30%吡唑醚菌酯·克菌丹悬浮剂的高效液相色谱分析

2018-11-16刘润峰高敬雨

世界农药 2018年5期

潘静，刘润峰，东琴，高敬雨

(北京明德立达农业科技有限公司，北京 102206)

30%吡唑醚菌酯·克菌丹悬浮剂是由5%吡唑醚菌酯和25%的克菌丹及助剂配制而成。其中吡唑醚菌酯(pyraclostrobin)是具有吡唑结构的甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂，由德国巴斯夫公司于1993年开发。吡唑醚菌酯的作用机制独特，是一种线粒体呼吸抑制剂，通过阻止细胞色素b和c1间电子传递而抑制线粒体呼吸作用，使线粒体不能产生和提供细胞正常代谢所需要的能量(ATP)，最终导致细胞死亡[1]。吡唑醚菌酯具有杀菌谱广、毒性低、与环境生物相容性好的特点[2,3]。克菌丹(captan)是一种三氯甲硫基类多作用点的广谱保护性杀菌剂，化学名称为N-三氯-甲硫基-1,2,3,6-四氢苯邻二甲酰亚胺。克菌丹对疫病、炭疽病、霜霉病、白腐病及白粉病等病害具有较高的防效，可用于番茄、水稻、蔬菜、麦类、葡萄、玉米、马铃薯、苹果和棉花等多种作物[4,5]。

目前尚未见到吡唑醚菌酯和克菌丹悬浮剂复配制剂分析方法的公开报道，本文采用反相的高效液相色谱法，使用反相C18色谱柱，紫外可变波长检测器，对30%吡唑醚菌酯·克菌丹悬浮剂进行了分离和定量分析。该方法操作简便，分析速度快，且方法准确、可靠、重现性好，可以满足常规分析和生产中的质量控制。

1 试验部分

1.1 仪器和试剂

仪器：Agilent 1260高效液相色谱仪；紫外检测器；Agilent Chemstation色谱工作站；色谱柱：150 mm×4.6 mm (i.d.)不锈钢柱，内装ZORBAX SB-C18填充物，粒径5 µm；超声波清洗器；过滤器：过滤膜孔径0.45 µm。乙腈：色谱纯；水：新蒸二次蒸馏水；吡唑醚菌酯标样≥99.0%；克菌丹标样≥99.0%(两者均由北京明德立达农业科技有限公司提供)；30%吡唑醚菌酯·克菌丹悬浮剂(北京明德立达农业科技有限公司生产)。

1.2 色谱操作条件

流动相：乙腈-水(体积比65∶35)；检测波长：220 nm；流动相流速1.0 mL/min；进样量：5 µL；柱温：(25±2) ℃；保留时间：吡唑醚菌酯约为8.0 min，克菌丹约为4.0 min。吡唑醚菌酯和克菌丹的高效液相色谱图如下见图1、图2。

图1 吡唑醚菌酯、克菌丹标准样品的高效液相色谱图

图2 30%吡唑醚菌酯·克菌丹悬浮剂的高效液相色谱图

1.3 溶液配制

1.3.1 标样溶液的配制

分别称取吡唑醚菌酯标准品0.008 g、克菌丹标准品0.040 g (精确至0.000 2 g)，置于同一50 mL容量瓶中，加入20 mL流动相在超声波清洗器上超声溶解后，取出冷却至室温，用流动相定容，摇匀后备用。

1.3.2 试样溶液的配制

准确称取试样0.16 g (精确至0.000 2 g)，置于50 mL容量瓶中，加入20 mL流动相在超声波清洗器上超声溶解后，取出冷却至室温，用流动相定容，摇匀后静置，过滤后备用。

1.4 测定

在上述色谱条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，计算各针相对响应值，直至相邻2针的相对响应值小于1.5%时，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

1.5 计算

将测得的2针试样溶液以及试样前后2针标样溶液中的吡唑醚菌酯(克菌丹)峰面积分别进行平均。试样中吡唑醚菌酯(克菌丹)的质量分数X (%)根据下式计算：

式中：A1——标样溶液中，吡唑醚菌酯(克菌丹)峰面积的平均值；A2——试样溶液中，吡唑醚菌酯(克菌丹)峰面积的平均值；m1——吡唑醚菌酯(克菌丹)标样的质量，单位为克(g)；m2——试样的质量，单位为克(g)；P——标样中吡唑醚菌酯(克菌丹)的质量分数，%。

1.6 允许差

2次平行测定结果之差，吡唑醚菌酯、克菌丹分别应不大于0.3%、0.5%，取其算术平均值，作为测定结果。

2 结果与讨论

2.1 检测波长的选择

通过紫外-可见光分光光度计(日本岛津)分别对吡唑醚菌酯标样溶液、克菌丹标样溶液进行紫外扫描，得到吡唑醚菌酯和克菌丹在200 nm附近的最大紫外吸收，但是在275 nm处，吡唑醚菌酯有一较大紫外吸收，而克菌丹紫外吸收在275 nm处却较小；另外为了避免溶剂、助剂、杂质等的紫外干扰，因此将吡唑醚菌酯、克菌丹的检测波长定为220 nm。

2.2 流动相的选择

为了实现吡唑醚菌酯和克菌丹的有效分离，先后选择甲醇+水、乙腈+水、甲醇+0.3%冰乙酸水溶液、乙腈+0.3%冰乙酸水溶液等组合作为流动相进行试验。经多次配比试验后发现，选择体积比为65+35的乙腈和水作为流动相且流速为1.0 mL/min时，分离效果最好，峰形对称，保留时间适中，可以满足分析要求。

2.3 分析方法的线性关系曲线

分别称取吡唑醚菌酯标准品0.040 g、克菌丹标准品0.20 g (精确至0.000 2 g)，置于50 mL容量瓶中，加入20 mL流动相在超声波清洗器上超声溶解后，取出冷却至室温，用乙腈定容，摇匀后，用移液管分别准确移取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL于10 mL容量瓶中用乙腈溶解并定容，按上述色谱操作条件进行测定。以质量浓度为横坐标、峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程，吡唑醚菌酯y=17.495 7x+3.761 4，相关系数R2=0.999 5；克菌丹y=2.483 5x+17.826 5，相关系数R2=0.999 2，表明线性关系良好(图3、图4)。

图3 吡唑醚菌酯线性关系图

2.4 分析方法的精密度

在上述色谱操作条件下，对同一个样品平行测定 5次，吡唑醚菌酯和克菌丹的标准偏差分别为0.09、0.16；变异系数分别为1.73 %、0.63% (表1)。该方法的精密度能满足定量分析要求。

图4 克菌丹线性关系图

表1 30%吡唑醚菌酯·克菌丹悬浮剂精密度测定

2.5 分析方法的准确度

在已知含量的样品中加入一定数量的吡唑醚菌酯、克菌丹的标准品，按上述色谱操作条件进行测定，并计算回收率。测定的吡唑醚菌酯的回收率为98.30%～101.61%，平均回收率为99.57%；克菌丹的回收率为 99.36%～100.32%，平均回收率为 99.78% (表2)。该方法的准确度能满足定量分析要求。