广泛耐药鲍曼不动杆菌的体外联合抑菌分析

马冬梅 陶庆春 齐宏伟

[摘要] 目的 研究双黄连和米诺环素、哌拉西林/他唑巴坦和头孢哌酮/舒巴坦联合应用对广泛耐药鲍曼不动杆菌的联合抑菌效果。 方法 收集2016年10月～2017年6月从北京中医药大学第三附属医院（以下简称“我院”）临床标本分离出的30株广泛耐药鲍曼不动杆菌，应用肉汤稀释法测定双黄连与米诺环素、哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦的最低抑菌浓度（MIC），计算部分抑菌浓度（FIC）指数，判定中西药联合抑菌效果。 结果 双黄连和米诺环素联用FIC指数：0.5～1占6.7%、>1～2占63.3%、>2占30.0%；双黄连和哌拉西林/他唑巴坦联用FIC指数：0.5～1占16.7%、>1～2占83.3%；双黄连和头孢哌酮/舒巴坦联用FIC指数：≤ 0.5占23.3%、0.5～1占73.3%、>1～2占3.3%。 结论 双黄连联合米诺环素和哌拉西林/他唑巴坦对广泛耐药鲍曼不动杆菌多数表现为无关作用和拮抗作用，体外联合抑菌作用较差；而双黄连与头孢哌酮/舒巴坦联合应用体外抑菌作用较好。

[关键词] 广泛耐药鲍曼不动杆菌；部分抑菌浓度；双黄连粉针剂；抑菌效果

[中图分类号] R446.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2018）09（a）-0148-04

[Abstract] Objective To study antibacterial effect of Shuanghuanglian combined with minocycline and Piperacillin /Taz-obactam and Cefoperazone / Sulbactam on extensively drug-resistant Acinetobacter baumannii in vitro. Methods A total of 30 strains extensively drug-resistant Acinetobacter baumannii were collected from clinical specimens from October 2016 to June 2017 in Beijing University of Chinese Medicine Third Affiliated Hospital. The minimum inhibitory concentration （MIC） of Shuanghuanglian and minocycline， Piperacillin / Tazobactam， Cefoperazone / Sulbactam （Cefoperazone / Sulbactam） in 30 strains extensively drug-resistant Acinetobacter baumannii was tested by the broth dilution method， and the partial inhibitory concentration （FIC） index was calculated， and the combined bacteriostasis effect of Chinese and Western medicine was determined. Results The FIC index of Shuanghuanglian combined with minocycline： 0.5-1 accounted for 6.7%， >1-2 accounted for 63.3%， and >2 accounted for 30.0%； the FIC index of Shuanghuanglian combined with Piperacillin / Tazobactam： 0.5-1 accounted for 16.7%， >1-2 accounted for 83.3%； the FIC index of Shuanghuanglian combined with Cefoperazone / Sulbactam： ≤ 0.5 accounted for 23.3%， 0.5-1 accounted for 73.3%， >1-2 accounted for 3.3%. Conclusion Shuanghuanglian combined with minocycline and Piperacillin / Tazobactam has a non-independent and antagonistic effect on the extensively drug-resistant Acinetobacter baumannii， and the combined antibacterial effect in vitro is poor. The combined antibacterial effect of Shuanghuanglian combined with Cefoperazone / Sulbactam is better.

[Key words] Extensively drug-resistant Acinetobacter baumannii； Fractional inhibitory concentration； Shuanghuanglian powder injection； Antibacterial effect

鮑曼不动杆菌属于条件致病菌广泛存在于自然界、医院环境及人体皮肤等部位。近年来，全国细菌耐药监测结果显示，鲍曼不动杆菌耐药率呈上升趋势[1-3]。本次体外抑菌试验选用的双黄连粉针剂为临床常用中药制剂。有研究表明，双黄连粉针剂具有较好的抗菌效果[4-5]；头孢哌酮/舒巴坦和哌拉西林/他唑巴坦都是临床常用抗生素，多用于鲍曼不动杆菌及其他革兰阴性杆菌抗感染治疗；目前，米诺环素在北京中医药大学第三附属医院（以下简称“我院”）及全国细菌耐药检测数据显示，鲍曼不动杆菌对其耐药率较低[1-3]。

本次试验通过稀释法测定药物单独以及联合应用对30株试验菌的MIC，绘制药物单用和联用MIC分布图，计算联合用药部分抑菌浓度（FIC）指数，分析并比较双黄连与抗生素的联合抑菌效果，为广泛耐药鲍曼不动杆菌抗感染治疗提供新的思路。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器

1.1.1 标本来源 试验菌株分离自我院临床痰液和尿液标本（采集日期2016年10月25日～2017年6月23日，排除同一患者重复株），试验菌株均通过BD Phoenix -100微生物自动鉴定药敏分析仪鉴定，药敏结果遵照CLSI M100-S26执行，选出鲍曼不动杆菌广泛耐药株。大肠埃希菌ATCC25922作为质控菌。

1.1.2 培养基 M-H肉汤培养基、血平板、麦康凯平板、M-H琼脂平板。

1.1.3 试验用药 双黄连粉针剂（哈药集团中药二厂，批号：1508110）、盐酸米诺环素胶囊（惠氏制药有限公司，批号：M33252）、哌拉西林钠/他唑巴坦钠（石药集团中诺药业有限公司，批号：150902）、头孢哌酮/舒巴坦（2∶1，美国辉瑞制药有限公司，批号：1539364）。

1.1.4 仪器设备 微生物自动鉴定药敏分析仪、麦氏浊度仪、电热恒温培养箱、微量加样器、玻璃试管。

1.2 方法

1.2.1 菌液配制 将30株试验菌分别配制成0.5麦氏比浊的菌液，再稀释10倍作为试验菌液备用。

1.2.2 MIC测定 采用倍比稀释法分别将药物用MH肉汤配制如下：双黄连由高到低浓度是200.00～3.12 mg/mL，米诺环素由高到低浓度是64～1 μg/mL、哌拉西林/他唑巴坦和头孢哌酮/舒巴坦由高到低浓度是512～8 μg/mL，取上述各浓度药物1 mL分别加入30组试管，每管加入50 μL配制好的试验菌液，35℃、24 h培养，测定各药物对30株菌的MIC。

1.2.3 联合用药试验 根据30株试验菌的MIC结果，分别取2倍MIC为最高稀释浓度，按倍比稀释法配制各药物10个稀释浓度，将双黄连与三种不同抗生素两两组合，35℃培养24 h，记录最佳组合效应时两药联用时各自的MIC值，计算FIC指数。

1.2.4 FIC结果计算及判读 FIC指数=联合应用时甲药的MIC/单独用药时甲药的MIC+联合应用时乙药的MIC/单独用药时乙药的MIC。FIC指数判读标准：FIC≤0.5为两药协同作用；0.52为拮抗作用。

2 结果

2.1 药物单独应用以及联合应用MIC结果

药物单独应用以及联合应用对30株试验菌的MIC值范围、MIC50、MIC90见表1～3。从表中可以看出，双黄连联合用药以后，头孢哌酮/舒巴坦组MIC值范围、MIC50、MIC90与单用相比明显降低，米诺环素和哌拉西林/他唑巴坦组联用后变化不显著。

2.2 药物单用以及联合应用MIC分布图

双黄连与米诺环素、哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦单用以及联合应用MIC分布见图1。结果显示，双黄连与米诺环素、哌拉西林/他唑巴坦联合后，各自的MIC分布均较单用时略有左移，MIC分布峰值与单用比较没有变化。双黄连与头孢哌酮/舒巴坦联合，MIC分布较单用明显左移，双黄连的MIC分布峰值由单用的12.50 mg/mL降至6.25 mg/mL，头孢哌酮/舒巴坦的MIC分布峰值由单用的256.00 μg/mL降低为64.00 μg/mL。

2.3 FIC指数分布

双黄连与米诺环素、哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦联合应用FIC指数分布。见表4。双黄连和米诺环素联用FIC指数：0.5～1占6.7%、>1～2占63.3%、>2占30%；双黄连和哌拉西林/他唑巴坦联用FIC指数：0.5～1占16.7%、> 1～2占83.3%；双黄连和头孢哌酮/舒巴坦联用FIC指数：≤ 0.5占23.3%、0.5～1占73.3%、> 1～2占3.3%。

3 讨论

鲍曼不动杆菌耐药机制极其复杂[6-7]，其引起的临床感染越来越受到医护人员的重视。《鲍曼不动杆菌感染诊治与防控专家共识》中指出：耐药鲍曼不动杆菌根据药敏结果可采用联合两种或两种以上抗生素进行治疗[8]。临床上对耐药鲍曼不动杆菌感染治疗也常采用联合用药[9]。

双黄连粉针剂为临床常用中药制剂，具有清热解毒等功效。有研究表明，双黄连制剂具有广谱的杀菌作用[10-12]。雙黄连联合抗生素使用越来越受到关注，张伟等[13]将双黄连与氯唑西林钠联合使用，表现出对金黄色葡萄球菌耐药菌株有较好的抗菌效果。徐海瑛等[14]研究发现，双黄连口服液和庆大霉素联合应用对金黄色葡菌球菌有相加作用。本次试验药物单用以及联合应用MIC分布结果显示：双黄连联合米诺环素、哌拉西林/他唑巴坦，MIC分布均较单用时略有降低，MIC分布峰值与单用比较没有变化；双黄连与头孢哌酮/舒巴坦联合，MIC分布较单用明显降低，MIC分布峰值也明显降低。双黄连与米诺环素联合应用的FIC指数结果以无关和拮抗作用为主，无协同作用；双黄连与哌拉西林/他唑巴坦联合应用的FIC指数结果以无关为主；双黄连与头孢哌酮/舒巴坦联合应用的FIC指数结果以相加和协同作用为主，无拮抗作用。哌拉西林/他唑巴坦是临床常用抗生素，米诺环素和头孢哌酮/舒巴坦在我院及全国细菌耐药检测数据显示对鲍曼不动杆菌耐药率较低。本次试验结果显示，双黄连与哌拉西林/他唑巴坦和米诺环素联合抑菌效果差；而双黄连与头孢哌酮/舒巴坦体外联合抑菌效果较好。研究表明[15-20]舒巴坦具有较好的抗菌活性，本次试验结果也提示双黄连与头孢哌酮/舒巴坦联合应用优于其他抗生素的抑菌效果。中西药联合应用抑菌机制尚不明确，可能与抑制外排泵等[21-22]因素有关。本次试验只选取30株我院临床分离菌，并且为体外抑菌试验，而体内联合用药的效果有待进一步临床研究。

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（收稿日期：2017-11-28 本文编辑：任 念）