乳源β-酪啡肽-7对老年小鼠肠黏膜氧化应激的影响

印虹，刘冀婕，杨丹，彭景

（扬州大学旅游烹饪学院，江苏扬州225127）

0 引 言

衰老是人类生活的一个自然生理过程，关于衰老的机理，以Harm an[1]提出的自由基学说最具有代表性。机体通过酶系统与非酶系统产生氧自由基，氧自由基通过生物膜中的多不饱和脂肪酸的过氧化引起细胞损伤，产生大量代谢产物丙二醛（m alondialdehyde，M DA），可引起细胞代谢及功能障碍，加速机体衰老。但机体存在直接清除自由基，抑制自由基的生成或是激活机体抗氧化体系的自由基清除剂。除此之外还有一些非酶抗氧化剂。

β-酪啡肽-7（β-Casom orphin-7，BCM-7）是一种来源于牛乳或人乳β-酪蛋白的小分子多肽，已有研究证实β-酪啡肽具有多种生物学功效[2,3]。在β-酪啡肽中，又以BCM-7和BCM-5的生物活性最强[4]。有研究表明糖尿病大鼠口服BCM-7可增加血浆胰岛素水平，降低胰高血糖素水平，提高超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的活性[5]。本研究以老年小鼠为模型，观察β-酪啡肽-7对老年小鼠小肠黏膜氧化应激的影响，为其进一步研究及开发利用乳源生物活性物质提供科学依据。

1 实 验

1.1 材料、动物与试剂

β-酪啡肽-7，干粉，-20℃保存，实验时以生理盐水配制成相应浓度的溶液，现用现配。

SPF级昆明小鼠，雄性，十一月龄40只（体质量53～69 g），二月龄10只（体质量39～50 g，动物合格证号：SCXK（沪）2013-0006）。

超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛（M DA）及过氧化氢酶（CAT）、蛋白定量测试试剂盒。

1.2 仪器与设备

755S紫外分光光度计，全波长酶标仪，A llegra X-22R台式冷冻离心机，BSA 224S电子分析天平。

1.3 方法

1.3.1 动物分组与处理

40只老年雄性昆明小鼠、10只青年雄性昆明小鼠，适应性喂养1周后，无不良反应，饮食饮水正常，体质量、体温、被毛、大小便及活动正常者纳入实验。将36只老年雄性昆明小鼠按体质量随机分为低剂量组、中剂量组、高剂量组、模型对照组，每组9只；9只青年雄性昆明小鼠设为空白对照组。低、中、高剂量组每只每天灌胃β-酪啡肽-7溶液0.5 m L，浓度分别为2×10-7，1×10-6，5×10-6mol/L；空白对照组和模型对照组按等体积质量分数为0.9%的生理盐水连续灌胃30 d，于末次用药后，禁食不禁水12 h，颈椎脱臼处死，取小肠黏膜组织进行各项指标检测。

1.3.2 样品的采集与处理

小鼠颈椎脱臼处死，沿腹部正中线切开，取靠近十二指肠段空肠约2 cm肠段，刮取肠黏膜，用浓度为0.01 mm o l/L的PBS（pH值为7.4，含浓度为0.01 mm ol/L苯甲基磺酰氟（PM SF）漂洗后，-70℃保存。测定时，准确称取组织重量，加入9倍生理盐水制成质量分数为10%的匀浆，在转速为3 500 r/min下离心10min，取上清液，-20℃保存，待测。

1.3.3 测定指标与方法

分光光度法测定CAT和MDA含量，W ST-1法测定SOD活性，具体步骤按试剂盒说明操作。

1.4 数据处理

实验结果用x±s表示，数据采用SPSS 19.0统计分析软件进行单因素方差分析，以P＜0.05判定为差异具有统计学意义，P＜0.01为差异极显著。

2 结 果

2.1 β-酪啡肽-7对老年小鼠肠黏膜抗氧化功能的影响

由表1可以看出，模型对照组小鼠肠黏膜SOD活性显著低于空白对照组（P＜0.01）；剂量组与模型组相比，低剂量组与中剂量组SOD活性都显著升高（P＜0.01），并且低剂量组比中剂量组升高较多，两组之间也存在显著性差异（P＜0.01），高剂量组SOD活性略低于模型对照组。

表1 β-酪啡肽-7对小鼠肠黏膜抗氧化功能的影响（n=9）

模型对照组小鼠肠黏膜M DA含量显著高于空白对照组（P＜0.01）；剂量组与模型组相比，低剂量组与中剂量组MDA含量都具有下降趋势，并存在差异性（P＜0.05），高剂量组M DA含量显著低于模型对照组（P＜0.01）。

模型对照组小鼠肠黏膜CAT活性显著低于空白对照组（P＜0.01）；剂量组与模型组相比，低剂量组CAT活性显著升高（P＜0.01），并且低剂量组比中剂量组升高较多，中、高剂量组CAT活性有升高趋势，但差异不具有显著性（P＞0.05）。

3 讨论

肠道为机体提供了一道天然防御屏障[6],营养物质营养并刺激肠黏膜上皮细胞，促进肠黏膜上皮细胞的生长和修复，有助于维持肠黏膜上皮细胞结构和功能的完整性，保护肠黏膜屏障功能[7]。酪蛋白在胃肠道消化酶的作用下,这些生物活性肽被释放出来,在调节胃肠道运动、调节免疫系统、清除自由基等方面发挥着重要作用[8-10]。

正常情况下，机体产生和清除自由基的能力保持平衡。但是随着年龄的增长，新陈代谢异常，出现各种代谢综合征[11]，使自由基大量产生，氧化和抗氧化平衡状态受到破坏。

丙二醛（MDA）是脂质过氧化作用而形成的的降解物[7]，测定其含量可反映机体组织氧化损伤的程度。由表1可知，老年小鼠肠黏膜M DA含量显著高于青年小鼠（P＜0.01），说明老年机体肠黏膜处于氧化应激的状态。低剂量组与中剂量组MDA含量都具有下降趋势（P＜0.05），高剂量组MDA含量显著低于模型对照组（P＜0.01）。印虹[12]的研究表明β-CM-7可以显著降低高血糖大鼠小肠黏膜M DA含量，缓解高血糖氧化应激对小肠黏膜的损伤，且高剂量组效果更明显，这与本研究结果一致。说明β-酪啡肽-7具有抑制MDA对机体组织造成损伤的作用，可以减轻老年机体氧化应激的水平。

超氧化物歧化酶（SOD）是超氧阴离子的特异清除剂，SOD的含量可以间接反映清除氧自由基的能力[13]。由表1可知，老年小鼠小肠黏膜SOD活性显著低于青年小鼠肠黏膜SOD活性（P＜0.01），显示老年小鼠抗氧化能力减弱。低、中剂量组能显著提高SOD活性（P＜0.01），说明β-酪啡肽-7能上调小肠黏膜SOD活力，增强其抗氧化应激的能力。Yin[5]的研究表明β-CM-7可以通过上调高血糖大鼠小肠黏膜SOD活性，缓解高血糖氧化应激对小肠黏膜的损伤，本研究也表明β-CM-7可以通过上调肠黏膜SOD活性。另外，低剂量组提高SOD活性效果比中、高剂量好，这与胡文琴[10]、赵亮[14]等人的研究结果不一致，其具体原因还需进一步探究。

过氧化氢酶（CAT）可以缓解过氧化氢对机体的损伤，也可以代表机体的抗氧化能力。由表1可知，老年小鼠肠黏膜CAT活性显著低于青年小鼠（P＜0.01）；低剂量组能显著提升小肠黏膜CAT活性（P＜0.01），说明β-酪啡肽-7能提高小肠黏膜的CAT活性，增强其抗氧化应激的能力。Y in[5]的研究表明β-CM-7可以通过上调高血糖大鼠小肠黏膜CAT活力，缓解高血糖引起的氧化应激，而本研究也表明β-CM-7可以通过上调小肠黏膜CAT活力。但是低剂量组提升小肠黏膜CAT活性比高剂量组效果较好的具体原因尚未明确，还需进一步探究。

4 结 论

机体衰老可以导致小肠黏膜处于氧化应激状态，而β-CM-7可以通过显著提高小肠黏膜SOD、CAT等抗氧化应激酶的活性，降低小肠黏膜中MDA的含量，减少过氧化引起的细胞损伤，增强小肠黏膜抗氧化应激的能力，提示β-CM-7对老年动物小肠黏膜有一定的保护作用，为接下来研究β-CM-7对老年动物小肠黏膜免疫的影响，探究黏膜免疫与自由基老化之间的关系提供了一定的基础。