TTF- 1在肺腺癌组织中的表达及其与临床特征的关系

高炜，徐艳霞，刘圆圆，徐媺

青岛市肿瘤医院中西医结合科，山东青岛266042

肺癌是一种常见的恶性肿瘤，近年来，肺癌的发病率持续上升，病死率居高不下，是严重威胁人类生命健康的恶性肿瘤之一[1-2]。早期肺癌患者并无明显症状，大多数患者仅出现一些常见的呼吸道症状，如咳嗽、胸闷等，大部分患者就诊时已处于晚期，错过了最佳治疗时机，患者的5年生存率较低[3]。早期发现、及时诊断、尽快治疗是降低肺癌患者病死率的根本方法[4]。甲状腺转录因子-1（thyroid transcription factor-1，TTF-1）是一种在肺组织表面活性蛋白表达过程中起重要作用的转录因子，其在多数肺腺癌中均有表达，因此，TTF-1在临床上广泛应用于肺腺癌的常规病理诊断，但是目前对于TTF-1的表达与肿瘤发生、发展关系的研究较为少见[5]。本研究采用免疫组织化学染色法检测肺腺癌组织和癌旁正常组织中TTF-1的表达情况，并分析TTF-1表达与肺腺癌患者临床特征的关系，旨在为肺腺癌的血清学诊断提供新的参考指标，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2016年3月至2017年3月于青岛市肿瘤医院接受手术治疗且经手术病理证实的肺腺癌患者的临床资料。纳入标准：①肺腺癌的诊断标准参考2015版《中国原发性肺癌诊疗规范》[6]；②年龄为19～79岁；③均经手术后病理学检查证实为肺腺癌；④标本采集前未接受过放化疗、免疫治疗等；⑤临床资料齐全。排除标准：①伴有严重的肝肾功能不全；②既往有放化疗史、免疫治疗史；③转移性肺癌。根据纳入和排除标准，本研究共纳入75例肺腺癌患者，收集患者的肺腺癌组织标本75例及其相应的癌旁正常组织（距离病灶边缘3 cm）标本75例。75例肺腺癌患者中，男47例，女28例；年龄为41～78岁，平均年龄为（58.2±12.2）岁；解剖部位：中央型24例，周围型51例；病灶直径：≥5 cm 29例，＜5 cm 46例；TNM分期：I期16例，Ⅱ期29例，Ⅲ期22例，Ⅳ期8例；组织分化程度：高分化24例，中分化25例，低分化26例；有淋巴结转移46例，无淋巴结转移29例；表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）阳性36例，EGFR阴性39例。

1.2 免疫组织化学染色

将所有组织标本均采用10%中性福尔马林固定，并均经石蜡包埋后作连续切片，切片厚度为3～4 μm，严格按照说明书的步骤进行苏木精-伊红染色（hematoxylin-eosin staining，HE染色），并在5个高倍视野（×400）光镜下观察。将切片进行脱蜡，用pH为6.0的柠檬酸盐缓冲溶液在高温、高压的环境下进行抗原修复，再加入3%的过氧化氢消化约10 min，去除内源性过氧化物酶，在组织切片上滴加一抗，并在37℃环境下孵育1 h，再采用磷酸盐缓冲液冲洗3次，加二抗在37℃环境下孵育0.5 h，用磷酸盐缓冲液冲洗3次，冲洗完成后采用二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）法显色，显色后进行脱水、透明、封片和镜检。

1.3 免疫组织化学染色结果判定

TTF-1定位于细胞核，当出现黄色、棕黄色、褐色颗粒时提示为TTF-1蛋白阳性表达。根据染色强度评分：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色、黑色为3分。根据阳性细胞数目所占百分比评分：阳性细胞数目所占百分比≤10%为1分，11%～50%为2分，51%～75%为3分，＞75%为4分。根据染色强度评分和阳性细胞数目所占百分比评分的乘积判断免疫组织化学染色结果，＜3分为TTF-1蛋白表达阴性（-），≥3分为TTF-1蛋白表达阳性。其中，3～5分为TTF-1蛋白表达弱阳性（+）；6～9分为TTF-1蛋白表达中等阳性（++）；＞9分为TTF-1蛋白表达强阳性（+++）。

1.4 统计学方法

采用SPSS 16.0软件对数据进行统计分析。计量资料采用均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料以例数或率（%）表示，组间比较采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 肺腺癌组织和癌旁正常组织中TTF- 1阳性表达率的比较

肺腺癌组织中TTF-1的阳性表达率为77.3%（58/75），明显高于癌旁正常组织中的10.7%（8/75），差异有统计学意义（χ2=67.641，P＜0.01）。（表1）

表1 肺腺癌组织和癌旁组织中TTF- 1的表达情况

2.2 肺腺癌组织中TTF- 1表达与肺腺癌患者临床特征的关系

中高分化、有淋巴结转移、TNM分期为I+Ⅱ期肺腺癌患者肺腺癌组织中TTF-1的阳性表达率均明显高于低分化、无淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期肺腺癌患者肺腺癌组织中TTF-1的阳性表达率，差异均有统计学意义（P＜0.01）；不同病灶直径、EGFR表达的肺腺癌患者肺腺癌组织中TTF-1阳性表达率比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。（表2）

表2 不同临床特征肺腺癌患者肺腺癌组织中TTF- 1蛋白的阳性表达情况比较（ n=75）

3 讨论

近年来，肺癌的发病率和病死率均呈现逐年上升的趋势，目前已成为全球病死率最高的恶性肿瘤[7-8]。目前认为，吸烟是引发肺癌的最重要的高危因素，同时，辐射、肺部感染和遗传等也是引发肺癌的重要因素[9-10]。已有研究证明，长期且大量吸烟的人群患肺癌的概率是不吸烟人群的10～20倍，吸烟者的年龄越小，肺癌的发病率越高[11-12]。肺癌患者在患病早期多无特殊症状，常表现为胸部胀痛、咳痰、低热和咳嗽等症状，往往在胸部放射检查中偶尔发现[13]。肺癌晚期症状则表现为呼吸困难、体重骤减、咳嗽严重、咯血等。目前，肺癌的治疗主要包括化疗、放疗和外科手术治疗，尽管近年来放疗、化疗和外科手术治疗等技术不断提高，但大多数患者在就诊时已处于肺癌晚期，肿瘤多已发生了转移，患者失去了最佳的治疗时机，导致肺癌的5年生存率未明显提高[14]。有研究发现，原发性肺腺癌多起源于Ⅱ型肺泡上皮和支气管无纤毛分泌细胞（即clara细胞），Ⅱ型肺泡上皮细胞功能复杂，除了分泌表面活性物质、Ⅳ型胶原（基底膜成分）和一些重要的酶类物质外，还具有分裂增殖的能力[15]。

TTF包括TTF-1和TTF-2两种亚型[16]。TTF-l是在胚胎期和发育成熟的甲状腺、肺上皮细胞中表达的一种38 kD的转录因子。TTF-1基因位于人染色体14q13位点，含有3个外显子和1个内含子[17]。有研究表明，肺组织中，TTF-1控制表面蛋白A（surface protein A，SPA）、表面蛋白B（surface protein B，SPB）、表面蛋白C（surface protein C，SPC）和clara细胞分泌蛋白基因[18]。TTF-1是一种在肺的表面活性蛋白表达过程中起重要作用的转录因子，在多数肺腺癌中都有表达[19]。关于TTF-l的表达与NSCLC患者生存期关系的机制尚不十分清楚，已有研究表明，TTF-1蛋白的表达可用于鉴别肺腺癌与肺鳞癌、原发性肺癌与转移性肺癌，尤其在原发性肺癌的诊断中，TTF-1的表达具有较高灵敏度和特异度[20-21]。

目前对TTF-1的表达与肿瘤发生、发展关系的研究并不多见。本研究采用免疫组织化学染色法检测肺腺癌组织和癌旁正常组织中TTF-1蛋白的表达情况，并分析肺腺癌患者TNM分期、组织分化程度、病灶直径、淋巴结转移情况、EGFR表达情况与肺腺癌组织中TTF-1蛋白表达的关系。本研究结果显示，在肺腺癌组织及癌旁正常组织中均可以发现TTF-1蛋白的阳性表达，提示TTF-1蛋白可能参与肺腺癌的发生、发展。肺腺癌组织中TTF-1蛋白的阳性表达率明显高于癌旁正常组织（P＜0.01），提示TTF-1在促进肺癌发生的过程中发挥了重要作用，表明其对肺癌的诊断具有一定的价值。此外，本研究结果还显示，中高分化、有淋巴结转移、TNM分期为I+Ⅱ期肺腺癌患者肺腺癌组织中TTF-1蛋白的阳性表达率均明显高于低分化、无淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期肺腺癌患者，差异均有统计学意义（P＜0.01），提示TTF-1与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移情况关系密切。不同病灶直径、EGFR表达的肺腺癌患者肺腺癌组织中TTF-1蛋白的阳性表达率比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），提示TTF-1蛋白的阳性表达对病灶大小和EGFR的表达无影响。

综上所述，TTF-1蛋白在肺腺癌组织中阳性表达率高，并且与患者的TNM分期、淋巴结转移情况及组织分化程度密切相关。TTF-1蛋白在肺腺癌的发生、发展过程中发挥了重要的作用，对于肺腺癌患者的诊断及病情评估具有一定的参考价值，值得临床深入探讨。