肺炎支原体感染患儿视黄醇结合蛋白和T细胞亚群的变化及意义

梁导艳，郭春艳，封 青，黄晓燕，胡 军

(陕西省人民医院 中心实验室,陕西 西安710068)

肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae，MP) 即支原体感染引起的肺炎，是幼儿时期最常见的呼吸道疾病之一，占小儿肺炎的10%-30%[1]。近年来，由于秋冬季雾霾天气影响，患支原体肺炎的儿童呈上升趋势，并且发病年龄逐渐偏小，以婴幼儿、学龄儿为主要发病群体[2]。MP是社区获得性小儿疾病中常见的病原之一，所占的比例有逐年增长的趋势[3,4]。大多以支气管炎、气管炎、咽炎起病，病程缓慢。主要临床症状有发热、阵发性咳嗽、肺部伴有喘鸣音和湿罗音，肺部见斑点状阴影[5]。呈持续性或弛张型发热。多以呼吸道感染为主，并伴有多器官损伤等其他症状[6]。文献指出[7]，视黄醇结合蛋白(RBP)与肝脏损伤密切相关，可以反映病情的程度，是目前反映肝功能早期损害的有效指标，对肝脏早期损害的检查和治疗效果的监测具有重要意义。外周血T细胞亚群测定是反映机体兔疫功能状态重要指标。本研究探讨儿童肺炎支原体感染后RBP及T细胞亚群的水平变化，进一步研究其对肝功能及免疫功能的影响，给临床后续治疗提供理论依据。

1 资料与方法

1.1研究材料

实验组选取本院2017年10月至2017年12月儿童支原体肺炎急性期患病儿童65例，其中男孩35例，女孩30例，平均年龄4.8岁。支原体肺炎患儿符合《诸福棠实用儿科学》标准[8]。无其他疾病，无其他用药史，未使用免疫抑制剂，未出现其他合并症。支原体肺炎IgM阳性，滴度≥1∶80。对照组选取同期健康儿童40例，男孩22例，女孩18例。平均年龄4.3岁。两组儿童性别和年龄方面没有差距，不具有统计学意义。

1.2研究方法

1.2.1采集样本 实验组和对照组分别采取晨起空腹静脉血液4 ml，2 ml放置于促凝管中，用于视黄醇结合蛋白血清检测。2 ml放置于EDTA-K2抗凝管中,用于流式细胞仪全血检测。

1.2.2视黄醇结合蛋白(RBP)检测 仪器为日立7170全自动化分析仪，应用免疫散射比浊法，试剂和标准品分别由宁波美康和上海北加生化试剂有限公司提供。

1.2.3流式细胞仪检测 采用三色荧光标记单克隆抗体，异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗CD4抗体；藻红蛋白(PE)标记的抗CD8抗体；多甲藻素叶绿素蛋白(PerCP)标记的抗CD3抗体，均来自美国BD公司。三色校准微球来自美国BD公司。仪器使用流式细胞仪BD FACSCalibur(美国BD公司)。从抗凝血管中吸取全血50 μl加入到流式细胞仪专用管中(TruCount管)，再向其中加入荧光素标记抗体10 μl混匀，室温避光孵育20 min，加入溶血素FACSLysing(美国BD公司)2 ml，再次室温避光孵育15 min，然后放入离心机300 g，5 min离心，将上清倒入废液桶中，管中加入0.5 ml磷酸盐缓冲液(PBS)混匀，打开流式细胞仪BD FACSCalibur，用三色荧光微球进行校准，使所有标本检测条件一致。细胞收集1×104个/管，采用BD CellQuest软件进行细胞荧光强度和百分比分析。

1.3统计学方法

使用SPSS21.0软件进行统计。首先选用Levene检验方差是否齐，然后选用t检验比较两组是否有统计学意义。

2 结果

2.1血清视黄醇结合蛋白(RBP)检测结果RBP观察组为19.56±9.09，对照组为47.47±13.65，观察组明显低于正常对照，P<0.05,差异具有统计学意义。见表1。

2.2外周血T细胞亚群检测结果T细胞亚群检测中,CD3+、CD3+CD4+百分比和CD4/CD8比值明显低于对照组，P<0.01；CD3+CD8+明显高于对照组，P<0.01；均具有统计学意义。见表1，图1、图2。

表1 两组血清视黄醇结合蛋白及全血T细胞亚群的检测结果

注：A组和B组比较，CD3+CD4+明显降低

注：C组和D组比较，CD3+CD8+明显升高

3 讨论

RBP是由183个氨基酸残基构成分子量为21 KD的一种小分子蛋白。pH为4.4-4.8，沉降系数3 s，半衰期为3-12 h[9]。主要由肝脏内质网合成，小部分由肝外合成，广泛存在于人体的血液、尿液、脑脊液和其他体液中[10]。主要功能是用来转移肝脏中的视黄醇，是体内视黄醇(维生素)的运载蛋白，亦可以用于评判人体营养水平的变化[11]。在体内90%RBP与视黄醇结合，形成视黄醇RBP复合物，10%为结合的RBP可以自由从肾小球滤过而进入原尿[12]。RBP能够特异的结合和运载人体中的视黄醇至周围靶细胞组织，从而维持人体内的正常生命活动需求，是反映肝功能的一项敏感指标。由于其半衰期短、分子量小，能够快速的发生变化，敏感且有效的反映早期肝功能受损程度，对肝功能早期影响具有非常重要的指示作用[13]。有关文献报道中指出[14]，RBP在肝脏中合成分泌，若肝脏受损，RBP 生成量就会下降，血液RBP含量会明显降低，因此更能准确反映肝脏功能变化。本研究显示，儿童肺炎支原体感染时观察组较对照组，血清中的RBP会明显降低。即RBP的分泌及合成受到阻碍，表明肝功能受到损伤。因此，儿童感染MP时，检测RBP很有必要性，可直观的反映患儿肝功能是否受损。一旦检测出RBP降低，很可能肝功能会受到损伤，应及时做出治疗方案，减免肝功能受到进一步损伤。

T细胞亚群是有效维持机体免疫功能的重要免疫指标，CD3+、CD3+CD4+、 CD3+CD8+及CD4/CD8比值是本类免疫状态的直观反应指标，在免疫反应过程中起到诱导、辅助、抑制和毒杀等作用[15]。CD3+是总T细胞，参与机体细胞免疫应答，判断免疫状态低下或过激；CD3+CD4+是T辅助/诱导淋巴细胞；CD3+CD8+是T抑制/毒性淋巴细胞。机体正常情况下，各种淋巴细胞亚群(T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞)保持一定的数量和比例，相互作用，稳定调节，维持机体正常的免疫功能[16]。细胞免疫取决于CD3+、CD3+CD4+、 CD3+CD8+及CD4/CD8比值的调节。当CD3+、CD3+CD4+、 CD3+CD8+及CD4/CD8比值发生紊乱时，则容易导致疾病的发生[17]。文献报道，儿童感染MP时，CD3+CD4+、 CD3+CD8+T细胞可使IL-4、IL-6和IL-10细胞因子的表达升高。可进一步使Th2成为优势细胞，产生更多的细胞因子及炎性介质。从而使B淋巴细胞产生多种抗体，导致免疫功能失调[18]。还有文献指出[19，20]，儿童感染MP后，由于体内多种器官、组织共同的抗原部分所产生的抗体可与自身抗原结合形成抗原抗体复合物，引起免疫应答反应，产生炎性因子，导致除呼吸系统外的其他多个系统疾病的产生，导致CD4+降低，CD8+升高，CD4/CD8比值颠倒。免疫功能失调。本研究发现，观察组和对照组相比，CD3+、CD3+CD4+百分比及CD4/CD8比值均降低，CD3+CD8+百分比升高，且均具有统计学意义。和上述文献报道的均相符。表明，机体感染MP后淋巴细胞各项指标都存在改变，不同程度的升高或降低，自身免疫功能紊乱。

MP感染严重时，会累及多系统及多脏器损伤，合并免疫功能紊乱。本研究中，MP患儿肝功能异常并未出现肝实质性病变，均为可逆性损害，经过治疗均可恢复正常。研究发现，MP患儿肺炎感染的严重程度直接影响免疫功能的程度改变。感染越严重，免疫功能越低下，肝功能恢复时间越久。因此，儿童感染MP后，免疫功能的水平可间接的影响肝功能变化。

综上所述，儿童感染MP后，RBP会显著降低，合并T细胞亚群会发生改变，从而导致早期肝功能受损及免疫功能紊乱。临床上在发现MP感染的同时，应联合检测RBP及T细胞亚群水平变化，积极干预治疗肝损伤及免疫功能紊乱。及早控制病情的发展，达到早预防、早发现、早治疗的目的。