外周血游离胎儿DNA检测联合唐氏筛查在妊娠中期唐氏综合征胎儿筛查中的应用价值

吕 书 博

(郑州大学第三附属医院新生儿疾病筛查中心 郑州 450003)

唐氏综合征即21-三体综合征，是一种较为常见的染色体异常疾病，发病率为活婴的1/600～1/800，居5000多种遗传病发病率首位[1]。多伴有先天畸形，影响婴幼儿智力发育，威胁其生命安全。目前该病尚无有效治疗措施，早发现并及时终止妊娠为避免唐氏综合征发生的主要手段。唐氏筛查为目前应用最广泛且最成熟的一种筛查手段，具有一定检出率，但该方法筛查准确度不高，在一定程度上增加了流产发生风险。有学者指出外周血游离胎儿DNA检测可明确染色体疾病的发生情况，对染色体异常具有较高检出率，且该检查方法无创、安全，可减轻孕妇的心理负担[2]。基于此本研究将外周血游离胎儿DNA检测与唐氏筛查联合用于妊娠中期孕妇产前筛查中，探讨其筛查结果及意义。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2015年9月～2017年4月在我院进行产前检查的孕中期孕妇1430例，均为单胎妊娠且均无饮酒吸烟史，排除合并糖尿病、肝肾功能衰竭、心脏病等疾病者或接受干细胞治疗、移植手术者，年龄21～44岁，平均年龄(27.80±5.30)岁；孕周15～20周，平均孕周(17.40±2.10)周；孕次1～3次，平均孕次(1.50±0.49)次。本研究经医院伦理委员会审查批准。

1.2 方法

以采血管采集孕妇10ml外周血，于4℃温度下以1600r/min转速离心处理10min(4 h内务必分离血清)，离心后取上清液分装至多个离心管中(1.5ml)，以时间分辨免疫荧光法测定血清游离β-人绒毛膜促性腺激素(F-βhCG)、甲胎蛋白(AFP)、血清相关蛋白-A(PAPP-A)、游离雌三醇(μE3)，检查结果以中倍数(MOM)表示，结合孕妇体重、年龄、是否有过21-三体不良孕史等因素，计算唐氏风险率，1∶270为唐氏高危切割值。筛查出的高危孕妇进行遗传咨询，实施外周血游离胎儿DNA检测，抽取10 ml外周血，置入专用采血管(Cell-Free DNA BCTTM)混匀，采用DNA提取试剂盒(德国Qiagen公司)进行DNA提取，采用缓冲剂(50 μL)洗脱DNA标本，进行羊膜腔穿刺羊水细胞染色体核型分析诊断，确诊异常者终止妊娠。将泰莱时间分辨免疫荧光测定仪作为中期血清检测仪，游离胎儿DNA血清采用美国Illumina公司大规模平行测序仪测定，试剂购自广州丰华公司。

2 结果

2.1 唐氏筛查结果

1430例孕中期孕妇经唐氏筛查，共筛查出106例高危孕妇，筛查阳性率为7.41%(106/1430)。

2.2 外周血游离胎儿DNA检测

以胎儿染色体核型分析结果为金标准，106例高危孕中期孕妇进行外周血游离胎儿DNA检测发现染色体数目异常10例，4例结构异常，对14例异常孕妇进行羊水染色体核型分析，发现与染色体核型分析结果相符，染色体核型分析结果显示21-三体综合征2例、18-三体综合征1例、13-三体综合征1例，外周血游离胎儿DNA检测结果显示21-三体综合征2例、18-三体综合征1例、13-三体综合征1例，与染色体核型分析结果符合率均为100.00%，见表1。

表1 外周血游离胎儿DNA检测结果与染色体核型分析结果[n(%)]

类别染色体核型分析阳性外周血游离胎儿DNA检测高风险符合率(%)21-三体综合征22100.0018-三体综合征11100.0013-三体综合征11100.00合计44100.00

3 讨论

唐氏筛查是指羊水穿刺诊断或血清学筛查，其主要是针对孕妇血液生化筛查及宫颈管脱落细胞检查，并对高风险孕妇进行羊水、绒毛、脐血抽取，实施侵入性产前诊断、终止妊娠，为高龄孕妇必选产检项目之一。本研究发现对妊娠中期孕妇进行唐氏筛查，筛查阳性率为7.41%，证实了其对大样本筛查的有效性及可行性。但其亦是一种侵入性操作，易引发一系列并发症，且有数据显示该筛查方法所致流产率高达1%，存在一定局限性[3]。

有研究指出人体外周血中有微量游离核酸存在，而胎盘滋养层浸润具备时间及空间特性，宫内胎儿DNA可以游离状态进入母体外周血循环中，据统计母体血浆总游离DNA中高达10%以上为游离胎儿DNA，且孕5周即可检出[4～5]。此外胎儿游离DNA分子长度多不足200 bp，比母体DNA短，易于发现，因此临床可利用孕妇血中游离的胎儿DNA进行检测。但外周血游离胎儿DNA检测要求检测人员具备较高水平的分析技术，且检查费用相对高昂，短期内难以应用到大样本筛查中，而唐氏筛查具有费用低廉、操作简单等优势，可弥补外周血游离胎儿DNA检测的不足，二者结合不仅可降低检查费用，且可提高诊断准确率。本研究对唐氏筛查出的106例高危孕妇进行外周血游离胎儿DNA检测，结果发现其检查结果与染色体核型分析结果符合率为100.00%，说明外周血游离胎儿DNA检测辅助唐氏筛查，有助于发现唐氏综合征胎儿，诊断准确率高。此外外周血游离胎儿DNA检测通过孕妇血对胎儿进行无创诊断，比直接检测胎儿细胞更为安全，且可重复性好，无需进行细胞培养，在短时间内即可获得准确的测定结果，具有高通量、高准确率、无创等优势。

综上可知，外周血游离胎儿DNA检测联合唐氏筛查应用于妊娠中期唐氏综合征胎儿筛查中，诊断符合率高，可作为临床筛查唐氏综合征胎儿、决定是否终止妊娠的依据。