502胶熏显指纹对DNA提取的影响

许 勇 马培玉

1.濮阳市公安局刑侦支队刑事科学技术研究所，河南 濮阳 457000；2.焦作市公安局刑侦支队刑事科学技术研究所，河南 焦作 454002

近年来，随着生化技术的高速发展，DNA检验技术已经相当灵敏，最低检出线可以达到pg级水平，在案件侦破中的应用越来越广泛，可以检验的检材种类也越来越多，特别是接触性的微量DNA检材。在某些重点案件特别是命案凶器等重要检材的处理过程中，我们经常会遇到这样的问题：物证表面的指纹印迹(属于接触性微量检材)，若是直接擦拭提取DNA则对指纹造成了破坏，而使用502胶熏显法对指纹进行显现又担心会对DNA的检验造成影响。那么502胶熏显到底会对DNA提取造成怎样的影响？这种问题如何解决?本文通过实验对这一问题进行深入分析探讨。

一、材料和方法

(一)样本

选10个随机个体，年龄段在20-50岁之间(犯罪高危年龄段)，将手洗净擦干，十分钟后在载玻片上摁压两个右手拇指指纹，分别标记为A、B、C、D、E、F、G、H、I、J。

(二)仪器试剂

使用仪器：德国eppendorp公司Centrifuge5424高速离心机、中国黑马公司恒温金属浴、美国AB公司AUTOMATE核酸提取仪、美国AB公司9700A型PCR扩增仪、美国AB公司7500 PCR定量仪、美国AB公司3500xl测序仪。

配套试剂：美国AB公司Quantifiler○RDuo试剂盒、美国AB公司ID-plus扩增试剂盒。

(三)实验方法

第一步用植绒拭子擦拭载玻片上的一枚指纹，将棉签头剪下置于1.5ml离心管内，加入200ul裂解液(BTA)，20ul的PK溶液。56℃震荡保温1小时，离心去载体，取上清液，使用美国AB公司AUTOMATE核酸提取仪提纯DNA；将剩下的另一枚指纹送至痕迹检验实验室进行502熏显。用植绒拭子擦拭熏显后的指纹，之后步骤同第一步。两组溶液标记为熏显前及熏显后，分别进行PCR实时定量操作与PCR扩增、荧光测序。

二、实验结果

(一)电泳分析结果

熏显前及熏显后两组样本的DNA溶液经在美国AB公司3500xl测序仪电泳分析均获得ID-plus体系的15个STR基因分型，峰高、域值在熏显前后无明显差异。

(二)PCR定量结果

项目编号定量结果(ng/ml)ABCDE熏显前0.00250.06500.00720.02450.0032熏显后0.00400.05130.00650.04060.0022

项目编号定量结果(ng/ml)FGHIJ熏显前0.00380.00260.05720.04150.0067熏显后0.00310.00350.04650.03780.0044

三、讨论

首先本实验通过中国实验室国家认可委员会(CNAL)认证，所有实验操作均符合规范且具有可靠性与权威性，从本次实验结果来看，排除实验中的不可控因素(指纹分割的不均匀性)及定量操作中的误差因素等，其他影响实验结果的因素均在可控范围之内。其次熏显前后的检验结果数值相差<0.01ng/ml，对PCR扩增及电泳分析影响很小可忽略不计，由此得出结论：一是常用的502胶熏显法对接触性的微量DNA检材不存在破坏作用；二是对法医DNA检验普遍采用的PCR扩增试剂，电泳测序影响不大。

分析其原因：一是502胶熏显法是一种物理显现方法，通过对502胶加热熏蒸，使502胶蒸汽对指纹纹线进行包裹凝固从而达到显现指纹的目的，其过程并没有对指纹上的DNA进行破坏，所以使继续对熏显过的指纹进行DNA检验成为可能。二是502胶的主要成分为α-氰基丙烯酸乙酯，加入增粘剂、稳定剂增韧剂、阻聚剂等，通过一定反应形成的单组分瞬间固化剂[1]，和空气中微量水催化下发生加聚反应，迅速固化而将被粘物粘牢。其化学成分为树脂，在高温下可以由有机溶剂溶解，从而释放出被胶包裹的人体细胞DNA，进行PCR反应，最终电泳测序，检出DNA结果。三是对PCR扩增有显著影响的抑制剂有重金属离子和某些有机溶剂如：苯酚，EDTA，尿素等。而502胶不含有上述成分，所以对PCR扩增没有显著影响。四是本实验采用的是磁珠法提取DNA，所用磁珠对DNA特异性吸附，通过配套洗脱液再从磁珠中释放出来，最终得到相对纯度较高的DNA样本，避免了502胶残留成分对电泳测序的影响。

综上所述，502熏显过程并不会对指纹上DNA检验造成影响，只是要做好物证保管工作，另外在熏显过程中也要避免外源污染。