22%螺虫乙酯·啶虫脒悬浮剂的高效液相色谱分析

刘卫荣

(江苏扬农化工股份有限公司，江苏扬州 225009)

螺虫乙酯(spirotetramat)化学名称为 4-(乙氧基羰基氧基)-8-甲氧基-3-(2,5-二甲苯基)-1-氮杂螺[4,5]癸-3-烯-2-酮，是德国拜耳公司开发的一种季酮酸类杀虫剂，是一种高效内吸且双向传导的杀虫剂，通过干扰昆虫的脂肪生物合成导致幼虫死亡[1-2]。啶虫脒(acetamiprid)化学名称为(E)-N-[(6-氯-3-吡啶基)甲基]-N′-氰基-N-甲基乙脒，是日本曹达株式会社开发的一种氯化烟碱类化合物，主要作用于昆虫神经系统突触后膜的乙酰胆碱受体及其周围的神经，从而使昆虫兴奋、麻痹而后死亡。药效试验证明，两者的复配制剂 22%螺虫乙酯·啶虫脒悬浮剂持效期长，杀虫谱扩大了，可有效防治农作物各种刺吸式口器害虫如蚜虫、蓟马、木虱、粉虱和介壳虫等，应用前景广泛。螺虫乙酯、啶虫脒单剂或与其他药剂复配制剂的分析方法已有报道[3-8]，但有关螺虫乙酯和啶虫脒两者复配制剂的液相色谱分析方法，目前尚未见公开报道。本文采用反相高效液相色谱法，使用Diamonsil C18柱和紫外可变波长检测器，以乙腈+水为流动相，在同一色谱条件下用外标法对有效成分进行分析和定量。该方法具有操作简便，快速，准确，分离效果好的特点，适用于产品质量的检测分析。

1 试验部分

1.1 仪器与试剂

高效液相色谱仪：Shimadzu LC-20A，具可变波长紫外检测器和自动进样器；色谱数据处理工作站；色谱柱：250 mm×4.6 mm (i.d.)不锈钢柱，内装Diamonsil C18填充物，粒径5 μm；超声波清洗器；微孔过滤膜：0.45 μm有机膜。

乙腈：色谱纯；水：新蒸二次蒸馏水；螺虫乙酯标样(质量分数98.0%)、啶虫脒标样(质量分数99.0%)：江苏扬农化工股份有限公司；22%螺虫乙酯·啶虫脒悬浮剂试样：江苏扬农化工股份有限公司研制。

1.2 色谱条件

流动相：乙腈+水=50+50(体积比)；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：220 nm；进样体积：2 μL；保留时间：啶虫脒约4.3 min，螺虫乙酯约9.7 min。典型的液相色谱图见图1、2。

图1 螺虫乙酯、啶虫脒标样液相色谱图

图2 22%螺虫乙酯·啶虫脒悬浮剂液相色谱图

1.3 分析步骤

1.3.1 标样溶液的配制

称取螺虫乙酯标样约0.05 g和啶虫脒标样约0.05 g (精确至0.000 2 g)，置于50 mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，超声振荡使试样溶解，冷却至室温，摇匀。

1.3.2 试样溶液的配制

称取试样约0.45 g (精确至0.000 2 g)，置于50 mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，超声振荡使试样溶解，冷却至室温，摇匀，用0.45 μm有机滤膜过滤后备用。

1.3.3 测定

在上述操作条件下，待仪器稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻2针螺虫乙酯(啶虫脒)的峰面积相对变化小于1.2%后，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

1.3.4 计算

将测得的2针试样溶液以及试样前后2针标样溶液中螺虫乙酯(啶虫脒)峰面积分别进行平均。试样中螺虫乙酯(啶虫脒)的质量分数X(%)按下式计算：

式中：A1为标样溶液中螺虫乙酯(啶虫脒)峰面积的平均值；A2为试样溶液中螺虫乙酯(啶虫脒)峰面积的平均值；m1为螺虫乙酯(啶虫脒)标样的质量(g)；m2为试样的质量(g)；w为标样中螺虫乙酯(啶虫脒)的质量分数(%)。

2 结果与讨论

2.1 色谱条件的选择

2.1.1 检测波长的选择

在190～400 nm波长范围内，对螺虫乙酯和啶虫脒标样溶液分别进行紫外光谱扫描，得到其相应的吸收波长与响应值的紫外吸收光谱图。当选用220 nm作为检测波长时，螺虫乙酯和啶虫脒均有较强吸收峰，2种有效成分在220 nm处的液相色谱图分离、峰形都很好，响应值和峰高比例都较为合适，且无杂质干扰，流动相无吸收，故选用了220 nm作为检测波长。

2.1.2 流动相的选择

试验选择Diamonsil C18色谱柱，分别试用不同比例的甲醇+水、乙腈+水作为流动相对试样进行分离检测。经过反复试验发现，用乙腈+水=50+50(体积比)作为流动相，流速控制在1.0 mL/min时，各组分之间能有效分离，无其他组分的干扰，2个有效组分的峰形尖锐，对称，且保留时间适中，因此选用了乙腈+水=50+50(体积比)作为流动相。

2.2 线性相关性测定

配制一系列不同质量浓度的螺虫乙酯(啶虫脒)标样溶液，按上述色谱操作条件，测定相应的响应值，以螺虫乙酯(啶虫脒)的质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标作图，得到螺虫乙酯(啶虫脒)的线性回归方程和相关系数。螺虫乙酯线性方程为y=5.587 9x－1.220 5，相关系数R2=0.999 7；啶虫脒线性方程为y=6.603 0x+12.384 9，相关系数R2=0.999 8。结果表明，该方法的线性关系良好。

表1 22%螺虫乙酯·啶虫脒悬浮剂测定方法的精密度

表2 22%螺虫乙酯·啶虫脒悬浮剂回收率测定

2.3 方法精密度测定

在上述色谱操作条件下，对同一个22%螺虫乙酯·啶虫脒悬浮剂样品进行5次平行测定，计算标准偏差和变异系数。结果得到螺虫乙酯和啶虫脒的标准偏差分别为0.083和0.072，变异系数分别为0.73%和0.64%(表1)。由此可知该方法精密度较高。

2.4 方法准确度测定

采用标准品添加法，在已知含量的22%螺虫乙酯·啶虫脒悬浮剂中加入一定量的螺虫乙酯、啶虫脒的标准品，按上述色谱操作条件进行测定，计算回收率。测得螺虫乙酯的回收率为99.24%～101.12%，平均回收率为100.18%；啶虫脒的回收率为98.63%～100.98%，平均回收率为99.56%(表2)。由此可知该方法准确度较高，满足定量分析要求。

3 结 论

试验结果表明，本文建立的22%螺虫乙酯·啶虫脒悬浮剂中有效成分含量的高效液相色谱分析方法，具有较高准确度和精密度，线性关系良好，分离效果好，并且操作简便、快速，适用于该产品生产过程的质量控制。