miRNA-124在上皮性卵巢癌组织中的表达及临床意义

杨佩浓，虞义建，徐伟铭，张晓婷

(1.浙江省台州医院病理科，浙江 台州 317000；2.台州恩泽医疗中心(集团)恩泽医院病理科，浙江 台州 318050)

MicroRNA(miRNA)是内源性非编码RNA分子，由18～22个核苷酸组成，转录后调节基因的表达[1]。卵巢癌是妇科常见的肿瘤，是肿瘤致女性死亡的重要原因之一。我国卵巢癌的发病率约为4.91/10万，且有逐年上升的趋势[2]。近年来，越来越多的研究表明，miRNA与卵巢癌的发病和发展密切相关[3-5]，miRNA-124是近年来研究较多的miRNA之一，其在肝癌、胃癌、大肠癌、口腔癌和宫颈癌中表达水平下降，发挥着类似抑癌基因的作用[6-8]。然而，miRNA-124在卵巢癌中的研究较少，本研究采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链式反应(real-time reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR)检测上皮性卵巢癌组织中miRNA-124的表达水平，分析了其与临床病理特征的相关性，探讨了其在卵巢癌发生和发展中的作用，现将结果报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料

2013年2月至2014年11月在浙江省台州医院行手术治疗的卵巢癌患者85例，所有患者术前均未接受过放化疗，术后经过病理检查以明确诊断，排除因保存不当而导致RNA降解的标本。85例患者中，年龄35～71岁，平均(56.32±5.67)岁。按照国际妇产科联盟 (International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO)的标准进行分期[9]，其中Ⅰ期11例，占12.94%；Ⅱ期23例，占27.06%；Ⅲ期44例，占51.76%；Ⅳ期7例，占8.23%。病例分级为G1期16例，占18.82%；G2期45例，占52.94%；G3期24例，占28.24%。另外，选取同期与卵巢癌患者年龄匹配的良性上皮卵巢肿瘤组织35例和正常卵巢组织45例作为对照，所有标准本均于液氮中保存。本研究已经过我院伦理委员会批准，患者均知情同意。

1.2 miRNA-124的定量检测

采用trizol法提取癌组织中的总RNA，使用反转录试剂盒(新海基因有限公司，货号：D1801)将RNA反转录为cDNA第一链，在以cDNA为模板，使用RT-PCR检测试剂盒(上海信裕生物科技有限公司，货号：131042-25)检测miRNA-124的表达水平。miRNA-124上游引物序列为5′-GCTAAGGC￣ACGCGGTG-3′，下游引物序列为5′-GTGCA￣GGGTCCGAGGT-3′；内参照U6上游引物序列为5′-CTCGCTTCGGCAGCACATATACT-3′，下游引物序列为5′-ACGCTTCACGAATTTGC￣GTGTC-3′(引物由天根生化科技有限公司设计)。PCR反应条件：第1步，95℃ 30s；第2步，95℃5s、60℃20s，共40个循环。PCR扩增结束后，绘制熔解曲线，以2-ΔΔCt值表示miRNA-124的相对表达水平。

1.3随访

手术治疗后对患者进行随访，随访时间至2017年11月6日。采取门诊随访和电话随访相结合，观察患者的总体生存率和中位生存时间。

1.4统计学方法

2结果

2.1 miRNA-124在卵巢癌、良性卵巢肿瘤和正常组织中的表达量差异

卵巢癌组织中miRNA-124相对表达量为2.35±1.11，良性卵巢肿瘤组织中的表达量为5.13±2.01，正常组织中为6.29±2.12。采用单因素方差分析发现，三组间的比较有明显差异(F=8.371，P<0.001)。卵巢癌组织中miRNA-124相对表达量明显低于良性卵巢肿瘤组织和正常组织(t值分别为7.123、11.650，均P<0.001)；良性卵巢肿瘤组织中miRNA-124相对表达量低于正常组织(t=2.499，P=0.007,见图1。

注：*与正常组织组比较，P<0.05；#与良性卵巢组织组比较，P<0.05。

图1 miRNA的相对表达量

Fig.1 Relative expression of miRNA

2.2 miRNA-124的相对表达量与临床特征的关系

临床分期和组织分级越高，miRNA的相对表达量越低(P<0.05)；有淋巴结转移者，miRNA的相对表达量越低(P<0.05)；组织学类型与miRNA的相对表达量无关(P>0.05)，见表1。

2.3 miRNA的相对表达量与生存期的相关性

如图2所示，高表达组的总生存率明显高于低表达组，差异有统计学意义(χ2=7.824，P=0.008)。低表达组中位生存期为(7.91±1.52)个月，95%CI：3.21～10.73；高表达组中位生存时间为(14.53±6.74)个月，95%CI：11.0～28.4，高表达组中位生存时间明显较低表达量组高，差异有统计学意义(t=6.053，P<0.001)。低表达组总生存时间为(28.67±5.01)个月，95%CI：2.45～9.24；高表达组总生存时间为(32.81±4.27)个月, 95%CI：2.01～6.69，高表达组总生存时间高于低表达组，差异有统计学意义(t=4.112，P<0.001)。

图2生存曲线

Fig. 2 Survival curve

3讨论

3.1 miRNA-124的生物学作用

miRNA在机体内发挥着重要的生物学功能[10]。近年来研究发现，miRNA在肿瘤的发生和发展中起到重要作用，并且对肿瘤的诊断和预后的判断也有意义[11]。作为新型的分子标志物，miRNA可用于恶性肿瘤的早期诊断和预后预测，其具有广阔的应用前景[12-14]。既往研究发现，miRNA-124是神经系统发育过程中必不可少的miRNA之一[15-17]，miRNA-124在多种肿瘤组织中的表达下降，并且对细胞的增值、分化、凋亡、迁移和侵袭起着重要作用[6-7,18]。舒锦等[19]发现卵巢癌组织中的miRNA-124表达量下降，在体外实验中，卵巢癌 SKOV3 细胞中 miR-124 过表达可明显抑制细胞的增殖、 迁移和侵袭并诱导细胞凋亡。

3.2 miRNA-124在上皮性卵巢癌组织中的表达及意义

miRNA可能为致癌基因，也可能是抑癌基因，可通过多个环节调控肿瘤的发生和发展，对肿瘤组织中miRNA表达量的检测对疾病的早期诊断和治疗有重要意义。本组研究中，临床分期和组织分级越高，miRNA的相对表达量越低；有淋巴结转移者，miRNA的相对表达量越低；组织学类型与miRNA的相对表达量无关。miRNA高表达组的总生存率明显高于低表达组(P<0.05)，且高表达量组中位生存时间明显较低表达量组高(P<0.05)。上述研究结果表明，miRNA-124的相对表达量与肿瘤的预后和转归有关。

综上，本研究结果表明，上皮性卵巢癌组织中miRNA-124的相对表达量降低，提示其可能在卵巢癌的发病机制中起到抑癌基因的作用，另外，miRNA-124的表达量与卵巢癌的进展和转归有关。本研究的局限性在于样本量较小，且为单中心研究，miRNA-124的具体生物学机制需要进一步研究。