白萝卜提取物对大鼠术后早期炎性肠梗阻血清炎症因子及胃肠动力的影响
2018-11-10肖志强钟卫权刘其龙
肖志强 钟卫权 刘其龙
[摘要]目的 观察白萝卜提取物对术后早期炎性肠梗阻大鼠血清炎症因子及胃肠动力的影响。方法 选取24只成年SD大鼠按照随机数字表法分为三组,每组各8只,采用肠管表面擦拭法建立术后早期炎性肠梗阻模型。生理盐水组(NS组)、白萝卜提取物组(Rex组)及莫沙必利组(Mos组)分别予以生理盐水、白萝卜提取物及莫沙必利灌胃1 ml/100 g一周,每天2次。采用ELISA方法检测血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子(TNF-α)含量,并观察小肠推进情况。结果 Rex组的hs-CRP、IL-6、IL-8、TNF-α表达水平显著低于NS组和Mos组,差异有统计学意义(P<0.05)。Rex组的回肠黏膜损伤评分显著低于NS组和Mos组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Rex组大鼠的24 h小肠推进比明显高于NS组和Mos组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 白萝卜提取物可以降低炎性肠梗阻大鼠的血清炎症因子水平,促进小肠蠕动增加,为治疗术后肠梗阻提供新的理论基础。
[关键词]术后早期炎性肠梗阻;炎症因子;胃肠动力;白萝卜提取物
[中图分类号] R282.71 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2018)7(b)-0004-04
[Abstract] Objective To investigate the effects of Raphanussativus extract on serum inflammatory factor and gastrointestinal motility in rats with early postoperative inflammatory small bowel obstruction (EPISBO). Methods Twenty-four adult SD rats were randomly divided into three groups according to random number list method, with eight rats in each group. The EPISBO models were generated by wiping the wall of rat′s small intestine and subsequently were given gastriclavage (twice/day) with saline group (NS group), Raphanussativus extract group (Rex group) and moxabili group (Mos group) 1 ml/100 g for one week. The serum high sensitivity C-reactive protein (hs-CRP), interleukin-6 (IL-6), interleukin-8 (IL-8) and tumor necrosis factor (TNF-α) were measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and gastrointestinal motility was studyed. Results The expressions of hs-CRP, IL-6, IL-8, TNF-α in Rex group were significantly lower than that in NS group and Mos group, and the differences were statistically significant (P<0.05). The lleal mucosal injury score in Rex group was significantly lower than that in NS group and Mos group, and the differences were statistically significant (P<0.05). The 24 h small intestinal transit ratio in Rex group was significantly higher than that in NS group and Mos group, and the differences were statistically significant (P<0.05). Conclusion Rex can reduce serum inflammatory factor level and promote small bowel peristalsis in rats with inflammatory intestinal obstruction.
[Key words] Early postoperative inflammatory small bowel obstruction; Serum inflammatory factor; Gastroin-testinal motility; Raphanussativus extract
術后早期炎性肠梗阻(early postoperative inflammatory small bowel obstruction,EPISBO)指发生在腹部手术后早期(通常为术后1~2周内),由于腹部手术创伤或腹腔炎症等原因导致肠壁水肿和渗出形成的一种机械性与动力性同时存在的粘连性肠梗阻,其造成梗阻的原因主要来自肠管本身,即肠壁充血水肿造成的管壁增厚及肠腔狭窄,同时合并肠蠕动障碍[1]。
白萝卜味辛、甘,性凉,在功效上具有消积热、化痰热、下气、宽中、解毒的作用,可用于食积胀满、呃噎反胃等症。白萝卜提取物(Raphanussativus extract,Rex)可促进大鼠十二指肠、空、回肠动力,而以回肠收缩最明显,并存在剂量-效应关系,也可明显加快鼠小肠炭餐通过时间[2]。实验表明[3-5],Rex能够使大鼠胃电的振幅增高,胃及十二指肠电活动的慢波频率和振幅明显增加,血浆胃动素水平明显升高,能够使大鼠胃排空加快,促进小肠消化间期移行性复合运动。Rex对梗阻病变引起的动力障碍小肠有促进其蠕动的作用,显著提高了肠平滑肌收缩的频率和强度,使整体肠运动活力得到提高,肠道平滑肌收缩波形也规则稳定,肠道蠕动功能得到良好改善,并且也能减轻肠道损伤程度。基于上述理论,本研究通过建立大鼠EPISBO模型,给予Rex灌胃治疗后,检测大鼠血液中炎性因子血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子(TNF-α)含量的变化,测量小肠中阿拉伯胶活性炭粉混合物的推进距离,为治疗EPISBO提供新的理论基础,也为临床非手术治疗EPISBO提供新的思路,现报道如下。
1材料与方法
1.1材料
清洁级成年雌性SD大鼠,体重220~320 g,共24只,由中山大学实验动物中心提供,许可证号:SYXK(粤)2007-0081。hs-CRP、IL-6、IL-8和TNF-α的ELISA试剂盒由上海茁彩生物科技有限公司,批号分别为201601、201604、201511、201607。使用仪器包括:RE-52AA型旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂);Modulyo D-230型冷冻干燥机(Thermo Electron Corporation);Bio Mate-3S分光光度计(Thermo Fisher Scientific);680酶标仪(BIO-RAD,USA)。
1.2方法
1.2.1 Rex制备 采用卫青萝卜(Raphanus root)榨汁后,将残渣转至容器中,加入适量蒸馏水,密闭,常温下静置3 d,倾取上层清液,压榨药汁,并与之前收集的滤液混合,静置24 h过滤,取滤液置于旋转蒸发器中,40~45℃旋转蒸干,得稠膏,将稠膏置冷冻干燥机中冻干,得绿色药粉,即Rex,称取质量,计算提取率。提取率=制得提取物质量(g)/原料质量(g)×100%。将制备得到的提取物外用锡纸包装密封,避光于-4℃冰箱保存。
1.2.2动物分组及建模 SD大鼠,每笼2只,实验前3天购入,使其适应实验室环境,给予标准饲料饲养,实验前12 h开始禁食。手术均在清洁级的环境中进行,所有的手术操作均由同一组人员完成。参考文献步骤[6],以0.3%戊巴比妥钠溶液1 ml/100 g体重腹腔注射进行麻醉。大鼠腹部脱毛、消毒后,取腹部正中切口长3 cm,进腹后以纱块由近端向远端轻轻擦拭全部小肠,共5次,并暴露于空气中30 min后逐层缝合关腹。手术后24 h之内,大鼠可自由饮水,但分次逐步恢复进食。
1.2.3动物模型治疗 造模成功后,使用随机数字表将动物分为3组,每组各8只。分别予以生理盐水(NS)、Rex及莫沙必利(Mos)灌胃(1 ml/100 g)1周,每天2次,灌胃后可自由饮水。
1.2.4标本处理 实验前后对各组大鼠尾静脉取血,离心,将血清置于-80℃冰箱中保存。造模后7 d,以0.3%戊巴比妥钠溶液1 ml/100 g体重腹腔注射进行麻醉,取回盲部上方4 cm处小肠1 cm行组织学检查。
1.2.5大鼠小肠推进比的测定 根据活性炭染色长度计算小肠推进比。各組动物最后一次灌胃后30 min灌入0.4 ml的2%活性炭,24 h后脱颈处死大鼠,开腹取出全部小肠,量取幽门括约肌至色素最前端及至盲肠的距离,以二者之比为小肠推进比。
1.2.6 HE染色 将小肠组织固定于10%中性甲醛,石蜡包埋、切片,HE染色,于光镜下观察。由两位病理医生盲法进行。组织学评分采用Chiu肠黏膜损伤评分标准[7]。
1.2.7炎症因子浓度测定 采用ELISA试剂盒测定hs-CRP、IL-6、IL-8和TNF-α的浓度,步骤严格按照说明书进行。
1.3统计学方法
采用SPSS 19.0统计学软件进行数据分析,计量资料用均数±标准差(x±s)表示,多组建比较采用单因素方差分析,进一步组间两两比较采用LSD法,以P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1大鼠一般情况及组织形态学表现
所有动物实验前正常。造模期间,大鼠多数反应迟缓,食量减少,排便少,少部分一般情况差,活动减少,精神萎靡。实验结束时,打开腹腔,见大鼠肠管水肿明显,出现粘连,颜色苍白,肠管内积气积液,肠管管径变小。经Rex治疗,动物饮食、精神状态较好,梗阻情况及粘连较轻。
2.2各组大鼠血清hs-CRP、IL-6、IL-8和TNF-α表达水平的比较
Rex组大鼠的血清hs-CRP、IL-6、IL-8和TNF-α表达水平均显著低于NS组和Mos组,差异均有统计学意义(P<0.05)(表1)。
2.3肠组织HE染色
2.3.1各组大鼠肠黏膜损伤镜下评分的比较 Rex组的回肠黏膜损伤评分为(2.26±0.54)分,显著低于NS组的(3.40±0.57)分和Mos组的(2.97±0.65)分,差异均有统计学意义(P<0.05)。
2.3.2组织病理改变情况 HE染色结果提示,REX组大鼠的回肠组织间质轻微水肿,绒毛界限轻微模糊,NS组、Mos组大鼠的回肠黏膜上皮细胞肿胀,界限不清,偶有坏死、脱落,黏膜下层、肌层及浆膜层明显瘀血,毛细血管明显扩张,并有大量炎症细胞浸润(图1)。
2.4各组大鼠24 h小肠推进比的比较
Rex组大鼠的24 h小肠推进比为(69.13±8.37)%,明显高于NS组的(55.24±7.88)%和Mos组的(66.50±6.21)%,差异有统计学意义(P<0.05)。
3讨论
白萝卜作为食源性植物,有很好的理气、顺气作用,传统中医认为,白萝卜味辛、甘,性凉,在功效上具有消积热、化痰热、下气、宽中、解毒的作用,可用于食积胀满、呃噎反胃等症。Jung等[2]研究发现,Rex可促进大鼠十二指肠、空、回肠动力,而以回肠收缩最明显,并存在剂量-效应关系,也可明显加快鼠小肠炭餐通过时间。实验表明[3-5],Rex能够使大鼠胃电的振幅增高,胃及十二指肠电活动的慢波频率和振幅明显增加,血浆胃动素水平明显升高,能够使大鼠胃排空加快,促进小肠消化间期移行性复合运动,但其作用机制尚不清楚。
术后早期炎性肠梗阻指发生在腹部手术后早期,由于腹部手术创伤或腹腔炎症等原因导致肠壁水肿和渗出形成的一种机械性与动力性同时存在的粘连性肠梗阻[1]。炎性肠梗阻在肠管粘连的同时,还合并有肠壁炎症、水肿和渗出及其造成的肠腔狭窄、闭塞和肠麻痹。EPISBO治疗方法主要是肠外营养,同时辅助生长抑素,必要时加用糖皮质激素,在肠蠕动恢复阶段还可应用肠动力药以促进梗阻肠道运动功能的恢复[7-14]。EPISBO的发病机制迄今尚不完全明确,但近年来研究已证实,EPISBO患者由于手术损伤或术中肠管暴露时间过长引起腹腔内无菌性炎性反应性吸收,手术操作激活了肥大细胞并释放出大量炎性介质,导致肠壁通透性增加及细菌易位,并引起级联反应继续巨噬细胞,巨噬细胞再诱导释放大量炎症因子和趋化因子,导致组织器官的损伤并影响胃肠道的收缩及传导功能,其中IL-6、IL-8、TNF-α发挥重要作用[15-16],引起肠壁黏膜局部炎症反应,肠黏膜的通透性明显增加,发生炎症渗出及水肿。肠壁水肿进一步导致hs-CRP、IL-6、IL-8和TNF-α等炎性因子大量分泌与释放,从而进一步导致肠道黏膜细胞膜通透性上升,加剧肠腔内液体的积聚,加重患者的病情,形成恶性循环,且其病情的严重程度与hs-CRP和TNF-α等炎症因子水平异常密切相关[17-20]。
本探究结果提示,大鼠EPISBO后,肠黏膜细胞完整性受损,且发生了明显的炎症反应,血清中hs-CRP、IL-6、IL-8和TNF-α等炎性因子升高,通过Rex治疗后,Rex组的hs-CRP、IL-6、IL-8、TNF-α表达水平显著低于NS组和Mos组,差异有统计学意义(P<0.05),可见血清中炎性因子下降,Rex组的回肠黏膜损伤评分显著低于NS组和Mos组,差异均有统计学意义(P<0.05),Rex组大鼠的24 h小肠推进比明显高于NS组和Mos组,差异有统计学意义(P<0.05),说明Rex可以通过抑制肠梗阻后的炎症反应,保护小肠黏膜与结果的完整性,从而促进肠道运动功能的恢复。Gilani等[21]的研究结果提示,Rex的不良反应轻微,用药安全可靠,但是EPISBO病理生理变化复杂,Rex成分多样且可能还有其他的生物学作用,如对胃肠激素,氧化应激的影响等,不能在本实验中得到验证,有待今后更加深入的研究来进一步阐明,以明确Rex所含的组分、各组分的药理作用及其用于治疗EPISBO的作用机制。因此,相信随着对Rex研究的不断深入,有可能为术后炎性肠梗阻的治疗提供新的理论基础。
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(收稿日期:2018-03-13 本文编辑:孟庆卿)