p63与CD34在喉鳞状细胞癌早期诊断中的意义

高英恺　仲云　杨凡　王彬　曹艳丽31

[摘要] 目的 探讨p63与CD34在LSCC早期诊断中的意义。 方法 实验组方便选取该院2000年1月—2012年12月收治的喉鳞状细胞癌患者手术所留取的标本72例，选取癌旁组织作为照组1，选取正常喉部组织20例作为对照组2。应用免疫组化S-P法检测p63及CD34在LSCC、癌旁组织与正常喉组织的表达。结果p63阳性表达在喉癌组织、癌旁组织、正常喉黏膜3组中阳性率分别为83.3%（60/72）、15.3%（11/61）、0.0%（0/20），差异有统计学意义（χ2=85.31，P<0.01）。CD34-MVD在喉癌组织、癌旁组织、正常喉黏膜3组中分别为（25.60±5.76）、（17.80±4.69）、（9.30±2.20），差异有统计学意义（F=98.19，P<0.01）。 结论p63及CD34在喉癌组织高表达，可以作为喉癌早期诊断的指标之一。p63与CD34-MVD在LSCC表达密切相关。

[关键词] 喉鳞状细胞癌；p63；CD34；早期诊断；免疫组化；病理检查

[中图分类号] R856.76 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2018）06（c）-0031-03

[Abstract] Objective This paper tries to explore the significance of p63 and CD34 in the early diagnosis of LSCC. Methods In the experimental group， 72 specimens from patients with laryngeal squamous cell carcinoma who were treated in the hospital from January 2000 to December 2012 were convenient selected. The adjacent tissue was selected as the control group 1， and 20 normal laryngeal tissues were selected as control group 2. Immunohistochemical S-P method was used to detect the expression of p63 and CD34 in LSCC， adjacent tissues and normal laryngeal tissues. Results The positive rates of p63 expression in laryngeal cancer tissue， paracancerous tissue， and normal laryngeal mucosa were 83.3% （60/72）， 15.3% （11/61）， and 0.0%（0/20）， respectively. The difference was statistically significant（χ2=85.31， P<0.01）. The CD34-MVD in the laryngeal cancer tissue， paracancerous tissue， and normal laryngeal mucosa were （25.60±5.76）， （17.80±4.69）， and （9.30±2.20）， respectively， with significant differences （F=98.19， P<0.01）. Conclusion The high expression of p63 and CD34 in laryngeal carcinoma can be used as one of the indicators of early diagnosis of laryngeal cancer. P63 is closely related to CD34-MVD expression in LSCC.

[Key words] Laryngeal squamous cell carcinoma； p63； CD34； Early diagnosis； Immunohistochemistry； Pathological examination

p63基因在臨近喉癌组织的不典型增生的部位有明显的表达，提示其与喉部黏膜病变的早期阶段有关；CD34表达水平与肿瘤血管生成有相关性，可促进肿瘤血管内皮细胞增殖和恶性肿瘤生长的相关蛋白间的相互作用，促进恶性肿瘤的浸润和转移。该研究旨在探讨喉鳞状细胞癌（Laryngeal Squamous Cell Carcinoma，LSCC）组织中p63基因和CD34的表达及其与LSCC的发生、发展及预后的意义。方便选取该院2000年1月—2012年12月收治的喉癌患者72例，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

方便选取该院收治的喉癌患者所留取的标本72例，其中男67例，女5例，年龄自43～81岁，平均年龄（57.6±3.4）岁。所有患者手术前均未放疗、化疗以及其他抗癌治疗。根据肿瘤的初始发生部位：声门上型30例，声门型38例，声门下型4例。根据国际抗癌协会2002年第6版TNM分期：I期5例；II期12例；III期40例；Ⅳ期15例。根据喉鳞癌的分划程度：高分化即G1期20例、中分化即G2期29例、低分化即G3期23例；根据术后病理：有淋巴结转移47例，无淋巴结转移14例。选取癌肿旁切缘即癌旁组织作为照组1。选取正常喉部组织20例作为对照组2，其中：男17例，女3例，年龄：46～77岁，平均年龄为（56.8±.3.8）岁。

1.2 方法

诊断及分期标准：参照《中国恶性肿瘤诊治规范》（2002版）及《肿瘤影像学》（2005版）诊断，肿瘤分期参照UICC2002版。试剂：鼠抗人CD34单克隆抗体；鼠抗人p63单克隆抗体；S-P试剂盒。采用免疫组织化学S-P染色法，检测p63蛋白以及CD34-MVD表达。

1.3 统计方法

采用SPSS 19.0统计学软件分析数据。各组的MVD值采用（x±s）表示，两组独立样本均数比较采用t检验；多组独立样本均数比较采用单因素分析（one-way ANOVA）；两组率的比较采用χ2检验，多个样本率之间比较采用R×C χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

p63阳性表达在喉癌组织、癌旁组织、正常喉黏膜3组中阳性率分别为83.3%（60/72）、15.3%（11/61）、0.0%（0/20），差异有统计学意义（χ2=85.31，P<0.01）。

CD34 主要是在肿瘤组织边缘毛细小血管染色最明显，并在肿瘤组织的细小内皮血管细胞胞浆中表达从而把肿瘤组织的微血管染成比较深的棕褐色，而在组织大血管中不显色。CD34标记的MVD在喉癌组织、癌旁组织、正常喉黏膜3组中分别为（25.60±5.76）、（17.80±4.69）、（9.30±2.20），差异有统计学意义（F=98.19，P<0.01）。

p63的阳性表达与LSCC的分化程度、TNM分期及淋巴结是否转移均无明显相关。CD34的阳性表达与LSCC的TNM分期、是否淋巴结转移显著相关，差异具有统计学意义，而与肿瘤的分化程度无明显相关。淋巴结有转移同时临床分期为T3、T4患者的阳性表达率高于淋巴结无转移、临床分期为T1、T2者，其差异有统计学意义。见表1。

喉鳞状细胞癌中p63阴性者的MVD值（24.28±4.51），明显低于p63表达阳性者MVD值（28.36±5.09），差异有统计学意义（P<0.05）。

3 讨论

p63于1997年被Schmale等发现，主要表达于鳞状上皮源性的恶性肿瘤[1-2]，它不仅参与调节正常鳞状细胞的生长和分化，并在鳞癌的发生和发展中发挥作用。陈玮等[3]研究发现从正常宫颈黏膜上皮 、宫颈上皮内瘤变到浸润癌，p63 阳性表达率呈渐进性增高；韩晗等[4]研究宫颈鳞状细胞癌组织中p63显著高于正常宫颈组织。刘艳红等[5]免疫组化染色结果发现p63 在食管鳞癌细胞中的表达高于肿瘤周围组织。该研究结果显示，p63在LSCC中呈强阳性表达， 在癌旁组织和非癌组组织中呈弱阳性表达， 其阳性表达在喉癌组织、癌旁组织、正常喉黏膜3组中阳性率分别为83.3%（60/72）、15.3%（11/61）、（0/20），差异有统计学意义（P<0.01）。p63在喉鳞癌组织内的表达较正常组织高，与以往在其他部位鳞癌中的研究结论[3-7]相符，提示p63在喉鳞癌的发生和发展中起癌基因作用。p63基因的表达与肿瘤分期、病理分级、有无淋巴结转移等均无关，提示p63基因的表达增加是喉癌发生的早期事件。因此 p63可作为喉鳞状细胞癌的标记物，对喉癌的早期诊断和鉴别诊断有重要的临床意义。

肿瘤的侵袭、转移和生长依赖于新生血管生成。微血管密度（microvessel density， MVD）是指微血管计数，其可对血管进行定量分析，并且是评价肿瘤微血管生成最可靠的指標[8]。CD34主要定位于血管内皮的细胞质，胞质中有黄色或棕黄色染色为阳性。李丽晖等[9]通过免疫组化研究发现肝细胞癌患者的CD34 阳性表达水平显著高于良性肝细胞性病变患者；陈秋兰等[10]研究发现胃癌组织CD34的阳性表达率高于癌旁组。周红林等[11]发现肾细胞癌CD34标记的MVD 值高于肾正常组织。唐智等[12]研究鼻腔鼻窦鳞状细胞癌中以CD34标记微血管密度明显高于鼻腔鼻窦正常黏膜组织。该研究发现CD34标记的MVD在喉癌组织、癌旁组织、正常喉黏膜3组中分别为（25.60±5.76）、（17.80±4.69）、（9.30±2.20），差异有统计学意义（P<0.01）。CD34的阳性表达与LSCC的TNM分期、是否淋巴结转移显著相关，差异有统计学意义。而与肿瘤的分化程度无明显相关。淋巴结有转移同时临床分期为T3、T4患者的阳性表达率高于淋巴结无转移、临床分期为T1、T2者，差异有统计学意义。

p63与CD34在LSCC的发生、发展中起重要作用， 对LSCC的早期诊断和鉴别诊断有重要的临床意义，并可作为判断LSCC预后的一个指标。p63与CD34在喉肿瘤的发展进程中是否有协同作用有待增加样本作进一步的研究。

[参考文献]

[1] Geddert H，Kiel S，Heep HJ，et al.The role of p63 and delta Np63（p40）protein expression and gene amplification in esophageal carcinogenesis[J].Human Pathology，2003，34：850-856.

[2] Massion PP，Tatlam PM，Jamshrdur Rahman SM，et al.Signific ance of p63amodification and overexpression in lung cancer development and prognosis[J].Cancer Res，2003，63（21）：7113-7121.

[3] 陈玮，赵涌.p63和Ki67在CIN及宫颈癌组织中的表达及意义[J].现代肿瘤医学，2017，25（2）：273-275.

[4] 韩晗，张广美，韩延华，等.中期因子、p63α在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达及其意义[J]蚌埠医学院学报，2017，42（11）：1465-1468.

[5] 刘艳红，范林妮，陈玲，等.RSK4与p63在食管鳞状细胞癌中的表达及其与患者临床病理特征的相关性研究[J].现代肿瘤医学，2015，23（6）：781-785.

[6] KouwenhovenEN， VanBokhovenH， Zhou H. Gene regulatory mechanisms orchestrated by p63 in epithelial development and related disortiers[J].Biochimicaet Biophysicaacta， 2015， 1849（6） ：590-600.

[7] Esheba GE， Hassan AA. Comparative immunohistochemical expression of β-catenin， EGFR， ErbB2， and p63 in adamantinomatous and papillary craniopliaryngiomas[J].J Egyptian National Cancerlnstitute，2015，27（3）：139-145.

[8] Yasuyoshi Miyata， Kensuke Mitsunari， Akihiro Asai， et al. Pathological Significance and Prognostic Role of Microvessel Density Evaluated Using CD31，CD34， and CD105 in prostate CancerPatients After Radical Prostatectomy With Neoadjuvant Therapy[J]. Prostate，2015，75（1）： 84-91.

[9] 李麗晖，许锦文.Glypican-3和CD34免疫组化染色在肝细胞癌与良性肝细胞性病变鉴别诊断中的价值[J].临床医学工程，2017，24（12）：1707-1708.

[10] 陈秋兰，张鹏，宋宗民，等.ID3、VEGF和CD34在胃癌组织中的表达及临床意义[J].江苏医药，2017，43（11）：806-808.

[11] 周红林，陈曦，田红伟，等.癌胚抗原相关细胞黏附分子1与CD105和CD34标记肿瘤微血管密度在肾细胞癌中的表达及意义[J].中华实用诊断与治疗杂志，2017，31（11）：1076-1079.

[12] 唐智，孙瑾，王继群，等.鼻腔鼻窦鳞状细胞癌中以CD34标记微血管密度的测定[J]. 广东医学，2013，34（22）：3443-3445.

（收稿日期：2018-03-26）