正畸力作用下牙髓组织神经生长因子的表达及其与疼痛的关系研究

赵紫婷 叶文成 李莹

近年来，临床日益重视关于正畸力作用下牙齿疼痛的研究。神经生长因子（NGF）是一种生物活性分子，参与牙髓组织的生长与损伤后的修复[1]。研究发现，炎症区域表达上调的NGF会影响感觉神经元的化学表型[2-4]。患者正畸加力初期牙髓组织存在炎症反应，NGF是否参与了正畸致痛尚无定论。基于此，本研究旨在探讨正畸力作用下牙髓组织NGF的表达及其与疼痛的关系，现报道如下。

1 对象和方法

1.1 对象 选取2015年5月至2017年7月本院收治的口腔正畸患者26例，排除全身系统性疾病、近2个月内服用过抗生素与免疫抑制剂等患者。其中男13例，女13 例；年龄 11~14（12.3±1.4）岁。26 例患者依据正畸计划均需拔除上颌双侧第一前磨牙（52颗牙）并进行固定矫治，上颌第一前磨牙均无龋病及牙周疾病。本研究获医院医学伦理委员会批准，患者或其家属知情同意并签署知情同意书。

1.2 方法 患者在安装矫治器前均拔除左上颌第一前磨牙（对照组，26颗牙）。参考Derringer等[5]的正畸加力方法，患者配戴矫治器后，用直丝弓固定矫治器安装在患者上颌牙列，第一磨牙粘带环、双侧第二前磨牙之间所有牙齿粘托槽均为杭州新亚公司生产的PIM直丝弓托槽，0.014英寸NITI预成弓丝入槽结扎，右上颌第一前磨牙托槽偏近中粘贴，从而使该牙获得50~100g（0.5~1 N）的颊向、远中向的扭转力。患者分别在安装矫治器后 1、3、7、15d（7、7、6、6 例）拔除右上颌第一前磨牙（观察组，26颗牙）。拔除的上颌第一前磨牙进行标本制备。

1.3 观察指标

1.3.1 牙齿疼痛评估 应用四点口述分级评分法(VRSs-4)问卷调查26例患者安装矫治器后各时间段上颌第一前磨牙的疼痛程度，记录其前1d夜间上颌第一前磨牙的疼痛程度，无疼痛、轻度疼痛、中度疼痛、重度疼痛分别评定为 1、2、3、4 分[6]。

1.3.2 牙髓组织NGF表达强度

1.3.2.1 标本处理 应用PBS（0.1mol/L、pH 7.2~7.4）冲洗标本牙表面血污，根尖2 mm左右用咬骨钳去除，然后用4%多聚甲醛固定，用0.5mol/L、pH 7.4的乙二胺四乙酸二钠（EDTA）脱钙8周，正丁醇脱水后直接浸蜡、包埋，制作石蜡标本，连续切片牙齿组织，厚度为4μm。

1.3.2.2 免疫组织化学染色和结果评判 应用武汉博士德公司生产的DAB试剂盒及SABC试剂盒、兔IgG多抗NGF抗体，应用SABC法染色，镜下对DAB显色进行控制。滴加50~100μl一抗工作液，室温孵育30min，用PBS冲洗切片5min，重复冲洗3次。DAB显色液显色5min，显微镜下控制反应，苏木精液复染细胞核1 min，脱水、透明、封片，显微镜下观察。NGF染色阳性标准为有棕黄色颗粒出现在细胞质中，细胞核呈蓝色[7]。在Nikon ECLIPSE TE 2000-U显微镜（日本Nikon公司）下对染色结果取像，在进行密度扫描过程中经Motie Med 6.0数码医学图像分析系统，检测两组牙髓组织NGF染色阳性细胞着色面积密度（AD）、平均光密度值（AOD）以反映NGF表达强度，分析牙髓组织NGF表达强度与牙齿疼痛程度的相关性。

1.4 统计学处理 应用SAS 8.1统计软件；计量资料以表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK检验；相关性分析采用直线相关；P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组牙齿疼痛程度、牙髓组织NGF染色阳性细胞AD与AOD比较见表1。

表1 两组牙齿疼痛程度、牙髓组织NGF染色阳性细胞AD与AOD比较

由表1可见，两组牙齿疼痛程度、牙髓组织NGF染色阳性细胞AD与AOD比较差异均有统计学意义（均P＜0.05），观察组安装矫治器后1、3d牙齿疼痛程度、牙髓组织NGF染色阳性细胞AD与AOD均高于对照组（均P＜0.05），观察组安装矫治器后3d的牙齿疼痛程度、牙髓组织NGF染色阳性细胞AD与AOD均高于安装矫治器后1d（均P＜0.05）。

2.2 牙髓组织NGF表达强度与牙齿疼痛程度的相关性分析见表2。

表2 牙髓组织NGF表达强度与牙齿疼痛程度的相关性分析

由表2可见，随着牙齿疼痛程度的增强，牙髓组织NGF染色阳性细胞AOD逐渐升高，即正畸力作用下牙髓组织NGF表达强度与牙齿疼痛程度呈高度正相关（r=0.867，P＜0.05）。

3 讨论

患者口腔正畸治疗初期普遍存在轻微的瞬时炎症反应，可能引发矫治器加力后几天内的不适[8]。研究表明，正畸治疗初期，常规加力虽然不会改变牙髓组织，但却会增强牙髓组织内一些生物活性物质的表达，如NGF等，调节血管反应及疼痛反应[9]。NGF是一种多功能多肽生长因子，属于神经营养素家族一员，在炎性疼痛中，NGF会引发疼痛，并维持疼痛状态[10]，且牙髓组织NGF的表达强度会在牙齿机械损伤后发生相应变化[11]。正畸力作为一种机械损伤，作用于牙齿后可能会改变牙髓组织的NGF表达。

牙髓神经主要包括无髓C类纤维、少量有髓A类纤维，前者主要感受慢性钝痛，缺乏明确的定位；后者主要感受急性锐痛，具有明确的定位[12]。研究发现，猫牙牙髓组织NGF受体不表达于恒牙牙髓血管壁中，而表达于未发育成熟的牙髓血管壁中；不表达于有髓神经纤维中，而表达于无髓神经纤维、大多数游离神经末梢中，同时高表达于髓腔周边的成纤维细胞中，具有特异性的分布特点[13]。本研究结果表明，观察组安装矫治器后1、3d牙齿疼痛程度、牙髓组织NGF染色阳性细胞AD与AOD均高于对照组；随着牙齿疼痛程度的增强，牙髓组织NGF染色阳性细胞AOD逐渐升高，即正畸力作用下牙髓组织NGF表达强度与牙齿疼痛程度呈高度正相关。这一结果与徐卿朝等[13]的研究结果相符，说明NGF可能在正畸力作用下参与调节牙髓疼痛。原因可能是在正畸加力初期，NGF具有较高的表达强度，提供了形成新生血管的良好条件，且通过NGF受体使感觉神经元接受兴奋性刺激，从而产生痛感[14]。