不同人乳头瘤病毒检测方法的临床应用价值研究

周婷婷 李雨艳 宋丽影 牟 荣*

（吉林金域医学检验所有限公司，吉林 长春 130012）

人乳头瘤病毒（HPV）是人类生殖器疣感染的主要病因，而且也是造成女性感染宫颈癌的主要病毒[1]。宫颈癌是女性生殖系统肿瘤的第二位恶性肿瘤[2]。现阶段，基本可以确定宫颈癌的病因与高危型HPV的持续感染存在相关性，而且自感染HPV至发生宫颈癌是一个相对漫长的过程，通常会给患者8～10年的时间来进行干预[3]。因此，早期筛查极为重要。随着宫颈癌的发病率逐年增多，早期筛查收到的准确性是患者获得良好的诊治的前提条件[4]。现阶段我国筛查主要采用免疫组化法、PCR-反向点杂交法及荧光定量PCR方法[5]。虽然在HPV的临床检验中已经有了多种检验手段，但是每种检测手段都存在一定的误诊或漏诊率，提高诊断的准确度是检验医学的发展目标。本研究旨在通过不同免疫检验方法用于抗HPV的结果进行对照分析，结果显示如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料：选取12份已经确诊的HPV（+）患者样本作为主要研究样本，并将100例健康体检者中的确定为（-）患者样本作为对照样本。

1.2 检验方法

1.2.1 免疫组化法：首先进行微波抗原修复，PBS（0.05 mol/L）清洗，之后加入一抗孵育，PBS清洗，加入二抗孵育，PBS清洗；最后滴加过氧化物酶标记莲霉卵白素再次孵育，PBS清洗；DAB显色，苏木素复染，中性树胶封片。

1.2.2 PCR-反向点杂交法：采用HPV基因分型检测试剂盒（PCR-反向点杂交法），采用PCR和反向点杂交法相结合的基因芯片技术，严格按照说明书操作。

1.2.3 荧光定量PCR方法：采用HPV核酸检测试剂盒（荧光PCR法），将DNA样品加入PCR反应液的反应管内，瞬间离心后放全自动荧光定量PCR仪内，严格按照说明书进行循环程序进行操作，循环结束后采用荧光分析仪应用其电脑软件统计并给出定量结果。

1.3 评价标准。敏感度：是指筛检方法能将实际有病的人正确地判定为患者的比例；特异度：是指筛检方法能将实际无病的人正确地判定为非患者的比例；约登指数：表示筛检方法发现真正的患者与非患者的总能力，约登指数=（敏感度+特异度）-1，指数越大说明筛查实验的效果越好，真实性越大。

1.4 观察指标：观察三种方法样本检测的阳性、阴性结果，并与确诊阴性和阳性结果相比对，统计三种方法的阳性率、假阳性率、阴性率、假阴性率，并计算出准确率、敏感度、特异度、约登指数。

1.5 统计学方法：采用SPSS 22.0统计学软件进行统计学处理，数据以率（%）表示，采用χ2检验，以P＜0.05差异显著，具有统计学意义。

2 结 果

2.1 对血清样本的检验结果对比：三种免疫检验结果无统计学差异（P＞0.05），见表1。

表1 三种检验方法对血清样本的检验结果比较[n（%）]

2.2 血清样本诊断指标分析对比：聚合酶链式反应（PCR ）方法的敏感度及特异度均优于其他两种检测，约登指数比较聚合酶链式反应（PCR）方法＞原位核酸杂交法＞免疫组化法（P＜0.05），见表2。

3 讨 论

宫颈癌已经被国际上证实其发病大多数情况下于HPV病毒感染有关[6]。宫颈癌的筛查的早期筛查能够降低其发病率及致死率，而针对HPV病毒的筛查的用于对宫颈癌的早期发现，放置癌前病变具有极为重要的价值[7]。虽然目前宫颈癌疫苗已经应用于临床青年女性，但是受到HPV病毒菌株的变化，仅能预防部分高危HPV感染的情况，临床的早期筛查仍然不能忽视[8]。

表2 三种检验方法对血清样本诊断指数比较

目前，HPV感染需要在HPV-DNA复制后才能够发现病毒蛋白的表达，所以，阴性者也不能完全排除可能感染的诊断，故该免疫组化法的敏感性及特异度均较低[7]。而PCR-反向点杂交法具有精准分型、效率高、性能佳、多设备通用、内部质控、多标本检测的优势。而且能够直接诊断出细胞感染的HPV病毒，可以用于组织的病理学检查。但是，其对样本量需求高，检测成本高，不适合大量临床应用。荧光定量PCR方法方法是基于核酸杂交理论的以HPV-DNA为模板的指数增长的速率采用体外扩增，具体敏感度高的诊断意义。其不仅能够确诊HPV阳性感染，而且可以对HPV分型进行诊断，而且能够区分高危还是低位类型病毒感染，可以测定病毒载量，进行基因序列分析、发现新基因型等。采用内标基因监控，结果可靠；能够有效防止检测环境中的PCR产物污染，从PCR扩增道结果产生的过程始终处于完全封闭的系统中，而且避免PCR后处理，降低了扩增产物污染和交叉感染的可能性，所以其具有更高的敏感度及特异度。

本研究结果发现，三种免疫检验结果无统计学差异（P＞0.05）；PCR-反向点杂交法的敏感度更高，荧光定量PCR方法的特异度及敏感度均好，约登指数比较荧光定量PCR方法＞PCR-反向点杂交法＞免疫组化法（P＞0.05）；一种检测手段的优劣主要以准确率、敏感度及特异度进行评价，而约登指数是对检测方式的真实性的反应指标，通过结果可以看出，聚荧光定量PCR方法的特异度及敏感度均较高，可以作为HPV病毒筛查的首选工具；免疫组化法虽然操作相对简单，但其敏感度及特异度均较低，不适合作为筛查工具。

综上所述，对于抗HPV的早期筛查，都需要在检验实验室进行，荧光定量PCR方法敏感度及特异度相对较高，不容易漏诊，PCR-反向点杂交法特异度较高，能够避免误诊，而免疫组化法由于特异度及敏感度均相对较低，不适于临床广泛应用。