党参水提物的通便作用研究

陈 亮，阚君陶，田 峰，韩 强，李敏杰，瞿晶菁，樊柏林，杜 军

(1 安利(中国)研发中心有限公司，上海 201203；2 应用毒理湖北省重点实验室，武汉 430079；3 湖北省疾病预防与控制研究中心，武汉 430079)

近年来研究报道，具有泻下功能的以蒽醌和大黄素为主要活性成分的传统中药长期使用后会有安全隐患[1-5]。党参是我国传统补益(补气)中药，具有补中益气、和脾胃、生津养血之功效[6]。现代药理学研究表明，党参具有增强免疫力[7]、调节保护胃肠道[8]、抗溃疡[9]、降血糖[10]以及抗炎抗氧化等[11]生物活性，但是对党参改善便秘的作用研究较少。

本文采用地芬诺酯灌胃造成小鼠便秘模型，考察党参水提物对便秘小鼠小肠推进和排便的影响，同时对实验小鼠肠道内五羟色胺(5-HT)和血管活性肠肽(VIP)的含量进行测定，推测党参辅助通便的可能机制。

1 材料和方法

1.1 实验动物及饲养环境

小肠推进实验和排便实验的动物为SPF级昆明种小鼠，来源于湖北省实验动物研究中心，生产许可证号分别为SCXK(鄂)2008—0005和SCXK(鄂)2015—0018，动物使用许可证号为SYXK(鄂)2012—0065。小鼠在SPF级动物实验室饲养，环境温度为20～26℃，湿度为40%～70%。

1.2 实验材料和试剂[12]

含5%的活性炭粉、10%阿拉伯胶墨汁的配制方法：准确称取阿拉伯树胶100g，加入800mL蒸馏水，加热煮沸至溶液呈透明状，再称取活性碳粉末50g加入上述溶液中，继续煮沸3次，溶液放凉后加蒸馏水定容到1 000mL，置4℃冰箱中保存，临用前摇匀。

党参，药材来源同已发表文章[12]。党参提取物制备工艺为药材粉碎，按料液比1∶6加入纯水，95～100℃水浴加热提取2次，每次1.5h，水提液过滤，合并，浓缩冻干，最终药材和提取物的提取比约为2.5∶1。分别取党参水提物16 667、8 333、4 167mg，用蒸馏水溶解并定容至100mL，供小肠推进实验和排便实验1～7d灌胃使用；另外，分别取党参水提物3 333、1 667、833mg，用含5%的活性炭粉、10%阿拉伯胶墨汁溶解并定容至20mL，供小肠推进实验第8天使用。

复方地芬诺酯片，广西河丰药业有限责任公司，生产批号为 130401。分别取复方地芬诺酯片25、50mg，研钵研碎后加入0.5%羧甲基纤维素钠溶液溶解稀释至100mL，分别供小肠推进实验模型和排便实验模型使用，临用前配制。

小肠推进实验中，小鼠5羟色胺(5-HT)酶联免疫分析试剂盒批号为201411-201505，小鼠血管活性肠肽(VIP)酶联免疫分析试剂盒批号为201412-201506；所有试剂盒均购自上海酶联生物科技有限公司。

1.3 实验方法

1.3.1剂量与分组 小肠推进和排便实验分开但同时进行，每个实验均分为阴性对照组(Negative Control，灌胃给予纯水)、模型对照组(Positive Control，灌胃给予复方地芬诺酯)、党参水提物高剂量组3 333mg/kg(High Dose)、党参水提物中剂量组1 667mg/kg (Medium Dose)、党参水提物低剂量组833mg/kg(Low Dose)，每组动物数量12只。每组实验小鼠均按0.20mL/10g BW的容量灌胃给予对应试剂，连续灌胃7d后开始小肠推进实验或排便功能实验。

1.3.2小肠推进实验 按照1.3.1分组，不同组小鼠连续灌胃7d给予不同试剂，禁食不禁水16h，(第8天)模型对照组和党参各剂量组按5mg/kg剂量灌胃给予复方地芬诺酯溶液。30min后，党参各剂量组分别给予等浓度的含墨汁溶液，阴性对照组和模型对照组只按照0.2mL/10g BW的容量给予墨汁灌胃。25min后，所有小鼠脱颈处死，打开腹腔小心分离肠系膜，剪取幽门(上端)至回盲部(下端)的肠管，然后置于托盘上轻轻将小肠拉成直线，直尺测量幽门括约肌至小肠回盲部墨汁推进的长度(远端)及小肠总长度，计算墨汁推进率P(%)；另外，取1cm长的结肠组织，准确称重后立即置液氮冻存，用于后期5-HT和VIP含量测定。

小肠推进功能以墨汁推进率P(%)表示：

{[幽门到墨汁推进远端间的距离(cm)]/[小肠全长距离(cm)]} ×100%

1.3.3排便实验 测定首粒排黑便时间、粪便粒数和粪便重量。按1.3.1分组后，小鼠连续灌胃7d，之后禁食不禁水16h，(第8天)模型对照组和党参各剂量组按10mg/kg剂量灌胃给予复方地芬诺酯溶液。30min后，党参各剂量组分别给予等浓度的含墨汁溶液，阴性对照组和模型对照组只按照0.2mL/10g·BW的容量给予墨汁灌胃。完成后将小鼠进行单笼喂养，恢复正常饮水进食，开始计时，记录每只小鼠首次排黑便时间、5h内排黑便粒数及粪便总重量。

1.3.4肠组织中5-HT、VIP含量的测定 取液氮冻存的结肠组织在保持低温条件下，按1∶9比例加入生理盐水制备匀浆，离心(3 500r/min)20min，取上清液于-20℃下保存。5-HT、VIP的检测方法及计算方法均参照上海酶联生物科技有限公司的试剂盒说明。

1.4 统计分析

2 结果与分析

2.1 党参水提物对便秘小鼠体重的影响

如表1、表2所示，两个动物模型中模型对照组和党参不同剂量组小鼠的终体重与阴性对照组进行比较，结果均无显著性差异(P>0.05)，说明地芬诺酯和党参水提物对模型小鼠体重无影响。

表1 小肠推进实验中各组小鼠体重

注：与阴性对照组比较，P>0.05

表2 排便实验中各组小鼠体重的影响

注：与阴性对照组比较，P>0.05

2.2 小鼠小肠推进实验结果

图1、表3可以发现，与阴性对照组比较，给予5mg/kg剂量地芬诺酯的模型对照组中小鼠墨汁推进距离明显降低(P<0.01)，表明该剂量的地芬诺酯能够成功诱导小鼠小肠蠕动抑制模型。与模型对照组比较，党参水提物3个剂量组中小鼠平均墨汁推进率都明显增加，有显著统计学差异(P<0.01)，且推进率同没有给予地芬诺酯的阴性对照组接近，说明党参水提物能够逆转地芬诺酯导致的小鼠小肠蠕动减缓的情况，提示其可能具有促进小肠蠕动的功能(图2)。

表3 不同剂量党参水提物对小鼠小肠推进的影响

注：与阴性对照组比较，#P>0.01；与模型对照组比较，**P<0.01

2.3 结肠组织中5-HT、VIP含量测定

如图3所示，与阴性对照组比较，模型对照组小鼠结肠组织中的5-HT含量降低、VIP含量升高，并均有显著性差异(均P<0.01)，模型组实验结果与文献报道结果一致[13，18]。与模型对照组比较，党参水提物高剂量和低剂量组小鼠结肠组织中5-HT表达明显上升，VIP表达明显下降，其中高剂量组有非常显著差异(P<0.01)，低剂量组有显著性差异(P<0.05)，表明党参水提物对小肠蠕动的促进作用可能与调节5-HT和VIP的水平有关。

2.4 小鼠排便实验结果

与阴性对照组比较，给予10mg/kg复方地芬诺酯的模型对照组便秘小鼠首粒排黑便时间明显延长，5h内排黑便总重量明显减少(P<0.01)，说明小鼠出现明显便秘症状，提示便秘模型成立。受试组与模型对照组比较，不同剂量的党参水提物对便秘小鼠的首粒排黑便时间、排黑便粒数以及黑便重量均有一定的改善作用，其中高剂量组能显著缩短首粒排黑便的时间(P<0.01)，明显增加5h内排黑便总重量(P<0.05)；低剂量组能明显增加便秘小鼠5h内排黑便总重量(P<0.05)。结果提示，党参水提物尤其是高剂量情况下对便秘小鼠的排便具有改善作用。

图1 小鼠小肠推进实验结果注：实验结果按照进行转化，P为推进率(%)。与阴性对照组比较，#P<0.01；与模型对照组比较，**P<0.01

图2 党参水提物对小鼠结肠组织中5-HT、VIP含量的影响注：与阴性对照组比较，#P<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01

图3 党参水提物对小鼠首粒排黑便时间、排黑便粒数和黑便重量的影响注：与阴性对照组比较，#P<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05、**P<0.01

3 讨论

研究表明，党参健脾养胃的功能可以促进实验小鼠胃肠运动，其主要活性部位可能为党参多糖[13-14]。本实验依照CFDA通便功能检测方法考察了党参水提物(多糖含量为10%～15%)对小肠墨汁推进作用，并首次研究报道其对便秘小鼠排便功能的影响，考察了首粒排便时间、5 h粪便粒数和粪便总重量等指标。结果表明，党参水提物高、中、低(3 333～833mg/kg)3个剂量均具有小肠推进功能，其中高剂量和低剂量党参水提物还能够缩短排便功能中首粒黑便时间，增加排便粒数和重量。

研究表明，5-HT是胃肠道运动和分泌功能的重要神经递质[15]。95%的5-HT来源于肠道黏膜层的嗜铬细胞，肠黏膜嗜咯细胞释放5-HT，能刺激肠吸收水分从而促进肠蠕动，参与胃肠运动和分泌功能。本实验中，复方地芬诺酯造模组5-HT含量明显低于阴性对照组，该结果与文献报道一致[16]，党参水提物高、中、低3个剂量组与模型组比较，实验小鼠肠道内5-HT水平有上升趋势，其中高剂量和低剂量组有显著统计学差异(P<0.01或P<0.05)，表明党参水提物可能具有刺激肠道黏膜层的嗜铬细胞分泌5-HT的作用，升高肠道内5-HT的水平，进而促进肠蠕动，因此党参水提物的小肠推进功能可能与调节肠道内5-HT水平有关。

VIP的主要作用是增强胃肠粘膜的腺体分泌、松弛胃肠道平滑肌、抑制胃肠蠕动[16-17]，与慢传输型便秘的发病机制相关[18-19]，通过抑制胃肠道平滑肌收缩及肠肌紧张性，减少胃肠粘膜的分泌活动，从而抑制肠蠕动导致慢传输型便秘。李勇等[20]发现，VIP在复方地芬诺酯小鼠便秘模型中含量要明显高于阴性对照组，认为VIP含量的升高可能是便秘早期肠神经系统的一种代偿性反应。本研究采用复方地芬诺酯诱导了小鼠便秘模型，VIP含量测定结果发现，模型组VIP含量与阴性对照组比较明显升高了，而给予能促进肠蠕动、改善便秘症状的党参水提物组，VIP的含量明显下降(高剂量、低剂量党参水提物组与模型组相比较，VIP含量显著下降，接近于阴性对照组水平)。本实验观察到的现象与文献报道一致[20]，一方面说明党参水提物可促进小肠运动和排便，另一方面也证明VIP含量升高是便秘早期长神经的一种代尝性反应。

4 结论

党参水提物3个剂量组均具有明显的小肠推进功能，其中高剂量和低剂量能够显著增加5-HT水平和降低VIP水平，党参水提物的促肠推进作用机制可能与调节5-HT水平有关；排便实验中，高剂量党参水提物能够显著改善便秘小鼠的排便功能(缩短首粒黑便时间，增加黑便总重量)，而低剂量和中剂量对排便功能的3个指标有改善的趋势但部分指标无显著性差异。结合两个模型的实验结果，提示党参水提物具有潜在的通便功能。作为药食同源来源的原料，党参可以作为通便、改善胃肠道保健品的原料进一步开发。◇