氧化苦参碱缓释片抗血栓作用的研究

刘 芬,吕文伟,陈 霞

(吉林大学基础医学院,吉林 长春130021)

氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)是从豆科槐属植物苦参(Sophora flavescens Ait.)等中提取的生物碱，具有四环的喹嗪啶类结构。本课题组前期实验研究证明，氧化苦参碱(OMT)具有抗炎、镇痛、降压、抗心律失常等多种药理作用[1-3]。另据研究报道，氧化苦参碱体内半衰期较短，生物利用度低[4]。有学者认为是由于氧化苦参碱水溶性较强，难于通过生物膜的原因[5]。因此，氧化苦参碱的制剂已严重限制了其临床应用。为提高生物利用度，延缓药物在人体内释放的速率、降低人体对药物成分吸收速率的作用。本实验用氧化苦参碱与氧化苦参碱缓释片比较抗血栓、改善血液流变性指标的作用，观察氧化苦参碱缓释制的作用效果。

1 材料与方法

1.1 动物

Wister大鼠，雌雄各半，体重230-250 g，由长春市亿斯实验动物技术有限公司提供，合格证号：SCXK-吉2015-0001。

1.2 药品

氧化苦参碱(质量分数>99%)，由宁夏紫荆花药业股份有限公司生产；0.9%生理盐水，批号：150624D9，哈尔滨三联药业股份有限公司生产；盐酸肾上腺素注射液，批号：4A09006，上海禾丰制药有限公司生产；水合氯醛，批号：20010712，上海化学试剂公司生产；二磷酸腺苷(ADP )，批号：990220，上海化学试剂公司生产；枸橼酸钠，批号：20100727，北京化工厂；磷酸缓冲液粉剂，批号：AR0030，博士德生物有限公司；肝素，批号：421F024；上海化学试剂厂。缓释片制备方法：氧化苦参碱40.0 g、羟丙甲纤维素30.0 g、丙烯酸树脂10.0 g、加入适量的90%乙醇水溶液，制软材50-60℃干燥，加人1%硬脂酸镁和3%乳糖混匀，压制100片即得氧化苦参碱缓释片。

1.3 仪器

半自动血液流变仪，型号，北京普利生生产，血液混匀仪，型号，HY-1，北京宏润达科技发展有限公司，小动物血栓形成仪，型号，YLS-14B，济南益延科技发展公司，全自动血小板凝聚仪，型号，LBY-NJ2，北京普利生生产，自动平衡离心机，型号，LDZ5-2，北京医用离心机生产。半自动凝血分析仪，型号，PUN-2048A,北京普朗新技术有限公司。

1.4 方法

1.4.1实验分组及给药

实验分为6组，每组20只。分组及给药剂量如下：模型组、正常对照组给予生理盐水，OMT对照组剂量为200.0 mg·kg-1，OMT缓释片剂量为50.0、100.0、200.0 mg·kg-1。按上述剂量灌胃给药，每日一次，连续给药7天。

1.4.2制备急性血瘀模型

除正常对照组外，其它5组动物末次灌胃给药1 h后每只大鼠sc注射2次0.1%盐酸肾上腺素，每次0.8 ml·kg-1，间隔4 h，中间进行一次冰水浴，温度保持0-2℃，浸泡5 min，大鼠禁食不禁水12 h。

1.4.3OMT缓释片对血瘀大鼠全血黏度、血浆黏度的测定

每组取10只大鼠，皮下注射10%水合氯醛3 ml·kg-1进行麻醉，在腹部正中剪开皮肤，于腹主动脉插管取血，1%肝素抗凝(血液与抗凝剂的体积比为9∶1),应用LBY-N6K半自动血液流变仪测定全血高切比黏度、低切比黏度及血浆黏度。

1.4.4OMT缓释片对血瘀大鼠体内、体外血栓的测定

每组取10只大鼠，用10%水合氯醛腹腔注射3 ml·kg-1进行麻醉，颈部常规手术，分离右侧颈总动脉约15 mm，避免损伤血管表面和周围神经影响结果，将剥离好的颈总动脉勾入红外线监测探头的沟槽内，记录因动脉官腔内血栓形成阻塞率达20%左右的时间，即血栓形成时间。实验结束后，腹主动脉取血1.8 ml注入内径4 mm硅胶管内，置入37℃血液混匀仪内，转动15 min，取出血栓，测量体外血栓长度。滤纸吸净血栓水分，称血栓湿量。将血栓放入干燥箱，60℃烘烤15 min，称重,即为血栓干重。

1.4.5OMT缓释片对血瘀模型大鼠血小板聚集率及PT、APTT的测定

从上述血瘀模型大鼠腹主动脉取动脉血3 ml，用3.28%枸橼酸钠抗凝(血液与抗凝剂的体积比为9∶1)，以1 500 rpm离心5 min，制备富血小板血浆(PRP)，其余血液3 000 rpm离心10 min，获取贫血小板血浆(PPP)，以PPP调零，在200 μl PRP中加入ADP， ADP诱导剂最终浓度为4 μM/L，应用LBY-NJ2全自动血小板凝聚仪测定血小板5 min内最大聚集率。取贫血小板血浆(PPP)，采用PUN-2048A型血小板凝血分析仪测定凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶原时间(APTT)。

1.4.6统计学处理

所有实验数据均以均数±标准差(x—±s)表示，均数比较用单因素方差分析(One-wauANDVA),以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 氧化苦参碱缓释片对全血和血浆黏度的影响

高切比黏度、低切比黏度、血浆黏度指标与正常对照组比较，模型组差异有显著性(P<0.05，P<0.01，P<0.01)，OMT200 mg·kg-1、OMT缓释片50.0、100.0、200.0 mg·kg-1可降低高切比黏度和低切比黏度。血浆黏度则表现在OMT缓释片100.0、200.0 mg·kg-1组，见表1。

表1 氧化苦参碱缓释片对全血和血浆黏度的影响(x—±s，n=10)

注：与正常对照组比较#P<0.05，##P<0.01;与模型组比较*P<0.05，**P<0.01

2.2 氧化苦参碱缓释片对体内、体外血栓的影响

OMT200 mg·kg-1、OMT缓释片100.0、200.0 mg·kg-1可明显降低血栓长度、湿重、干重质量(P<0.05，P<0.01)，模型组与正常对照组比较血栓形成时间差异有显著性(P<0.05，P<0.01，P<0.01)，说明模型成立。OMT200 mg·kg-1、OMT缓释片100.0、200.0 mg·kg-1组可明显延缓电刺激大鼠颈总动脉血栓的形成，与模型组比较有显著性差异(P<0.05，P<0.001)。见表2。

表2 氧化苦参碱缓释片对体外血栓、体内血栓形成时间的影响(x—±s，n=10)

注：与正常对照组比较 #P<0.05，##P<0.01；与模型组比较*P<0.05，**P<0.01

2.3 氧化苦参碱缓释片对血小板聚集率、PT、APTT的影响

模型组与正常对照组比较血小板最大聚集率差异有显著性(P<0.05，P<0.01)，OMT200 mg·kg-1、OMT缓释片100.0、200.0 mg·kg-1组与模型组比较降低血小板聚集率(P<0.05，P<0.01)。OMT200 mg·kg-1、OMT缓释片100.0、200.0 mg·kg-1组延长凝血酶原(PT)和活化部分凝血酶原(APTT)凝集时间。见表3。

表3 氧化苦参碱缓释片对血小板聚集率、PT、APTT的影响(x—±s，n=10)

注：与正常对照组比较#<0.05，##P<0.01；与模型组比较*P<0.05，**P<0.01

3 讨论

本课题组已对氧化苦参碱对大鼠局灶性脑缺血性损伤的保护作用进行了研究[6]。氧化苦参碱缓释片具体药理作用，尚未见报道。本研究观察氧化苦参碱缓释片抗血栓作用。以血栓和血液流变学相关指标为观察点，结果表明氧化苦参碱缓释片能够剂量依赖性改善皮下注射肾上腺素加冰水冷浴法所致的大鼠急性血瘀模型作用，延长凝血时间、体外血栓形成时间、降低血瘀大鼠血粘度、血小板聚集率、降低大鼠血栓干、湿重质量。目前许多研究表明，血管内皮细胞的损伤和血流状态的变化是血栓形成的重要原因[7]。由于红细胞处于聚集状态，在毛细血管中流动则显示全血低切黏度状态，如果红细胞处于分散状态，在大血管中流动则显示全血高切黏度状态。在体外血栓实验中，由于加热可使蛋白变形，血液凝固性增加，导致血栓形成[8]。本实验结果显示，与模型组比较，氧化苦参碱缓释片能够改善血液流变学相关指标，降低血栓形成。特别是氧化苦参碱缓释片100.0 mg·kg-1剂量组，在各个指标中作用均与氧化苦参碱200.0 mg·kg-1剂量组相同，提示氧化苦参碱缓释片具有用量小的特点，可有效的应用在临床抗血栓治疗。