枫香根中水晶兰苷定性定量分析方法研究

2018-11-09黄琳芸黄瑞松陆峥琳

中国中医药信息杂志 2018年9期

黄琳芸黄瑞松陆峥琳

摘要：目的建立枫香根中水晶兰苷的定性定量分析方法。方法采用薄层色谱法对枫香根中水晶兰苷进行定性鉴别。采用HPLC测定样品中水晶兰苷含量，色谱柱为依利特SinoChrom ODS-BP柱（4.6 mm×250 mm，5 ?m），流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液（1∶99），检测波长为235 nm，流速为1.0 mL/min，柱温为25 ℃，进样量为10 ?L。结果薄层色谱法可鉴别出水晶兰苷。水晶兰苷在0.150 1～1.501 0 ?g（r=0.999 8）范围内线性关系良好，平均回收率为95.93%（RSD=0.60%）。10个不同产地枫香根中水晶兰苷含量在0.20%～1.15%之间。结论该方法操作简便、稳定可靠、重复性好，可作为枫香根药材质量控制方法。

关键词：枫香根；水晶兰苷；薄层色谱法；高效液相色谱法

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2018.09.020

中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2018）09-0083-03

Abstract： Objective To establish qualitative and quantitative methods for analyzing monotropein in Liquidambaris Radix. Methods Monotropein in Liquidambaris Radix was identified by using TLC. The contents of monotropein in the samples were determined by HPLC on an SinoChrom ODS-BP column （4.6 mm × 250 mm， 5 ?m） with methanol-0.1% phosphoric acid solution （1：99） as the mobile phase at the flow rate of 1.0 mL/min； the detection wavelength was 235 nm； the column temperature was 25 ℃； the injection volume was 10 ?L. Results Monotropein in Liquidambaris Radix could be identified by TLC. Monotropein showed good linear relation in the range of 0.150 1– 1.501 0 μg （r=0.999 8）， and the average recovery rate was 95.93% （RSD=0.60%）. The contents of monotropein in Liquidambaris Radix from 10 different producing areas were among the range of 0.20%–1.15%. Conclusion The method is simple， stable， reliable and reproducible， which can be used for the quality control of Liquidambaris Radix.

Keywords： Liquidambaris Radix； monotropein； TLC； HPLC

枫香根为金缕梅科植物枫香树Liquidambar formosana Hance的干燥根，又名枫果根、杜东根[1]，为广西壮族和瑶族常用药材。壮医认为其具有调龙路、火路，利谷道，祛风毒，除湿毒的功效，可用于治疗发旺（痹病）、呗农（痈肿）、呗叮（疔）等[2]；瑶医认为其具有祛风除湿、活血散瘀、消肿止痛、解毒、行气、止痒功效，可用于治疗风湿痹痛、腰肌劳损、手足无力、产后风瘫、跌打损伤、肠炎、痢疾、痈疮肿毒、乳腺炎等[3]。枫香树主要分布于我国秦岭及淮河以南各省，广西各地均有分布。据文献报道，枫香树主要含有萜类、黄酮类、挥发油、鞣质类等化学成分[4]。现代药理研究表明，枫香树具有抑菌、止血、保肝、抗血栓等作用[5-7]，其中环烯醚萜苷成分水晶兰苷具有明显抗炎、镇痛作用[8-9]，为枫香树的主要药效物质。

有关枫香树的药用，2015年版《中华人民共和国药典》收载其树脂及成熟果序，药材名分别为“枫香脂”和“路路通”。枫香根在国家药典和广西地方标准均未见收载，使该药材的质量控制无标准可依，给临床用药和生产、流通带来诸多问题。为此，本研究采用薄层色谱法和HPLC对不同产地枫香根中的水晶兰苷进行定性定量分析，为枫香根药材质量标准的制订提供依据。

1 仪器与试药

Agilent 1260高效液相色谱仪（美国安捷伦公司），LC-20AT高效液相色谱仪（日本岛津），UV-2401PC紫外光谱仪（日本岛津公司），XS205 DualRange电子分析天平（瑞士梅特勒公司），KQ-300DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），Master-S15纯水器（上海和泰公司）。

枫香根药材采集于广西10个不同地区，经广西中医药研究院黄云峰副研究员鉴定为金缕梅科植物枫香树Liquidambar formosana Hance的干燥根。水晶兰苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号111870-201303，供含量测定用），甲醇（Fisher公司，色谱纯），磷酸（天津市光复精细化工研究所，色谱纯），水（纯化水），其余试剂均为分析纯。硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂分厂，批号20131118）。

2 方法與结果

2.1 薄层色谱鉴别

取本品粉末1 g，加80%乙醇20 mL，超声处理30 min，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取水晶兰苷对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（2015年版《中华人民共国药典》四部0502）试验，吸取供试品溶液3～4 ?L、对照品溶液2 ?L，分布点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-醋酸-水（7∶1∶3）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰，置可见光下检视。结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的灰蓝色斑点。经多批样品试验，薄层色谱斑点清晰，重现性好，可以作为枫香根药材的定性鉴别方法。

2.2 含量测定

2.2.1 对照品溶液的制备

精密称取水晶兰苷对照品7.88 mg，置于50 mL棕色量瓶中，用水溶解并稀释到刻度，摇匀，备用。

2.2.2 供试品溶液的制备

称取枫香根粉末（过4号筛）0.2 g，精密称定，置50 mL具塞锥形瓶中，精密加入水20 mL，称定质量，在60 ℃水浴中提取30 min，放冷，再称定质量，用水补足减失的质量，摇匀，用0.45 ?m微孔滤膜过滤，取续滤液，作为供试品溶液，备用。

2.2.3 色谱条件

色谱柱：依利特SinoChrom ODS-BP（4.6 mm×250 mm，5 ?m）；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液（1∶99）；检测波长：235 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：25 ℃；进样量：10 ?L[10]。样品中水晶兰苷与其他成分分离度>1.5，按水晶兰苷峰计算理论塔板数大于5000。色谱图见图1。

2.2.4 线性关系考察

精密吸取水晶兰苷对照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分别置于5 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，得系列浓度对照品溶液。分别精密吸取10 ?L，按上述色谱条件注入色谱仪，测定峰面积，以进样量（?g）为横坐标，峰面积为纵坐标，进行回归计算，得回归方程Y=1300.5X+7.226 6，r=0.999 8，水晶兰苷在0.150 1～1.501 0 ?g范围内呈良好的线性关系。

2.2.5 精密度试验

精密吸取同一份供试品溶液，按上述色谱条件连续进样6次，测定水晶兰苷的峰面积并计算，结果RSD=0.56%，表明方法精密度良好。

2.2.6 稳定性试验

精密吸取同一份供试品溶液10 ?L，分别于制备后0、2、4、8、10、14、24 h进样测定，计算水晶兰苷峰面积的RSD=0.57%，结果表明供试品溶液中水晶兰苷在室温条件下24 h内基本稳定。

2.2.7 重复性试验

精密称取同一批枫香根样品粉末（过4号筛）6份，按上述供试品溶液制备方法，制得6份供试品溶液，按上述色谱条件测定峰面积并计算，结果测得水晶兰苷平均含量为0.82%，RSD=0.52%，表明本方法重复性良好。

2.2.8 加样回收率试验

取已知水晶兰苷含量的枫香根药材粉末6份，每份约0.1 g，精密称定，分别精密加入水晶兰苷对照品溶液（0.043 8 mg/mL）20 mL，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进样分析，计算回收率，结果见表1。

2.2.9 样品含量测定

取10个不同产地枫香根药材粉末各2份，每份0.2 g，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，并按上述色谱条件测定水晶兰苷含量，结果见表2。

3 讨论

水晶兰苷易溶于乙醇、甲醇、含水醇溶液和水，本研究分别考察了以甲醇和水作为溶剂的提取效率，对比水浴加热提取、超声提取2种提取方法，确定以水为提取溶剂，提取方法为水浴加热提取。在此基础上，采用正交设计方法，对药材破碎度（过2、3、4号筛）、提取时间（30、45、60 min）、提取温度（60、80、100 ℃）进行三因素三水平考察，最终确定供试品溶液的制备方法为：药材粉末过4号筛，在60 ℃水浴中提取30 min。

本研究在系统性试验过程中，经过多次选择条件，最后采用流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液（1∶99），流速1.0 mL/min，可达到较好的分离效果，杂质干扰少，灵敏度高，且峰形对称，保留时间适中。在HPLC耐用性考察中，考察了同类型不同厂牌色谱柱对供试样品的分离情况，结果表明，Phenomenex Luna C18柱（250 mm×4.6 mm，5 ?m）及Sapphire C18柱（250 mm×4.6 mm，5 ?m）色谱柱的测定结果均较好。与此同时，对柱温（25、30、35 ℃）和流速（0.8、1.0、1.2 mL/min）进行了考察，结果表明，柱温对分离度影响不大，流速1.0 mL/min对对照品和供试品溶液的分离效果最好。

目前，对枫香树的研究多集中在叶、成熟果序、树脂上，对根的研究甚少，为保证枫香根药材临床用药安全有效，本研究以水晶兰苷为指标成分建立枫香根的定性定量分析检测方法，该方法操作简便、专属性强、重复性好，可为该药材质量标准的建立提供可靠依据。

参考文献：

[1] 国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草：第三册[M].上海：上海科学技术出版社，1999：744.

[2] 黄瑞松.壮药选编：上册[M].南宁：广西科学技术出版社，2015：210.

[3] 覃迅云，罗金裕，高志刚.中国瑶药学[M].北京：民族出版社，2002：397-398.

[4] 姜平川.楓香的研究概况[J].广西医学，1998，20（2）：240-242.

[5] 刘志林，倪士峰，刘惠，等.枫香成分及其生物学活性研究进展[J].西北药学杂志，2009，24（6）：513-515.

[6] 郭建华，田成旺，刘晓，等.中药环烯醚萜类化合物研究进展[J].药物评价研究，2011，34（4）：293-297.

[7] 袁惠，付辉政，钟瑞建，等.枫香树叶的化学成分[J].中国实验方剂学杂志，2014，20（13）：102-106.

[8] 郑礼胜，刘向前.环烯醚萜类研究进展[J].天然产物研究与开发， 2009，21（4）：702-711，725.

[9] 姜志宏，周荣汉，河野功.枫香树皮中的环烯醚萜成分[J].中草药， 1995，26（8）：443.

[10] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M].北京：中国医药科技出版社，2015：324.