的相对偏倚（%）。偏倚=[（测定值-靶值）/靶值]×100%。

1.3.3 检出限评价：连续10次重复测定理论值为0的生理盐水样本,获得空白值（Xb1）、标准差（S）,计算检出限（XL）。XL=Xb1+kS,其中 k值为 3[7]。

1.3.4 线性范围评价：参照NCCLS EP6-A[8],选取高值血清样本（H）和低值血清样本（L）各1份,按照5H、4H+1L、3H+2L、2H+3L、1H+4L、5L 的关系配置,形成6个系列浓度样本,每份样本测定3次,计算均值,计算回归方程Y=aX+b和相关系数（r2）。

1.4 统计学处理 运用SPSS 10.0统计学软件对实验数据进行分析。

2 结 果

2.1 精密度评价 CA50低、高浓度批内精密度（CV）分别为3.97%和2.86%,批间精密度（CV）分别为6.21%和3.05%；CA242低、高浓度批内精密度（CV）分别为2.12%和1.38%,批间精密度（CV）分别为10.79%和8.38%。见表1。

表1 CA50、CA242批内和批间精密度评价实验

2.2 正确度评价 CA50、CA242的校准品正确度验证结果见表2,CA50的S3、S5标准品相对偏倚分别为-1.08%、-2.04%,CA242的S3、S5标准品相对偏倚分别为2.64%、-2.14%,均低于厂家说明书的偏倚值（＜5%）,正确度满足要求。见表2。

表2 CA50、CA242准确度评价实验

2.3 检出限评价 参照2013版医院检验科建设管理规范[9],通过测定生理盐水获得CA50、CA242的检出下限分别为0.68 U/mL、0.56 U/mL。

2.4 线性范围评价 选取CA50高浓度（150.86 U/mL）、低浓度（19.43 U/mL）血清样本,CA242高浓度（191.25 U/mL）、低浓度（15.86 U/mL）血清样本,分别配置成系列浓度样本,对测定值与理论值进行统计分析。结果显示CA50斜率a为0.970,r2为0.9895；CA242斜率a为0.9683,r2为0.9971,各稀释度的检测结果与理论值密切相关（r2＞0.950）,CA50浓度在19.43～131.55 U/mL、CA242 浓度在 15.86～191.25 U/mL范围内线性关系良好。见图1。

图1 CA50、CA242线性回归曲线

3 讨 论

为了保证临床实验室检验质量,根据美国病理学家协会（CAP）对临床实验室质量管理的要求[10]和临床实验室认可的要求[11],临床实验室在新的检验方法、新的检测仪器正式投入使用之前,必须用实验评价检测系统的基本性能,以确保检测结果能够真实准确反映患者病情,协助临床诊治[12]。CHEMCLIN 1500检测系统采用全自动化学发光技术、封闭检测系统,使用配套试剂、标准品及质控品,但是由于各个实验室在实验环境、电压稳定性、工作人员素质等方面存在差异,临床实验室需要根据自身条件对仪器检测系统进行基本的性能验证。美国国会颁布临床实验室修正案（CLIA′88）指出,临床实验室可以只对最重要的性能评价指标进行验证,即精密度、准确度和线性范围[13]。本实验室在开展CA50、CA242检测前,对厂家提供的主要分析性能进行了验证。

精密度是多次重复测量同一量时各测量值之间彼此符合的程度,表示测量过程中随机误差的大小,是检测系统重要的分析性能之一。参照NCCLS EP5-A2文件中评价定量测定方法和仪器精密度性能的要求,我们进行了一系列实验。结果显示,通过对低高两个水平质控品的检测,CHEMCLIN 1500检测系统检测CA50批内精密度CV分别为3.97%和2.86%,批间精密度CV分别为6.21%和3.05%；CA242批内精密度CV分别为2.12%和1.38%,批间精密度CV分别为10.79%和8.38%。CA50、CA242批内和批间精密度均低于厂家说明书相应检测性能声明,表明CA50、CA242检测结果能够满足实验室的要求。

正确度表示测得值与真值之间的符合程度,正确度高,表明测定结果越接近真实值。在NCCLS EP9-A文件中,正确度验证方法是使用临床患者样本进行方法学比较和偏倚估计,这种方法需要对照,对于实验室新开展的检测项目来说存在一定的困难。因此,本次实验在进行CA50、CA242正确度评价时,参照NCCLS EP15-A文件的评价方案,采取使用有定值的参考物质计算偏倚的方法进行检测系统的正确度评价,判断是否与厂家声明的性能一致。实验中分别连续重复测定厂商提供CA50和CA242校准品10次,结果分析发现CA50和CA242检测均值与标准品定值的相对偏倚均小于5.0%,偏倚水平低于厂家说明书的偏倚允许范围,符合要求,说明本检测系统对CA50和CA242浓度检测的正确度高。

检出限是指可以从样本中检测待测物质的最小浓度。与精密度、正确度一样,检出限也是评价方法和仪器性能的重要指标之一,可以对检测系统在低浓度水平的检测能力进行评估。本实验结果显示,CHEMCLIN 1500分析系统CA50、CA242最低检出限分别是0.68 U/mL、0.56 U/mL,表明该检测系统有较好的灵敏度,为临床检测结果的解释提供了一定的依据。

线性范围即分析测量范围,指定量检测项目的线性检测范围,是检测系统最终的输出浓度与被测物浓度是否呈线性的性能。线性范围的测量即测定浓度曲线接近直线的程度,反映整个检测系统的输出特性,有助于了解检测结果的准确性和可靠性,是一项重要的仪器性能指标。根据NCCLS EP6-A文件,本次实验采用6个系列浓度血清进行线性验证。实验显示,该检测系统CA50浓度在19.43～131.55 U/mL、CA242浓度在 15.86～191.25 U/mL 范围内线性良好,相关性好,符合临床检测要求。

CHEMCLIN 1500全自动化学发光免疫分析仪是科美公司最新研发生产的临床检测仪器,实行全自动操作,标准化程度高,大大降低人为因素的影响。通过本次实验,发现CHEMCLIN 1500全自动化学发光免疫分析仪检测CA50、CA242的精密度、准确度、检出限、线性范围与厂家声称值一致。CHEMCLIN 1500检测系统具有精密度好、正确度高、良好的线性等优点,能够满足临床检测的性能要求。